Разнообразные клинические проявления бруцеллеза приводят к необходимости широкого использования лабораторных методов исследования: бактериологического, биологического, серологического и аллергического. Комплекс лабораторных исследований с обязательным учетом клинических, эпидемиологических и эпизоотологических данных обеспечивает правильную диагностику заболевания.
Работа по выделению и дифференциации бруцелл из любого исследуемого материала должна проводиться в строгом соответствии с санитарными правилами СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
Бактериологический метод.Для исследования на бруцеллез в лабораторию поступает патологический материал от больных людей (кровь, мокрота, гной, суставная жидкость, пунктат из селезенки, моча), сельскохозяйственных животных (абортированный плод, лимфатические узлы, паренхиматозные органы, кровь, моча, молоко, молочные продукты) и различные объекты окружающей среды (вода, навоз). Материал для исследования забирают в стерильную посуду.
Для выделения культур бруцелл всех видов используют печеночные и мясопептонные агары в различных модификациях, агар Альбими, сухие питательные среды — агар «Д» и эритрит агар. Посев материала производят на качественные, предварительно проверенные питательные среды, выращивают при 37 °С в аэробных условиях и с повышенным (5-10 %) содержанием углекислого газа.
Исследование крови необходимо проводить во время лихорадочного состояния больного до лечения антибиотиками, так как в этот период наблюдается наибольший процент выделения культур. Кровь в количестве не менее 10 мл стерильно берут из локтевой вены и засевают по 5 мл в два флакона среды Кастанеда. Начиная с четвертого дня, посевы ежедневно просматривают и, при отсутствии роста культуры, поверхность агара орошают бульоном путем осторожного покачивания флакона. При положительном результате на поверхности агара появляются колонии бруцелл. Если в течение месяца роста бруцелл не обнаруживают, то делают контрольный высев из бульона среды Кастанеда на твердую питательную среду.
При обследовании людей на бруцеллез для удобства доставки флаконов с кровью можно пользоваться транспортной жидкой средой, которую готовят заранее и хранят в лаборатории в течение полугода. Кровь доставляют в лабораторию в транспортной среде, засевают на среду Кастанеда и исследуют по общепринятой схеме.
Бруцеллы можно выделить из костного мозга, мочи, спинномозговой жидкости, грудного молока, желчи, мокроты, трупного материала и т. д. Исследуемый материал по 0,1 мл засевают на пластинки питательного агара и по 5-10 мл на жидкие питательные среды. Для задержки роста посторонней микрофлоры при исследовании загрязненного материала к среде добавляют генцианвиолет (1:200 000) или антибиотики (пенициллин 0,25 ед/мл и стрептомицин 0,05 ед/мл).
Особого внимания заслуживает получение культуры из молока сельскохозяйственных животных. Забор молока у овец, коров, верблюдов и коз рекомендуется проводить путем сдаивания его последних порций из каждого соска вымени по 10 мл в стерильную посуду. Если исследовать молоко в течение первых суток не удается, то его консервируют добавлением сухой борной кислоты 1 %, генцианвиолета 1:25 000. Для исследования молока из больших емкостей забирают 100 мл верхнего слоя, затем перемешивают и набирают еще 100 мл.
Лучшие результаты дает посев сливок, полученных центрифугированием молока при 2,5-3 тыс. об/мин в течение 3-5 мин или путем отстаивания в течение одних суток в холодильнике. Сливки в количестве 0,1-0,2 мл засевают на твердую питательную среду с подавителем посторонней микрофлоры (4-6 пробирок на 1 пробу).
Бактериологический метод считается самым достоверным, т. к. выделение бруцелл является неопровержимым доказательством бруцеллезной инфекции. Отрицательные результаты бактериологического исследования не дают права для заключения об отсутствии заболевания.
Биологический метод.Для выделения бруцелл из материала, загрязненного посторонней микрофлорой или содержащего малые концентрации возбудителя, в качестве биологической пробы используют морских свинок (весом 250-300 г) или белых мышей (весом 17-18 г). Исследуемый материал в объеме не более 0,5 мл вводят подкожно в паховую область белой мыши и 1 мл морской свинке.
Вскрытие белых мышей производят через 20-25 дней, а морских свинок — через 30-35 дней после введения материала. Перед вскрытием у свинок кровь из сердца исследуют в реакции агглютинации. Для посевов у морских свинок берут лимфатические узлы (паховый, подчелюстной, шейный, парааортальный), кусочки селезенки, печени, костный мозг, кровь, мочу; у белых мышей — лимфатические узлы (паховый, аксиллярный, парааортальный, подчелюстной), кусочки селезенки и печени. Лимфатические узлы, кусочки печени и селезенки помещают в стерильную чашку. Костный мозг извлекают пипеткой из рассеченной бедренной кости. Посевы крови из сердца, мочи и костного мозга производят стерильной пипеткой непосредственно на питательную среду (агар и бульон). Лимфатические узлы и органы перед посевом надсекают ножницами, берут стерильной деревянной палочкой, вносят первоначально в пробирку с агаром, раздавливают и тщательно втирают материал в поверхность питательной среды. Затем остатки посевного материала переносят в пробирку с бульоном. Палочка должна быть длиной 25-30 см, диаметром 4-5 мм, хорошо отструганная, с несколько заостренным концом. После использования ее погружают на 1 час в дезраствор.
Все посевы дублируют (часть помещают в условия повышенного содержания углекислоты), выдерживают при 37 °С до 30 дней. Для предотвращения высыхания питательных сред пробирки заливают парафином или закрывают резиновыми колпачками.
Посевы просматривают каждые 3-4 дня. Из помутневших бульонов делают высев в пробирки со скошенным агаром. Колонии бруцелл на пластинчатом агаре становятся видимыми на 5-7 сутки, иногда позднее. По истечении 30 дней наблюдение прекращают. Если за это время рост не появился, посевы уничтожают, а результаты бактериологического исследования считают отрицательными.
Результат оценивают положительно при выделении хотя бы одной колонии бруцелл. Идентификацию возбудителя бруцеллеза проводят по: по характеру роста культуры на плотных питательных средах; морфологии микроба в мазках, окрашенных по Граму, Козловскому; агглютинации со специфической бруцеллезной сывороткой на стекле и объемным методом; свечению на 3-4+ культур, обработанных бруцеллезной люминесцирующей сывороткой.
Культуры предварительно проверяют на наличие признаков диссоциации, одним из перечисленных выше методов.
Дифференциации (определение видов и биоваров) подлежат культуры в S-форме после идентификации.
Подкомитетом по таксономии бруцелл Международного комитета номенклатуры бактерий и Объединенным комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу в 1972 г. были определены единые тесты для проведения идентификации и дифференциации бруцелл для всех стран мира.
О видовой принадлежности культуры бруцелл и биоварах судят на основании результатов комплексного изучения отношения выделенных культур к условиям выращивания (при повышенном содержании углекислоты или в обычных аэробных условиях), чувствительности к анилиновым краскам (бактериостатическим методом), способности образовывать сероводород, чувствительности к бруцеллезному фагу «Тb», окислительно-метаболических тестов, агглютинабельных свойств культур с использованием монорецепторных сывороток (антиабортус и антимелитензис) и дополнительного исследования уреазной активности, вирулентности и других признаков. Дифференциацию бруцелл на виды и биовары проводят в параллельных опытах испытуемых штаммов с референтными всех трех видов бруцелл.
Серологические и аллергические методы исследования на бруцеллез.Серологические реакции и аллергическая проба являются общедоступными методами и применяются для диагностики бруцеллеза наряду с бактериологическим и биологическим методами.
В случае малой обсемененности пробы и отрицательных результатов, полученных при посеве исследуемого материала на питательные среды и заражении лабораторных животных, серологический метод может быть единственным, позволяющим диагностировать бруцеллез. В зависимости от целей исследования используют те или иные серологические методы.
При проведении эпидемиологического исследования в очагах применяют реакцию агглютинации пластинчатую (Хеддльсона) и объемную (Райта), реакцию Кумбса, РСК, РДСК, РПГА, кожную аллергическую пробу, иммуноферментный анализ (ИФА). Перед профилактической вакцинацией населения можно ограничиться постановкой пластинчатой реакции агглютинации (Хеддльсона) и кожной аллергической пробы.
Для диагностики острого и подострого бруцеллеза ставят реакцию Хеддльсона, Райта и РПГА. В случаях отрицательного результата используют реакцию Кумбса.
При диагностике хронического бруцеллеза и проведении диспансерного наблюдения за переболевшими рекомендуют наряду с реакциями Хеддльсона, Райта, РПГА, использовать реакцию Кумбса и аллергическую пробу (Бюрне).
Серологические реакции и аллергическая кожная проба по своему диагностическому значению в различные периоды заболевания не равноценны, вследствие чего не могут заменить друг друга. Это обусловливает необходимость применения комплексного серологического метода, являющегося наиболее надежным способом диагностики бруцеллеза.
В ранние сроки от начала заболевания (первые 6 месяцев) диагностическая ценность серологического метода выше, чем аллергического. Серологические реакции в этот период оказываются положительными почти в 95 % случаев. По мере удлинения срока заболевания процент положительных серологических реакций начинает снижаться. При проведении обследования необходимо учитывать, что высокие титры антител всегда указывают на наличие инфекции, антитела в низких титрах или их полное отсутствие не исключает возможности заболевания. В связи с этим рекомендуется проводить повторные исследования с интервалом 1-2 недели, особенно при подозрении на острую форму бруцеллеза.
Для постановки диагноза бруцеллеза у крупного рогатого скота применяют серологические и аллергические методы. Обследование начинают с постановки роз-бенгал пробы (РБП). Сыворотки, с которыми получена положительная РПБ, исследуют в РА Райта, РСК (РДСК), РПГА для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител. Исследование проводят двукратно с промежутком в 30 дней.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ
Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; Нарушение авторского права страницы
источник
Реакция Хеддельсона — один из методов экспресс-диагностики бруцеллеза. Достаточно проста в проведении, не занимает много времени, не требует особых условий. Может применяться с первых дней заболевания.
Для проведения анализа берется кровь из пальца исследуемого, капельки сыворотки крови помещаются на предметное стекло в количестве четырех штук. Далее в исследуемый материал капается бруцеллезный диагностикум, кроме последней капли — это контрольная, в нее добавляется физраствор. В случае появления хлопьев — реакция агглютинации на стекле считается положительной.
Бруцеллез — повсеместно распространенная инфекция, источником заражения которой являются домашние животные. Это заболевание отличается многообразием путей передачи, склонностью к хроническому течению и способностью поражать многие органы и системы человека.
В сельских хозяйствах основным способом передачи является контактный и аэрозольный. Заражение, в основном, происходит во время ухода за мелким и крупнорогатым скотом, свиньями и оленями (стрижка, уборка сараев, прием родов и т.д.). Жители городов чаще заражаются алиментарным путем при употреблении в пищу козьего или коровьего молока, не прошедшего этап кипячения, а также брынзы и плохо проваренного мяса зараженных животных.
Бруцеллез протекает с периодами повышения температуры до критических цифр, однако состояние больного в эти моменты особо не страдает. Лихорадка принимает волнообразный характер, сопровождается болями в мышцах и суставах. Могут поражаться нервная и сердечно-сосудистая системы. Опасен бруцеллез развитием выкидышей на ранних сроках и формированием женского и мужского бесплодия. При отсутствии лечения заболевание может привести к инвалидности.
Реакция Хеддельсона проводится людям в местах вспышек бруцеллеза для выявления зараженного контингента.
Недостаток этого метода в большом проценте ложноположительных результатов. Однако простота и скорость методики позволяют выявить людей, которых необходимо направить на более тщательное исследование.
Реакция Хеддельсона — анализ качественный. Результат может быть положительным или отрицательным.
Если агглютинация появилась в трех или двух каплях из четырех исследуемых — результат считается положительным. Только в одной — сомнительный результат.
Агглютинация во всех каплях отсутствует- реакция отрицательная, бруцеллез не обнаружен.
При положительных и сомнительных результатах пациенты должны быть направлены на другие исследования, которые окончательно подтвердят или опровергнут наличие бруцелл в организме.
Анализ типирования Вопрос: Здравствуйте. Я из г.Сочи. Хотел узнать у вас можно получить анализ типирования. данные HLA групп В и DR. Сколько это стоит? И какой срок исполнения.Спасибо!
Ответ: Здравствуйте! Стоимость услуги «Молекулярно-генетическое исследование: HLA-типирование 1 пациента (II класс) (по локусам DRB1, DQA1, DQB1)» -5500 руб. Срок выполнения до 10 рабочих дней.
График работы Вопрос: Можно ли сдать :копрограмму, общий анализ крови и узи брюшной полости 5 января 2019? В какое время?
Ответ: Здравствуйте! Анализы Вы можете сдать с 7.30 до 14.00 без предварительной записи. На УЗИ Вам необходимо записаться по телефону 8-800-770-07-34
Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн
Добрый день!
Опишу ситуацию.
Содержу коз в количестве 15гол, на участке, безвыпасно, траву не кошу, животные только на сене, контактов у моих животных с другими МРС не было, мои животные доступ за пределы участка не имеют. При проведении планового исследования на бруцеллез в 2014г все результаты отрицательные, после этого ввоза животных в мое хозяйство не было.
Весной 2015 года планового исследования не было, а провели его в октябре 2015г(возможно это был эпизоотический мониторинг) При этом в нашем населенном пункте выявлено четыре положительнореагирующих животных МРС. В том числе мое животное, козочка, рожденная в моем хозяйстве в 2014 г. Мать ее отр, козел, ее крывший — отр, пятеро коз, живших с ней в одной стайке на протяжении более 1 года, — отр. Результаты РА 1:200, Рид положит. Мы с муже уже тоже сдали на бруцеллез — отриц.
В нашей местности до этого ни разу за обозримые года не было выявлено ни одного случая заболевания бруцеллезом.
Козочка на момент исследования была беременна со сроком 2 мес. Помимо этого до беременности была обезрожена, но пошло инфицирование пазух, после проведения антибиотикотерапии состояние улучшилось. Но возможно очаг инфекции в пазухах остался., так как коза опять стала пугливой и голову трогать не дает.
После выявления, козочка была изолирована. Все оставшееся поголовье повторно исследовано, все отрицательно, вчера сделали уже второй забор крови.
Провести повторное исследование положительно среагировавщего животного мне отказали. Выписали предписание на убой.
Я за свои средства провела исследование цельной крови в ПЦР, результат отрицательный.
Имели ли право мне отказать в повторном исследовании животного? При этом, диагноз установила лаборатория. Никто из врачей не выезжал в мое хозяйство, не проводил исследование ситуации. Все мои попытки провести повторное исследование встретили категорический отказ. Более того передать всю ругань, что я услышала в свой адрес, невозможно, врач эпизоотолог совершенно неадекватна.
Других положительно реагирующих животных уже забили, вскрытие ветсанэкспертом никаких изменений не выявило, пат материал на исследование, естесственно, никто не отправлял. При этом все замалчивается, скрывается, никто ничего не знает. Даже о том, что пришли результаты повторных анализов мне не сообщили.
Может ли это быть ложноположительная реакция в связи с беременностью, с воспалительным процессом?
Какие действия мне можно предпринять для установления диагноза?
Зарегистрирован: 19/03/2014 14:43:40
Сообщений: 544
Оффлайн
Аннв М. wrote: Добрый день!
Опишу ситуацию.
Содержу коз в количестве 15гол, на участке, безвыпасно, траву не кошу, животные только на сене, контактов у моих животных с другими МРС не было, мои животные доступ за пределы участка не имеют. При проведении планового исследования на бруцеллез в 2014г все результаты отрицательные, после этого ввоза животных в мое хозяйство не было.
Весной 2015 года планового исследования не было, а провели его в октябре 2015г(возможно это был эпизоотический мониторинг) При этом в нашем населенном пункте выявлено четыре положительнореагирующих животных МРС. В том числе мое животное, козочка, рожденная в моем хозяйстве в 2014 г. Мать ее отр, козел, ее крывший — отр, пятеро коз, живших с ней в одной стайке на протяжении более 1 года, — отр. Результаты РА 1:200, Рид положит. Мы с муже уже тоже сдали на бруцеллез — отриц.
В нашей местности до этого ни разу за обозримые года не было выявлено ни одного случая заболевания бруцеллезом.
Козочка на момент исследования была беременна со сроком 2 мес. Помимо этого до беременности была обезрожена, но пошло инфицирование пазух, после проведения антибиотикотерапии состояние улучшилось. Но возможно очаг инфекции в пазухах остался., так как коза опять стала пугливой и голову трогать не дает.
После выявления, козочка была изолирована. Все оставшееся поголовье повторно исследовано, все отрицательно, вчера сделали уже второй забор крови.
Провести повторное исследование положительно среагировавщего животного мне отказали. Выписали предписание на убой.
Я за свои средства провела исследование цельной крови в ПЦР, результат отрицательный.
Имели ли право мне отказать в повторном исследовании животного? При этом, диагноз установила лаборатория. Никто из врачей не выезжал в мое хозяйство, не проводил исследование ситуации. Все мои попытки провести повторное исследование встретили категорический отказ. Более того передать всю ругань, что я услышала в свой адрес, невозможно, врач эпизоотолог совершенно неадекватна.
Других положительно реагирующих животных уже забили, вскрытие ветсанэкспертом никаких изменений не выявило, пат материал на исследование, естесственно, никто не отправлял. При этом все замалчивается, скрывается, никто ничего не знает. Даже о том, что пришли результаты повторных анализов мне не сообщили.
Может ли это быть ложноположительная реакция в связи с беременностью, с воспалительным процессом?
Какие действия мне можно предпринять для установления диагноза?
Добрый день.
Могу Вам только посочувствовать. Но, боюсь, ваша козочка инфицирована. У коз положительным считается РА 1:100, а тут еще и РИД положительный. Что касается ПЦР крови, то это бессмысленный анализ, так как бруцелла находится в крови очень короткое время, в момент острой фазы. Далее она локализуется в суставах, половых органах. Поэтому, как правило, ПЦР крови всегда отрицательный. Показательным он будет при исследовании смывов с влагалища или абортированных плодов.
Так что, советую, поплакать и быстро забить и утилизировать .
И радоваться, что остальное стадо здорово. Я ж правильно понял, что повторные анализы тоже отрицательны? И люди здоровы! Бруцелла мелитензис очень вирулентна, заболеть можно на раз. Не лечится. Человек сразу получает инвалидность. Что касается повторного исследования положительно реагирующего животного, то инструкциями и руководствами это не предусмотрено, опять же из-за опасности заражения.
На счет замалчивания — это вряд ли. У Вас должен быть наложен карантин на весь поселок.
И есть вопрос — а почему Вы не вакцинируете свое стадо?
Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн
Во-первых, забор крови провели в нарушение Ветеринарных правил ВП 13.3.1302-963. 2.2.3. Коров (нетелей), буйволиц и верблюдиц исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок через 1-2 месяца после окота или опороса, молодняк животных всех видов — с 4-месячного возраста. Хотя были предупреждены, что животные беременны.
А в инструкции О МЕРОПРИЯТИЯХ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛИКВИДАЦИИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ в разделе диагностика бруцеллеза есть пункт
2.6. В случае, когда в благополучном по бруцеллезу стаде (на ферме) при плановом исследовании от отдельных животных сывороток крови в РА (в том числе при переисследовании проб, положительных по РБП, но отрицательных по РСК) получен положительный результат — у крупного рогатого скота и лошадей в титре не более 200 международных единиц (МЕ), у буйволов, овец, коз и свиней — 100 МЕ, таких животных немедленно изолируют и через 15 — 20 дней дополнительно исследуют на бруцеллез комплексно серологическими (РА и РСК или РДСК) и аллергическим (кроме лошадей) методами. Одновременно этими же методами исследуют остальных животных стада (фермы).
Если при повторном исследовании в стаде (отаре) не выявлено реагирующих и отсутствуют другие признаки, вызывающие подозрение на заболевание животных бруцеллезом (аборты и проч.), а у исследованных ранее животных титр антител в РА не повысился, РСК (РДСК) и аллергическая проба окажутся отрицательными, то стадо считают благополучным в отношении бруцеллеза.
Более того в этой же главе написано, что даже если произошли аборты, делается бакисследование, животные полож реагируют, то их исследуют повторно!
Но ветеринары, сказали,что это не действующая(!) инструкция.
Почему такая перестраховка? Когда брали кровь на ПЦР, я покупала вакуумные прбирки, ни капли крови не было. Да и когда первично брали кровь, что не было угрозы, когда еще не знали о результатах?
У нас местность БЛАГОПОЛУЧНА и до этого скрининга не было НИ ОДНОГО положительного животного, более того даже сомнительного. Почему я должна прививать животных от того, чего отродясь у нас не было. У нас Ханты-Мансийский округ, не сельхоз район, не было бруцеллеза. И откуда он мог взятся лично в моем хозяйстве — это загадка. А доводы врачей, что типа с ногами занесли, я в сарай в уличной обуви не бегаю, да и три другие положительные головы живут за чертой города, а я в черие на другом конце от их всех. Общих стад у нас нет, пастбищ нет. Да и мои вообще за калитку не выходят.
На данный момент на мое хозяйство наложено ограничение. Так как они нарушили правила и взяли кровь у беременной козы, то мне ветинспектор написал письмо, что я должна содержать животное изолированно и через 2 мес после окота провести анализ. Я предложила во время родов, соблюдая осторожность, собрать околоплодные воды и оболочки плодов для исследования ПЦР или бак исследования. Мне заявили, что делать не будут и эти анализы не являются для них показательными.
Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн
Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн
И для чего то пишут такие рекомендации
МИНИСТЕРСТВО
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РСФСР
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА
И ИЕРСИНИОЗА И МЕРЫ ПО ИХ ПРОФИЛАКТИКЕ.
РЕКОМЕНДАЦИИ.
При проведении плановых диагностических исследований животных на
бруцеллез в благополучных по этой болезни зонах обычно применяют реакцию
агглютинации (РА) или Роз бенгал пробу (РБП). При этом, особенно в весеннее
время, при исследовании сыворотки крови отдельных незараженных и не вакциро-
ванных против бруцеллеза животных с бруцеллезными антигенами могут быть
получены неспецифические результаты реакций. Обычно появление таких реакций
обусловлено глубокой беременностью, стрессами, прививками против других болезней
или носительством близкородственных в антигенном отношении грамотрицательных
микроорганизмов (пастерелл, сальмонелл, кампилобактерий,иерсиний и др.), а также
рядом других причин. Как правило, уровень выявляемых при этом агглютининов не
превышает 100 МЕ у свиней и овец и 200 МЕ у крупного рогатого скота, за исключением
случаев, когда животные являются носителям микроорганизмов из группы иерсиний,
в частности иерсинии энтероколитика серовара 0:9.
Оценка подобных показаний РА в ранее благополучных по бруцеллезу хозяйстах,
учитывая возможность заноса инфекции и длительного бессимптомного
болезни, затруднена и требует дополнительной расшифровки. В этих целях рекомендуется
использовать комплекс показателей, предусмотренных Инструкцией о мероприятиях по
профилактике и ликвидации бруцеллеза животных, утвержденной бывшим Главным
управлением ветеринарии Госагропрома СССР 10.11.88 г., в том числе:
эпизоотологические данные, проявление клинических признаков болезни, сроки
иммунизации против других болезней, результаты исследований другими методами
(бактериологическим, РДСК, РСК, реакцией аллергии) и повторного (через 15-20 дней)
исследования сывороток крови этих и остальных животных данного стада (отары).
Практический опыт показыват, что комплекс дополнительных исследований в
большинстве случаев позволяет подтвердить или исключить наличие бруцеллезной
инфекции в хозяйстве (на ферме). Однако при этом нередко требуются значительные
затраты рабочей силы, времени и материальных средств на проведение ограничительных
мероприятий и для окончательного уточнения диагноза. В связи с этим быстрое
выявление и искоренение возникшего очага бруцеллезной инфекции, а также недопущение
неоправданного убоя скомпрометированных групп скота при выявлении гетероспецифических
серологических реакций с бруцеллезными диагностикумами имеют большую эпизоотологическую
и экономическую значимость.
Зарегистрирован: 19/03/2014 14:43:40
Сообщений: 544
Оффлайн
Я, правда, на вашей стороне.
Но обращу Ваше внимание на следующее.
Ветеринары правы, инструкция есть уже давно другая. Можете посмотреть ее на этом же сайте http://www.fsvps.ru/fsvps/laws/168.html#5
Повторные анализы проводятся при получении условно-положительного результата (сомнительного). Да и в «рекомендациях», которые Вы приводите, указано, что титр не должен превышать 1:100. А у Вас 1:200. Это много, для возможной ошибки.
Криворуких в лабораториях много, но не все же?
Вы можете обратиться лично в любую другую лабораторию и сделать у них независимый анализ (РА, РИД). Втихаря. Никто запретить не сможет. Если ничего не случится.
Что касается околоплодных вод и т.п., то тут, мне видится так: если коза больна, то родов не будет. Будет аборт. А если родит, то — здорова. Плоды и прочее, по условиям карантина Вы никуда вывезти не сможете. Это уже подсудное дело.
Почему перестраховка? Почитайте внимательно про энту болячку, встаньте на их место и ответьте — будете ли вы рисковать своим (и чужим) здоровьем и работой ради какой-то чужой козы? Или даже не ради козы, а просто?
Что касается источника болезни, то тут много путей. Я ж не знаю всей истории Вашей козы и стада. Кто крыл, кто роги пилил и чем. Вам должно быть видней. Но, как правило, когда садишься и спокойно анализируешь, находится причина, о которой даже подумать бывает странно. Увы. Ну не спроста ж Вы не единственный случай оказался.
Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн
Кровь можно взять в вакуумные пробирки, сыворотку тоже можно отделить, соблюдая правила. А по поводу плодных оболочек. После убоя все равно ветсанэксперт будет разделывать тушу, брать пат материал, ту же матку, плоды для бак исследования. И также я их повезу для исследования и за свои деньги. А так я еще б и ПЦР сделала. В чем разница? Почему нельзя сделать при жизни?
А насчет риска, ветеринар — это такая работа. Знаешь на что идешь.
Вот как то, так. Не подумайте, что нападаю, просто вопросов больше чем ответов. Все очень неоднозначно.
Зарегистрирован: 19/03/2014 14:43:40
Сообщений: 544
Оффлайн
Тест-системы должны быть чистыми. А что касается «бактериологических исследований», то, как мне известно, их нигде не делают! Ввиду большой опасности для персонала. Исключением, видимо, являются НИИ.
Да все можно. Согласен. Найдите ветеринара, любого, скажите ему про диагноз (обязательно!!) и попросите взять анализы Никаких проблем.
Ветсанэксперт — это не Вы, он имеет на это полномочия. Ну и сделайте ПЦР. Кстати, исследования на бруцеллез при возникновении очага проводятся за счет государства. И ПЦР они могут сами сделать.
На счет того, что ветеринар=камикадзе, не уверен.
Зарегистрирован: 19/03/2014 14:43:40
Сообщений: 544
Оффлайн
Да, на всякий случай, есть еще Наставления по бруцеллезу от 2003 года (вроде). Там ПЦР считается абсолютно достоверной при однократном исследовании. Правда, есть оговорка, что ее используют для уточнения серологии. И, опять же, не по крови! Хотя, вру, там кажется не уточняется.
А в целом так — если Вы абсолютно уверены, что коза здорова, то делайте независимый анализ. Если будет отрицательным — то бейтесь с управлением.
Это сообщение было редактировано 1 раз. Последнее обновление произошло в 17/12/2015 15:34:25
Зарегистрирован: 17/12/2015 08:41:34
Сообщений: 10
Оффлайн
Наверное,я сделаю запрос в Департамент ветеринарии, о том какие нормативные документы действительны. Если инструкция недействительна, почему ее мне зачитывал заместитель в департаменте ветеринарии?
Чтоб не быть голословной и не основываться на том, чего нет.
А бак исследования делают во всех лаборатория, сколько обзвонила, никто не отказал.
Не имею права самостоятельно взять, кровь должен брать вет врач, составить сопроводительную., подтвердить этим, что взято от конкретного животного. Может я совсем от другого могу взять. Это типа защита от подлога.
Они от забитых животных патматериал не взяли, не то что ПЦР сделали.
А про Наставление они вообще слышать не хотят, это для лабораторий типа только. А там.
1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных.
Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию.
Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. (Я писала об этом ветврачам, им пофиг, они не руководствуются наставлением)
4.2.5. Диагностическая оценка реакции агглютинации
Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сывороткой крови крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), верблюдов и лошадей, не иммунизированных или иммунизированных неагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), содержащей 200 ME антител и выше; овец и коз — 100 ME и выше; оленей (маралов) и собак — 50 ME и выше; пушных зверей и морских свинок — 10 ME и выше.
При выявлении среди не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, а также иммунизированных неагглютиногенными вакцинами крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей, животных, реагирующих только в РА с содержанием антител 50-100 ME, а среди овец, коз, оленей (маралов), собак — 25 ME, считают сомнительно реагирующими и исследуют повторно через 15-30 сут. При повышении титров заболевание считают установленным. При сохранении титров на прежнем уровне проводят дополнительные исследования по дифференциации, согласно утвержденным методам.
При выявлении в стадах крупного рогатого скота, ранее иммунизированного против бруцеллеза агглютиногенными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), животных, реагирующих только в РА с содержанием не выше 200 ME антител и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1:10, их повторно исследуют через 15-30 сут в РА, РСК и РИД. При повышении содержания антител в исследуемых сыворотках в РА и (или) РСК или положительной РИД заболевание считают установленным.
При выявлении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, ранее не иммунизированных или иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, животных, положительно реагирующих в РА с содержанием 100 ME антител и выше, признают больными. Реакцию считают сомнительной при содержании 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительного результата животных признают больными бруцеллезом.
При исследовании в РА неиммунизированных баранов-производителей, козлов, пробников и ярок, содержащихся в благополучных по бруцеллезу отарах, где овцы (козы) иммунизированы против бруцеллеза, реакцию считают положительной, а заболевание установленным при содержании в сыворотке крови животных 100 ME антител и выше. Реакцию считают сомнительной при наличии 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительных результатов животных признают здоровыми, а отару — благополучной по бруцеллезу.
ВИдите, есть понятие положительное и больное. Под какой пункт подпадает мой случай и написано диагноз считают установленным? По реакции РА в благополучном хозяйстве нельзя поставить диагноз бруцеллез.
А что с такими животными делают?
5. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА
5.1. Тест-система предназначена для выявления ДНК бактерий рода Brucella (B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis) в биологическом материале от животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, в случае аборта или проявления у них других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты), вызывающих подозрение на бруцеллез, и (или) при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования. (Ага, вуаля?)
5.2.3. Для исследования используют следующий патматериал:
— содержимое брюшной полости и желудка, селезенку, печень абортированного плода или весь плод;
— плаценту и плодовые оболочки от абортировавших животных;
— содержимое бурс, гигром;
— кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных, в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела;
— сперму от самцов с признаками орхита и эпидидимита и (или) при получении сомнительных или положительных результатов аллергического или серологического исследования на бруцеллез или инфекционный эпидидимит баранов;
— в случае убоя животных для исследования отбирают парные лимфатические узлы подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые и кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка); от самцов с признаками орхита или эпидидимита отбирают семенники с придатками.
5.6. Оценка результатов
При положительном результате ПЦР, зарегистрированном при исследовании хотя бы одной пробы материала, животное считают больным бруцеллезом.
Нигде не написано, что ПЦР является неинформативной.
К основным методам диагностики бруцеллеза относятся реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК) и реакция длительного связывания комплемента (РДСК).
Реакция агглютинации (РА). РА является основным методом диагностики бруцеллеза у сельскохозяйственных животных в СССР. Техника постановки реакции изложена в специальной инструкции. РА, как установил Бордэ, протекает двухфазно. Первая фаза — это соединение антитела с антигеном или гаптеном. Эта фаза визуально не определяется, в связи с чем подбираются условия для косвенного ее определения. Установлено, что первая фаза может протекать при отсутствии электролитов (солей), тогда как вторая фаза при таких же условиях протекать не может. При этом оказалось, что активность проявления второй фазы РА зависит от концентрации солей в разбавителе. Вместе с этим было установлено, что чем менее активный иммунный сывороточный глобулин, тем большая концентрация соли требуется в растворе.
При исследованиях, проведенных «в проблемной лаборатории ЛВИ, было установлено, что иммуннуе сыворотки крови отдельных видов животных проявляют в реакции агглютинации свою иммунологическую активность неодинаково в зависимости от концентрации хлорида натрия, вводимого в качестве разбавителя компонентов РА. Так, например, если иммунные бруцеллезные сыворотки крупного рогатого скота проявляют иммунологическую активность по РА в 0,25%-ном растворе хлорида натрия, то для получения аналогичных показателей реакции у овец нужно их иммунную бруцеллезную сыворотку исследовать по РА в 7—20%-ной концентрации раствора хлорида натрия. Поэтому мы предложили (1953) исследовать сыворотки крови овец на бруцеллез по РА в 10%-ном растворе хлорида натрия вместо 0,85%-ного раствора. 13 широкой практике было показано, что РА в 10%-ном растворе хлорида натрия способствует выявлению большего количества больных овец в неблагополучных отарах, а феномен положительной реакции представляется более отчетливым.
РА для исследования на бруцеллез может быть совершенствована также за счет антигена. По данным Альтона (1971), с иммунными сыворотками против Br. melitensis титры в РА с антигеном Br. melitensis были в 3,6 раза выше, чем с антигеном из штаммов Br. abortus + Br. suis (показана кратность самого низкого титра РА с антигеном Br. abortus и Вг, suis к самому высокому титру в РА с антигеном Br. melitensis). Средние данные следующие. Антигены Br. abortus (Br. suis) дали титры в 2,4 раза выше, чем антиген Br. melitensis с иммунными сыворотками против Br. abortus, и в 2,6 раза выше с иммунными сыворотками против Br. suis. С иммунными сыворотками против Br. melitensis РА с антигенами Br. melitensis показывала титры в 3 раза выше, чем с антигенами Br. abortus и Br. suis.
При исследовании сывороток крупного рогатого скота, инфицированного Вт. melitensis, результат был аналогичен. Часто кратные величины были настолько большими, что, сравнивая результаты РА, можно было ставить диагноз у крупного рогатого скота на бруцеллез за счет антигена Br. melitensis. Все препараты, использованные в этом опыте, были стандартизированы по прямой методике для интернациональной стандартной бруцеллезной сыворотки. Антиген Br. melitensis для РА, по данным автора, может быть использованв практике не только для овец, но и для крупного рогатого скота в районах Средиземного моря и других районах, где распространен бруцеллез и овец и крупного рогатого скота.
Комитет экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу (1971 г.) рекомендует выражать результаты пробирочных реакций агглютинации с сывороткой крови в международных единицах (ME). Для этой цели в центральной лаборатории Вейбридж изготовлена стандартная Anti Brucella abortus сыворотка (ISAbS).
Первая международная единица бруцеллезной сыворотки должна быть равна 0,091 мг сухого вещества, содержащегося в 1 мл сыворотки, изготовленной лабораторией Вейбридж. Эта лаборатория по заданию Комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ приготовила сыворотку, которая была принята как стандарт экспертами ФАО/ВОЗ по бруцеллезу на втором заседании во Флоренции в октябре 1952 г. (сообщение 1953 г.).
Сухая стандартная первая интернациональная бруцеллезная сыворотка содержала 91 мг сухого вещества в 1 мл. Так как интернациональная единица в 1000 раз меньше обычной, то сухая сыворотка содержит, следовательно, 0,091 мг сухого вещества стандартной (первой) сыворотки (Квибридж). Следовательно, первый стандарт сыворотки — это 1000 интернациональных единиц; одна десятая стандарта равна 100 ИЕ и т. д.
Но в разных странах по-разному готовят антиген и учитывают РА. Поэтому сравнительный результат благодаря этой системе удовлетворяет как тест, но имеет второстепенное значение, поскольку РА применяется для диагностики бруцеллеза, а не для сравнения результатов. Поэтому была предложена (ФАО/ВОЗ) в масштабе всего мира «система единиц» (1957 г.). В основу этой системы положен титр агглютинации антигена (данной страны) международной стандартной сывороткой.
При таком критерии примеры следующие. Допустим, что в любой лаборатории титр стандартной сыворотки с местным антигеном равен 1 : 500, значит, по международному критерию при исследовании этим же антигеном сывороток при их титре 1 : 500 они будут содержать 1000 ИЕ. Если титр сывороток с местным антигеном 1 : 400, а со стандартной сывороткой 1 : 500, то тогда титр исследованной сыворотки по международному критерию будет равен 1 : 800 и так далее. Здесь применима следующая формула расчета: ab/c, где а — постоянная величина — 1000 ME; b — титр сыворотки, полученный с местным антигеном (в нашем примере 1 : 400); с — титр сыворотки, полученный с местным антигеном и стандартной сывороткой (в нашем примере 1 : 500).
В данном случае титр агглютинации антигена равен: (1000*400)/500 = 800 ME
Положительный результат считается, если сыворотка крови имеет агглютинационный титр 100 ИЕ в 1 мл. Для животных, вакцинированных вакциной из штамма № 19, титр повышается вдвое, т. е. до 200 ME.
В 1963 г. состоялось объединенное заседание Комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ, где было принято решение выражать уровень агглютининов в международных единицах на 1 мл сыворотки крови или молока (МЕ/мл).
К 1965 г. первая стандартная сыворотка, приготовленная в количестве 1000 ампул лабораторией Вейбридж и содержащая 91 мг сухого вещества в 1мл, была исчерпана. Поэтому Комитет экспертов ФАО/ВОЗ по биологической стандартизации (1968 г.) поручил той же лаборатории изготовить новую стандартную сыворотку.
Новая сыворотка после широкой апробации в разных лабораториях была принята в качестве второго международного стандарта. Она содержит в 1 мл в среднем 95,52 мг сухого вещества, а международная единица — в тысячу раз меньше, т. е. 0,0955 мг сухого вещества. Из всех расчетов сохранились те, которые указаны для первой стандартной сыворотки.
Стандартная сыворотка, полученная на гладкий штамм Br. abortus биотипа 1, содержит преимущественно IgG-антитела. Выпускаемый в СССР стандартный антиген для РА подтитрован по количеству микробных клеток в 1 мл антигена, так что он соответствует по показаниям национальной стандартной сыворотке — международному стандарту. Диагностические титры при этом сохранились.
Ввиду принятия международного стандарта РА следует упомянуть о том, что минимальный диагностический титр для крупного рогатого скота, рекомендуемый Комитетом экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ, составляет 100 МЕ/мл для животных невакцинированных и 200 МЕ/мл для вакцинированных. Сомнительные титры установлены для невакцинированных животных 50 МЕ/мл, для вакцинированных — 100 МЕ/мл. Повторное исследование животных, давших сомнительные показания, производят через 60 дней.
Рекомендуется также проводить быстрый пластинчатый метод РА, хотя его считают менее чувствительным по сравнению с пробирочным.
Для овец диагностический титр пробирочной РА определяется 40 МЕ/мл.
Реакция связывания комплемента (РСК) и ее модификации. Наиболее чувствительная и достоверная модификация реакции связывания комплемента на холоде — реакция длительного связывании комплемента (РДСК) с титрованием гемолитической системы (метод П. А. Триленко). Эта реакция изложена в главе VI как официальный в СССР метод диагностики инфекционного заболевания овец, вызываемого Br. ovis. РДСК применяется также для диагностики бруцеллеза у сельскохозяйственных животных наравне с РСК. Новое наставление по постановке и учету РСК утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 27 мая 1976 г.
источник
Бруцеллы (род Brucella) – возбудители бруцеллеза человека и животных. В. melitensis, В. abortus и В. suis – вызывают заболевание у человека; B. ovis, B. canis, B. neotomae заболевания человека не вызывают.
Морфология, физиология. Мелкие Гр– коккобактерии размером 0,5-0,7х0,6-1,5 мкм. Также могут быть палочковидной формы; в мазках обычно расположены беспорядочно. Жгутиков не имеют. Спор не образуют. Свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу при культивировании на средах, содержащих 10% иммунной сыворотки барана или лошади, а также при выращивании на куриных эмбрионах.
Требовательны к питательным средам. Для выращивания обычно применяют триптозный, триптозо-казеиново-соевый и кровяной (5% овечьей крови) агары; оптимальная среда для культивирования — печёночный агар Хеддльсона. Выделяемые из организма больных они размножаются очень медленно, рост может быть обнаружен только через 1–3 недели после посева исходного материала. Многократное пересевание в лабораторных условиях делает культуры способными расти в течение 1–2 дней. На плотных питательных средах образуют мелкие, выпуклые, бесцветные с перламутровым блеском колонии S-формы (жемчужины), легко переходят в мукоидную и шероховатую. В жидких средах возникает равномерное помутнение. Под влиянием антибиотиков образуют L-формы.
Бруцеллы строгие аэробы, а В. abortus в первых поколениях требует увеличенной концентрации (5–10%) СО2.
БХ: расщепляют глюкозу и некоторые другие углеводы, разлагать мочевину и аспарагин, гидролизовать белок, пептоны, аминокислоты, выделять каталазу, гиалуронидазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу и другие ферменты. Внутри видов бруцелл различают биовары. Их дифференциация основана как на биохимических различиях, так и на способности расти на средах с фуксином и тионином, лизабельности фагом Т6, агглютинабельности моноспецифическими сыворотками.
АГ. Содержат поверхностно расположенный Vi-АГ и соматические видоспецифические АГ А и М, количественное соотношение которых различно у разных видов. У В.melitensis преобладают М-АГы. у В. abortus и В. suis – А-АГ. Для идентификации бруцелл по антигенным свойствам используют реакцию адсорбции агглютининов или монорецепторные сыворотки.
Экология и распространение. Зоонозная инфекция. Возбудители разных видов циркулируют среди животных, от которых заражаются и люди. В.melitensis вызывает заболевания мелкого рогатого скота, В. abortus – КРС, В.suis – свиней. Непатогенные для человека
Бруцеллы устойчивы к действию факторов окружающей среды. Они длительно сохраняют жизнеспособность при низкой температуре. В почве, моче, испражнениях животных, больных бруцеллезом, в навозе, сенной трухе возбудители выживают 4–5 мес., в шерсти– 3– 4 мес., в пыли – 1 мес., в замороженном мясе – до 5 мес. К высокой температуре и дезинфицирующим веществам бруцеллы высокочувствительны: при 60°С погибают за 30 мин, при кипячении – мгновенно. Все дезинфектанты губят бруцелл в течение нескольких минут.
Патогенность и патогенез. Проникновение – алиментарным, контактным и воздушно-капельным путями. Алиментарный путь заражения связан с употреблением в пищу продуктов животноводства (масла, молока, мяса), полученных от больных животных. Контактным путем заражаются чаще ветеринары, зоотехники, работники мясокомбинатов при уходе за больными животными, обработке сырья. Заражение возможно при работе с инфицированной шерстью, ветошью, когда имеет место распыление, попадание бруцелл в воздух. Для человека наиболее патогенными являются В.melitensis – возбудитель болезни мелкого рогатого скота (овец, коз).
Выраженные инвазивные и агрессивные свойства бруцелл обусловливают способность возбудителя проникать в организм через неповрежденные слизистые оболочки. После проникновения в организм распространяются лимфогенным путем, попадают в кровь, а из крови – в селезенку, костный мозг, лимфоузлы, где, локализуясь внутриклеточно, могут длительно сохраняться.
Болезнетворность бруцелл определяется действием эндотоксина. Выделяющиеся ферменты (гиалуронидаза и др.) способствуют распространению микробов в тканях. В патогенезе бруцеллеза имеет значение способность возбудителя размножаться в клетках лимфоидно-макрофагальной системы.
С первых дней болезни возникает реакций ГЗТ, которая сохраняется в течение всей болезни и длительное время после выздоровления.
Иммунитет. В основе иммунитета при бруцеллезе лежит активность системы Т-лимфоцитов. Важную роль играет фагоцитоз и состояние аллергии. Обезвреживание бруцелл происходит при участии антител – опсонинов, агглютининов.
Лабораторная диагностика. Проводится бактериологическим и серологическим методами. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, испражнения и моча больных, иногда – спинномозговая жидкость. Выделением возбудителя занимается специальная режимная лаборатория.
Образцы инкубируют в МПБ или бульоне Мартена (можно использовать соевый бульон) при 37°С. При проведении исследования засевают 2 порции среды и в одной создают повышенную концентрацию СО. Через 4-5 сут наблюдают рост бруцелл, нередко в виде мелких колоний, вкрапленных в тяжи фибрина; среда остаётся слегка мутной или прозрачной. После пересева на твёрдые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отвивают чистые культуры с последующими идентификацией биохимических свойств, определением способности расти на средах с добавлением некоторых анилиновых красителей (бактериостатический метод Хеддльсона) и определением биотипа реакциями агглютинации.
Серологические исследования. Реакция агглютинации (реакция Райта) — один из основных методов диагностики бруцеллёза. Динамика реакции может быть различной, для неё характерно колебание титров в течение суток; положительная реакция с первого дня заболевания; наиболее высокие титры отмечают через 1-2 мес. Для получения адекватных результатов необходимо использовать негемолизированную сыворотку и Аг, приготовленный из S-форм бруцелл (применять Аг диссоциированных форм нельзя); в эндемичных очагах, вызванных Brucella melitensis, рекомендуют применять гомологичный Аг. Следует помнить, что для реакции Райта характерны проагглютинационные зоны, или прозоны (отсутствие агглютинации в первых разведениях и чёткое её проявление в более высоких разведениях сыворотки). Часто применяют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона). В острой фазе заболевания диагностическую ценность имеет иммуноферментный метод, выявляющий IgM в сыворотке больного. Выявление неполных AT (реакция Кумбса) с применением антиглобулиновой сыворотки. Для диагностики, особенно при отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований, используют аллергические кожные пробы (проба Бюрне), обычно положительные у 70-85% пациентов к концу 1 мес заболевания. В качестве Аг применяют бруцеллин (мелитин, абортин) — протеиновый экстракт культуры бруцелл. Пробу также применяют для проведения эпидемиологических обследований; бывает положительной после вакцинации.
Для выявления возбудителя в молоке широко применяется кольцевая проба Банга.
Профилактика и лечение. Общие и специфические мероприятия ветеринарной службы. Выявляют и ликвидируют бруцеллез среди сельскохозяйственных животных, обезвреживают продукты и сырье животного происхождения. Людей, подвергающихся опасности заражения, вакцинируют живой бруцеллезной вакциной. Лечение бруцеллёза затруднено внутриклеточным паразитизмом бруцелл, что защищает их от действия антимикробных препаратов и AT. Препаратами выбора считают тетрациклин и стрептомицин. В тяжёлых и упорных случаях можно назначить рифампин (рифамицин). Смертность без лечения может достигать 5-10%.
источник
Серологические реакции и аллергическая проба являются общедоступными методами и применяются для диагностики бруцеллеза наряду с бактериологическим и биологическим методами.
В случае малой обсемененности пробы и отрицательных результатов, полученных при посеве исследуемого материала на питательные среды и заражении лабораторных животных, серологический метод может быть единственным, позволяющим диагностировать бруцеллез. В зависимости от целей исследования используют те или иные серологические методы.
При проведении эпидемиологического исследования бруцеллеза в очагах применяют 1.реакцию агглютинации пластинчатую (Хеддльсона) и 2.Объемную (Райта), а так же реакции Кумбса, РСК, РДСК, РПГА, кожную аллергическую пробу, иммуноферментный анализ (ИФА). Перед профилактической вакцинацией населения можно ограничиться постановкой пластинчатой реакции агглютинации (Хеддльсона) и кожной аллергической пробы.\
Реакция Райта (Реакция агглютинации с бруцеллезным антигеном в пробирках )
Реакция Райта проводится в пробирках в объеме 1 мл с разведениями сыворотки 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800 и единым бруцеллезным диагностикумом. Последний представляет собой взвесь убитых нагреванием и фенолом бруцелл. Для пробирочной реакции диагностикум разводят в 10 раз карболизированным (0,5%) физраствором. Методика разведения сыворотки обычна для пробирочной реакции агглютинации. Пробирки встряхивают, ставят в термостат при температуре 37° до следующего дня. Учет реакции проводят обычным способом или по 50% агглютинации (2+) в сравнении со стандартом мутности. Серийные титры 50% агглютинации 1:50, 1:100, 1:200, 1:400,1:800 свидетельствуют о том, что в 1 мл исследуемой сыворотки содержится соответственно 50, 100, 200, 400, 800 МЕ антител. Выраженность реакции больного оценивают по следующей схеме: титр 1:50 оценивается как сомнительный, 1:100 – слабо положительный, 1:200 и 1:400 – положительный, 1:800 – резко положительный.
При остром бруцеллезе реакция Райта положительна у больных в титре 1:200-1:800, тогда как при хроническом бруцеллезе – в титре 1:50-1:100. В то же время обострение хронического бруцеллеза сопровождается повышением титра 1:200-1:400.
Перечисленные показатели относятся к больным, заражение которых происходило в период их кратковременного пребывания в сельской местности, неблагополучной по бруцеллезу, или в результате систематического употребления некипяченого «фляжного» молока в городе.
Иногда резко выраженная реакция Райта наблюдается у больных со слабо выраженными клиническими проявлениями бруцеллеза.
Серологическая реакция агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона)
Реакция Хеддльсона (пластинчатая – применяют на стекле) чувствительна, но менее специфична, дает возможность выявлять агглютинины в первые дни болезни, быстро получить ответ. На большое (9х12см) хорошо обезжиренное сухое стекло на расстоянии 3-4 см друг от друга микропипеткой наносят исследуемую сыворотку в дозах 0,04, 0,02, 0,01 мл (опытные капли) и 0,02 мл (контрольная капля). К трем первым каплям сыворотки добавляют по 0,03 мл единого неразведенного диагностикумума, к последней – 0,03 мл физраствора. Максимальный срок наблюдения – 8 минут. Учет осуществляют невооруженным глазом по 4+ системе. При положительной реакции в опытных каплях появляются хлопья и жидкость становится более или менее прозрачной. Агглютинацию во всех трех дозах 4+ принимают за резко положительный результат, в первой и второй дозах – за положительный результат, только в первой дозе – сомнительный результат, отсутствие агглютинации во всех дозах – отрицательный результат.
Реакция Кумбса либо антиглобулиновый тест.
Его проводит для обнаружения антител, которые атакуют эритроциты.
Для обнаружения бруцеллеза используется прямая реакция. Эта реакция различает антитела, которые напрямую связаны с эритроцитами. Если антиглобулиновый тест показывает отрицательный результат – значит кровь чистая, и антител нет. Положительный результат означает появление антител, которые активно борются с эритроцитами.
ПЦР-диагностика основывается, на обнаружении ДНК-цепей бруцелл из биологического материла пациента. Для этого материал обеззараживают, прибавляя метиолят натрия концентрацией 0,01% с дальнейшим прогреванием в течение получаса. Когда завершится инкубирование в лизирующем растворе, который содержит, все необходимые реагенты для экстракции ДНК при поддерживании температуры в 66С на протяжении 10-15 минут биологическая ткань обезвреживается.
Этот анализ обладает положительной чертой в том плане, что можно использовать абсолютно любую биологическую ткань пациента.
источник
Определить это заболевание – непростая задача. Очень часто при вяло протекающих симптомах врачи могут спутать бруцеллез с раком, лейкозом, различными инфекциями. Большое значение имеют эпидемиологический анамнез и клиническая картина.
Анализ на обнаружение бруцеллеза.
Когда человек сталкивается с домашним рогатым скотом, то возникает большая вероятность заболевания бруцеллезом.
Основываясь на симптомах, нельзя с точностью подтвердить правдивость диагноза. Для того чтобы наверняка удостовериться в диагнозе, используются аллергологический, бактериологический и серологический анализы. Также актуальны стандартные анализы на бруцеллез, с использованием крови, мочи, пункции лимфатических узлов, суставной жидкости.
Бактериальное исследование имеет значительную отрицательную сторону – очень медленный рост бруцелл на питательных средах. Колонии вызревают лишь через 20–30 дней, что осложняет и замедляет диагностирование бруцеллеза. Такой анализ делать очень долго, поэтому сейчас актуально использовать серологические методы.
Для того чтобы убедиться, что у вас бруцеллез, необходимо провести следующие анализы. Важную информацию дает анализ крови на бруцеллез. Ее можно сдать практически в любом медицинском учреждении.
Биохимический анализ крови.
Сначала делают стандартный набор исследований:
- Общий анализ крови. В ней нужно определить содержание лейкоцитов. Если показатель повышен, это означает, что в организме присутствует воспалительный процесс. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) ускоряется, но не намного. Запущенная стадия заболевания приводит к понижению показателей всех элементов крови.
- Общий анализ мочи. Здесь необходимо определить, присутствует ли белок в моче, и в каких количествах. Для этого следует повторять такой анализ мочи несколько раз.
- Биохимический анализ крови. Здесь анализируют уровни печеночного цитолиза (АлАТ, АсАТ), если эти показатели становятся выше нормы, то это говорит о гипербилирубинемии, снижается уровень альбуминов (гипоальбуминемия), при этом общий белок остается на нормальном уровне.
Чтобы определить возбудителя заболевания, применяют следующие методы.
Он дает практически 100% достоверный результат.
Однако этот метод отличается сложностью и длительностью. В качестве биологического материала используются кровь, моча, спинномозговая, внутрисуставная жидкость, желчь, а также проба из лимфатических узлов. Эти жидкости засевают на питательные среды и ждут роста микроорганизмов. Длительность этого метода составляет чуть меньше месяца, а порой и целый месяц, все зависит от роста колониальных бруцелл.
Это самый популярный анализ для определения бруцеллеза. Результаты можно узнать уже через неделю. Принцип заключается в нахождении иммуноглобулинов (антител) в сыворотке к бруцеллезным антигенам. По их классу можно определить продолжительность и скорость процесса. Для определения используют реакции Райта и Хеддельсона.
Бруцеллы убивают при помощи нагревания, и эта взвесь реагирует с сывороткой крови пациента. Если в процессе реакции бруцеллы склеиваются в маленькие шарики и оседают – это означает, что в сыворотке содержатся антитела и, значит, человек действительно болеет бруцеллезом. При отрицательной реакции заболевание не диагностируется. Этот метод хорош тем, что уже на ранних стадиях заболевания он может дать положительный результат. При помощи такой реакции находят бруцеллез не только у человека, но и у животных.
Она не дает такого достоверного результата. Здесь агглютинация делается на стекле. Часто эта реакция дает ложный результат.
Его проводят для обнаружения антител, которые атакуют эритроциты.
Для обнаружения бруцеллеза используется прямая реакция. Эта реакция различает антитела, которые напрямую связаны с эритроцитами. Если антиглобулиновый тест показывает отрицательный результат, значит, кровь чистая, и антител нет. Положительный результат означает появление антител, которые активно борются с эритроцитами.
ПЦР-диагностика основывается на обнаружении ДНК-цепей бруцелл из биологического материла пациента. Для этого материал обеззараживают, добавляя метиолят натрия в концентрации 0,01% с дальнейшим прогреванием в течение получаса. Когда завершится инкубирование в лизирующем растворе, который содержит все необходимые реагенты для экстракции ДНК при поддержании температуры 66 °С на протяжении 10–15 минут, биологическая ткань обезвреживается.
ПЦР-диагностика на обнаружении ДНК-цепей бруцелл.
Этот анализ особенно приемлем в том плане, что можно использовать абсолютно любую биологическую ткань пациента.
К одним из популярных методов относится реакция Бюрне. Она основана на введении внутрикожно бруцеллина. Если есть бруцеллез, то на месте укола начинается покраснение и небольшая пастозность. Именно этот участок и оценивается как аллергологическая проба Бюрне. Пятно измеряют и делают заключение: если пятно превышает 6 сантиметров, то реакция считается положительной.
Такая проба действительна, когда бруцеллез в хронической форме. Также необходимо учитывать и тот факт, что положительная реакция может возникнуть у людей, которые проходили вакцинирование по профилактике бруцеллеза.
источник