Препараты для диагностики бруцеллеза

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Лечение бруцеллеза следует начинать как можно раньше, что позволит предотвратить поражение различных органов и тканей и переход заболевания в хроническую форму.

Антибиотикотерапия является главным лечебным мероприятием при остром бруцеллезе. В то же время, при хронической форме заболевания применение антибактериальных препаратов малоэффективно, так как патогенные бруцеллы в организме могут уже отсутствовать.

Антибиотики при бруцеллезе

Сразу стоит отметить, что самолечение при бруцеллезе недопустимо, так как ни один из народных препаратов не сможет полностью уничтожить внутриклеточно расположенные бруцеллы и предотвратить поражение различных органов и тканей. В то же время, некоторые народные средства могут стать хорошим дополнением к проводимой антибактериальной терапии, но только после согласования схем лечения с лечащим врачом.

При бруцеллезе можно использовать:

• Чай из зверобоя. Обладает противовоспалительным и вяжущим действием. Для приготовления чая нужно просто залить 1 чайную ложку измельченной травы зверобоя 200 миллилитрами кипятка. Принимать внутрь в теплом виде 3 – 4 раза в сутки.
• Настой из цветков липы. Обладает потогонным и дезинфицирующим действием. Для приготовления настоя 2 – 3 столовых ложки липовых цветков липы нужно залить 1 стаканом кипятка и настаивать в течение 2 часов, после чего процедить и добавить еще 100 мл теплой кипяченой воды. Принимать внутрь по 100 мл 4 раза в сутки через 30 минут после еды.
• Ромашковый чай.Ромашка обладает противовоспалительным и слабым противомикробным действием. Ромашковый чай можно купить в аптеке либо приготовить самостоятельно. Для этого 1 десертную ложку цветков ромашки нужно залить 1 стаканом кипятка и настаивать в течение 10 – 15 минут. Принимать внутрь по 1 стакану 3 – 4 раза в сутки.
• Настой из листьев брусники. Обладает мочегонным и антимикробным действием. Для приготовления настоя 20 грамм измельченных листьев брусники нужно залить 1 стаканом кипятка и настаивать в течение 2 – 3 часов. Принимать внутрь по 1 столовой ложке настоя 2 – 3 раза в сутки. Последний прием должен быть не позже чем за 5 – 6 часов перед сном.

При переходе заболевания в хроническую форму его клинические проявления становятся менее выраженными, в связи с чем необходимости в применении противовоспалительных препаратов нет. В то же время, на этом этапе обычно уже имеются серьезные поражения со стороны опорно-двигательного аппарата и других органов и систем. Целью лечебных мероприятий в данном случае является восстановление нормального функционального состояния поврежденных тканей и предотвращение прогрессирования патологического процесса, что достигается за счет физиопроцедур и физических упражнений.

При хроническом бруцеллезе рекомендуется:

• Лечебная физкультура. Пациентам следует избегать любых физических упражнений, связанных с тяжелыми перегрузками (таких как поднятие штанги, бег на длинные дистанции и так далее). Рекомендуется ежедневно выполнять утреннюю гимнастику, заниматься плаванием или легким бегом, ежедневно прогуливаться на свежем воздухе в течение не менее 30 минут. Основной задачей данных упражнений является улучшение циркуляции крови во всем организме и стимуляция активности сердечно-сосудистой системы, что необходимо для скорейшего восстановления поврежденных тканей.
• Ультравысокочастотная терапия (УВЧ). Суть данного метода заключается в воздействии на ткани организма высокочастотным электромагнитным полем. Это приводит к нагреванию тканей и стимуляции восстановительных процессов в них, а также улучшает кровоснабжение в зоне воздействия, что особенно важно при повреждении костной или хрящевой ткани.
• Электрофорез. Суть данного метода заключается в том, что при помещении в электрическое поле различных лекарственных веществ их молекулы начинают двигаться от одного электрода к другому, проникая при этом глубоко в ткани в области воздействия. С помощью этого метода можно назначать противовоспалительные и болеутоляющие препараты при болях в мышцах, связках, суставах.

Важно помнить, что в период обострения заболевания все описанные процедуры и упражнения следует прекратить до полной нормализации клинических и лабораторных данных.

Последствиями перенесенного бруцеллеза могут быть:

• Усиленная потливость – из-за повреждения вегетативной нервной системы, регулирующей активность потовых желез.
• Нервно-психические расстройства (раздражительность, агрессивность/вялость) – из-за поражения головного мозга.

• Деформации костей – из-за множественных повреждений могут возникать патологические переломы даже при воздействии небольших нагрузок.
• Деформации суставов – из-за поражения суставных поверхностей костей и синовиальной оболочки.
• Необратимые поражения клапанов сердца – это может стать причиной развития сердечной недостаточности.
• Инфекционные осложнения – связаны с нарушением работы иммунной системы.
• Нарушения чувствительности или двигательной активности – из-за поражения спинного мозга или периферических нервов.
• Бесплодие (мужское или женское) – из-за поражения внутренних половых органов.

Основные этапы развития патологического процесса при бруцеллезе у детей и у взрослых схожи, однако влияние данного заболевания на взрослый и детский организмы может значительно различаться. Все дело в том, что в органах и тканях ребенка процессы клеточного деления проходят гораздо боле интенсивно, чем у взрослого человека. С одной стороны это является положительным фактором, так как при своевременном излечении бруцеллеза остаточные явления будут крайне незначительными, а поврежденные органы быстро восстановятся. В то же время, при более длительном течении заболевания, при не вовремя начатом или неправильно проводимом лечении бруцеллез может перейти в хроническую или резидуальную форму, при которой отмечаются множественные поражения различных органов и систем. Выраженное повреждение тканей и органов в раннем детском возрасте может стать причиной различных аномалий развития, которые приведут к инвалидизации ребенка.

Наиболее опасными осложнениями бруцеллеза у детей являются:

• Поражения длинных трубчатых костей конечностей – они активно растут вплоть до 20 – 25 лет.
• Поражение суставов – может стать причиной деформации рук и ног малыша.
• Поражение яичек (у мальчиков) и яичников (у девочек) – помимо бесплодия поражение половых желез может стать причиной недоразвития или неправильного развития всего организма (половые железы выделяют половые гормоны, регулирующие появление вторичных половых признаков, половое поведение и так далее).
• Поражение сердца – формирование клапанного порока и развитие сердечной недостаточности в раннем детском возрасте имеет крайне неблагоприятный прогноз для жизни.
• Поражение нервной системы – может стать причиной недоразвития различных органов и тканей, а также привести к формированию психических отклонений.
• Поражения легких – частые пневмонии могут привести к развитию фиброза легких, при котором часть легочной ткани замещается фиброзной (рубцовой) тканью, неспособной осуществлять газообмен между организмом и окружающей средой.

Учитывая вышесказанное, становится понятным, почему своевременное выявление и полноценное лечение бруцеллеза у детей крайне важно.

Если женщина заболела острым бруцеллезом, ей рекомендуется воздержаться от беременности как минимум в течение 2 – 4 месяцев после полного исчезновения всех клинических и лабораторных признаков инфекции (то есть после полного выздоровления). Дело в том, что даже при полноценном лечении сохраняется вероятность того, что определенное количество бруцелл может остаться в организме в жизнеспособном состоянии, что может привести к рецидиву (повторному обострению) заболевания через некоторое время.

Если женщина заразилась бруцеллезом во время вынашивания ребенка, прогноз для плода может быть крайне неблагоприятным. В данном случае все зависит от срока беременности и выраженности клинической картины заболевания. Если заражение произошло на ранних сроках беременности, врачи могут порекомендовать женщине сделать аборт по медицинским показаниям. Объясняется это не столько высокой вероятностью инфицирования плода (которая составляет около 20 – 25%), сколько токсичностью антибактериальных препаратов, применяемых для лечения бруцеллеза. Если заражение произошло на поздних сроках беременности, рассматривается вариант родоразрешающей операции путем кесарева сечения. Если же срок беременности для этого слишком мал, женщину госпитализируют в специальное отделение больницы, где проводится необходимое лечение и ведется наблюдение за состоянием беременной и плода. При крайне тяжелом состоянии пациентки вопрос о преждевременном прерывании беременности решается консилиумом врачей при участи самой женщины и ее ближайших родственников.

Основными осложнениями бруцеллеза у беременных являются:

• Спонтанный аборт – наблюдается у 20 – 30% женщин.
• Внутриутробная гибель плода – встречается более чем в 15% случаев.
• Аномалии развития плода – наблюдаются у 7 – 8% детей, матери которых перенесли бруцеллез во время беременности.
• Преждевременные роды – наблюдаются примерно в 15% случаев.

К инвалидизации больного бруцеллезом может привести:

• Поражение клапанов сердца с последующим развитием сердечной недостаточности.
• Поражение костно-мышечного аппарата с последующей утратой способности самостоятельно передвигаться.
• Поражение нервной системы с последующей утратой чувствительности или двигательной активности в конечностях.
• Поражение глаз с последующей утратой зрения.
• Поражение легких с последующим развитием хронической дыхательной недостаточности.

Обычно таким больным выдается 3 группа инвалидности, крайне редко – 2 группа (решение о выдаче группы инвалидности принимает специальная комиссия врачей после тщательного и всестороннего обследования пациента).

При выявлении случая заболевания бруцеллезом в районе объявляется карантин, суть которого заключается в ограничении передвижений крупного и мелкого рогатого скота, а также собак и других животных, которые могут являться переносчиками инфекции.

Все животные в очаге инфекции должны быть в кратчайшие сроки обследованы ветеринаром (с соблюдением всех правил безопасности). Людям, непосредственно контактировавшим с зараженными животными (то есть тем, кто с высокой долей вероятности мог заразиться бруцеллезом) рекомендуется профилактическое применение антибиотиков в течение минимум 10 дней.

Для профилактики бруцеллеза назначаются:

• Рифампицин – по 300 мг 2 раза в сутки.
• Доксициклин – по 200 мг 1 раз в сутки.
• Тетрациклин – по 500 мг 3 раза в сутки.

Если у контактировавших с больными животными лиц появляются первые признаки бруцеллеза (общее недомогание, повышение температуры тела и увеличение лимфатических узлов), им рекомендуется как можно скорее обратиться к врачу и пройти полное обследование для уточнения диагноза.

При выявлении бруцеллеза у крупного или мелкого рогатого скота все контактировавшие с больной особью животные должны быть изолированы и осмотрены ветеринаром. При необходимости у них может быть взята кровь для анализа. Если у животного выявляется бруцеллез, его забивают. Мясо таких животных не может быть использовано для производства мясных продуктов на заводах, однако при правильном приготовлении оно может быть употреблено в пищу без риска заражения бруцеллезом. Дело в том, что бруцеллы крайне чувствительны к высоким температурам (при 60 градусах они погибают в течение получаса, а при 100 градусах практически моментально). Мясо животных, забитых из-за бруцеллеза нужно нарезать небольшими кусочками и варить или жарить на медленном огне в течение не менее 60 – 90 минут, после чего его смело можно употреблять в пищу.

Немаловажное значение имеет дезинфекция мест обитания больных животных. После выявления случая бруцеллеза все животные переводятся в другой (чистый) загон, а место их ночлега (стены, пол, потолок и все другие поверхности) несколько раз обрабатывают дезинфицирующими растворами (20% раствором хлорной извести или 2% раствором формальдегида).

Вакцина против бруцеллеза представляет собой лиофилизированные (то есть специальным образом высушенные и замороженные) бруцеллы (В. abortus). Обработанные таким образом микроорганизмы становятся крайне ослабленными, в связи с чем при введении их в организм человека вероятность развития клинических признаков бруцеллеза ничтожно мала. Однако при этом происходит контакт антигенов возбудителя с иммунной системой, которая начинает вырабатывать специфические антитела против бруцелл. Данные антитела циркулируют в крови пациента в течение длительного времени, и если в организм проникнет реальный опасный возбудитель, он будет моментально обнаружен и уничтожен. Полноценный иммунитет против бруцеллеза развивается примерно через месяц после вакцинации и сохраняется в течение года.

Обязательная вакцинация показана людям, занятым в сфере животноводства или работающим на мясоперерабатывающих фабриках. Перед вакцинацией в обязательном порядке определяется активность иммунной системы против бруцелл (для этого проводится проба Бюрне или другой похожий тест).

Противобруцеллезная вакцина может быть введена:

• Накожно. Перед началом процедуры кожу в месте введения (обычно это наружная поверхность средней трети плеча) обрабатывают спиртовым раствором. Через несколько секунд (когда кожа полностью высохнет) на нее наносят 2 капли готовой вакцины. После этого медсестра иглой или скарификатором делает на коже несколько поверхностных насечек, через которые должно просочиться несколько капель крови (в виде росинок). Затем кожу слегка растягивают, втирая той же иглой капельки жидкости в образовавшиеся царапины.
• Подкожно. Подготовка к процедуре такая же, как при накожной вакцинации. Разница заключается лишь в том, что в данном случае вакцина вводится под кожу с помощью шприца.

Противобруцеллезная вакцина противопоказана:

• Людям, болеющим бруцеллезом или перенесшим данное заболевание в течение последнего года.
• Пациентам, у которых во время проведения пробы Бюрне определяется повышенная активность иммунной системы против бруцелл.
• Во время обострения любого инфекционного или воспалительного заболевания. В данном случае вакцинация возможна не ранее чем через месяц после полного выздоровления.
• Пациентам с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД) или с другими иммунодефицитными состояниями (в частности тем, кто принимает противоопухолевые препараты, угнетающие активность иммунной системы). Дело в том, что используемые для вакцинации микроорганизмы хотя и ослаблены, но все же активны, поэтому при ослабленном иммунитете они могут привести к развитию полноценной клиники бруцеллеза.
• Пациентам со злокачественными заболеваниями крови.
• При наличии в анамнезе тяжелых аллергических заболеваний или реакций (отека Квинке, бронхиальной астмы, анафилактического шока). В данном случае решение о возможности вакцинации принимается только после консультации с врачом-аллергологом.
• Беременным и кормящим женщинам.

источник

НАБОР КОМПОНЕНТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА СОБАК, ВЫЗЫВАЕМОГО BRUCELLA CANIS, В РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ И ИММУНОДИФФУЗИИ В АГАРОВОМ ГЕЛЕ инструкция по применению

На плотных средах возбудитель формирует мелкие, прозрач­ные, круглые, с ровными краями, гладкой поверхностью, с голу­боватым оттенком колонии (S-форма), возможно появление шероховатых колоний (R-форма) (рис. 99, 100). По мере старения колонии мутнеют и за счет пигментообразования могут темнеть. На жидких питательных средах рост бруцелл проявляется равно­мерным помутнением среды, образованием голубоватого присте­ночного кольца, позднее формируется небольшой осадок.

У выросших культур изучают морфологию и тинкториальные свойства клеток в мазках, окрашенных по методам Грама, Коз­ловского.

Культуру идентифицируют серологически в РА на стекле с по­зитивной бруцеллезной сывороткой, разведенной в соотноше­нии 1:50. Виды В. melitensis, В. abortus, В. suis антигенно род­ственны, поэтому их клетки аг­глютинируют в стандартной бру­целлезной сыворотке. Для иден­тификации В. ovis кроликов им­мунизируют выделенной куль­турой и затем кроличью сыворотку исследуют в РДСК со стандартным овисным антиге­ном (В. ovis) — должна быть четкая положительная реакция, если это культура В. ovis.

Рис. 100. Бруцеллы в чистой культуре

Для определения видовой принадлежности у выделенных культур бруцелл изучают потребность в оксиде углерода (IV), об­разование сероводорода, способность к росту на питательных средах с тионином и фуксином, чувствительность к бруцеллез­ным бактериофагам, ферментацию аминокислот, углеводов, а также агглютинабильность с моноспецифическими сыворотками против отдельных клеточных антигенов бруцелл (А, М, R). Неко­торые из дифференцирующих характеристик приведены в табли­це 30.

Биопроба. Это эффективный метод обнаружения бруцелл в исследуемом материале, особенно загрязненном. Морских сви­нок перед заражением исследуют в РА, в опыт берут животных, в сыворотке которых не обнаружены антитела к возбудителю. Тканевый материал в виде суспензии (1 : 10) в объеме 1 мл вво­дят подкожно. О результате биопробы судят по данным иссле­дования сыворотки крови на 15, 25 и 40-й день после заражения (животные не погибают). Появление антител в титре 1 : 10 и бо­лее оценивают как положительный результат. Реагирующих жи­вотных убивают и подвергают бактериологическому исследова­нию.

Серологическая диагностика: при массовых диагностических исследованиях ставят пробирочную РА, роз-бенгал пробу (РА на стекле), РСК, РДСК, кольцевую реакцию с молоком (КР).

Пробирочная РА. Реакцию ставят в объеме 1 мл. Сыворотки крови крупного рогатого скота, лошадей, собак, пушных зверей, верблюдов разводят физиологическим раствором, содержащим 0,5 % фенола; сыворотки крови овец коз, буйволов разводят 5%-м, а сыворотки оленей — 10%-м фенолизированным физиологичес­ким раствором. Сыворотки крови крупного рогатого скота, ло­шадей, верблюдов исследуют в разведениях от 1 : 50 до 1 :400; овец, коз, свиней, буйволов, оленей, собак — в разведениях 1 : 25 и более; пушных зверей — 1 : 10 и более. При массовых исследо­ваниях сыворотки крови исследуют в двух первых разведениях. После приготовления разведений сыворотки в объеме 0,5 мл в каждую пробу добавляют 0,5 мл разведенного до концентрации клеток 5*10 8 /мл единого бруцеллезного антигена (при этом раз­ведения удваиваются), компоненты перемешивают встряхивани­ем, штатив с пробирками помещают в термостат при 37. 38 ºС на 18. 20 ч, затем оставляют на несколько часов при комнатной температуре. Результат учитывают по общепринятой системе (см. тему 15). В качестве контролей параллельно исследуют заведомо положительную и отрицательную сыворотки.

РА при бруцеллезе крупного рогатого скота, лошадей и верб­людов считают положительной, если титр составляет 1 : 100 и бо­лее (1 :50 — сомнительный результат), у овец, коз, оленей, буй­волов и собак — 1 : 50 (1 : 25 — сомнительный результат). При по­лучении сомнительных реакций сыворотки крови от этих живот­ных исследуют повторно через три-четыре неделим. В ходе массовых серологических исследований практикуют исследова­ние сывороток в двух первых разведениях. При этом необходимо учитывать, что некоторые сыворотки, не агглютинирующие ан­тиген в малых разведениях, в более высоких разведениях дают положительный результат — этот так называемый феномен «про-зоны», который может служить причиной ложных отрицатель­ных результатов.

В разных странах для пробирочной РА готовят антигены, раз­личающиеся по агглютинабильности, что делает несопоставимы­ми титры, полученные при исследованиях. Поэтому рекомендо­вано выражать результат пробирочной РА в международных еди­ницах (ME). Для этого предложена международная стандартная бруцеллезная сыворотка, по отношению к которой и определяют активность национальных антигенов. Активность этой сыворот­ки установлена в 1000 ME. Например, с каким-то национальным антигеном международная сыворотка в пробирочной РА показы­вает титр 1 : 500, значит, если с этим антигеном какая-либо дру­гая сыворотка дает титр РА 1 : 500, то она содержит 1000 МЕ, если вторая исследуемая сыворотка показывает титр 1 :400, то ее активность в международных единицах составит 1000 • 400/500 = 800 ME и т.д. В каждой стране разработана национальная бруцеллезная стандартная сыворотка, соответствующая по ак­тивности международной. По указанным критериям положи­тельные титры РА на бруцеллез для крупного рогатого скота составляют 100 ME (50 ME — сомнительный результат), для овец, коз, буйволов, оленей и собак — 50 ME (25 ME — сомни­тельный результат).

Роз-бенгал проба (РБП). В отличие от пробирочной РА данная серологическая реакция является качественной. С ее помощью в сжатые сроки исследуют большое количество животных. Сыво­ротки, давшие положительную РБП, дополнительно исследуют в пробирочной РА и РСК. Техника постановки РБП изложена в теме 15. В РБП исследуют неразведенную сыворотку крови, влия­ние нормальных антител на специфичность реакции нивелируется использованием антигена с кислыми значениями рН, при которых нормальные антитела с низкой авидностью не реагируют с антиге­ном, что обеспечивает достаточно высокую специфичность РБП.

РСК. Реакцию ставят в объеме 1 мл. Предварительно инакти-вированные в течение 30 мин сыворотки крови (лошадей при 56. 58 °С, крупного рогатого скота при 60. 62 °С, свиней при 60. 62°С, овец и коз при 58. 60°С) исследуют в разведении 1:5. 1:10. Положительным результатом РСК (РДСК) считают задержку гемолиза на два креста и более в разведении сыворотки крови 1:5.

Кольцевая реакция с молоком (КР). Метод применяют для ори­ентировочной проверки благополучных по бруцеллезу молочных стад и для контроля молока на рынке.

В бактериологическую пробирку наливают 2 мл исследуемого молока, добавляют 0,1мл антигена — клетки бруцелл, окрашен­ные гематоксилином. Пробирки встряхивают и помещают в во­дяную баню при 37. 38 ºС на 45. 50 мин, после чего учитывают результат. Положительный результат — верхняя часть столбика молока (сливки) синего цвета, остальное молоко белое или слег­ка синеватое. Отрицательный результат — слой сливок белый, молоко равномерно окрашено в синий цвет. Сомнительный ре­зультат — сливки слабо окрашены в синий цвет, молоко синего цвета.

Аллергическая диагностика не принадлежит к лабораторным методам; ее применяют непосредственно в хозяйствах. При бру­целлезе развивается состояние гиперчувствительности замедлен­ного типа (ГЗТ), которое может сопровождаться синтезом анти­тел, улавливаемых в серологических реакциях, но иногда ГЗТ от­мечают при отрицательных показаниях серологических тестов. Для обнаружения ГЗТ у животных используют диагностический аллерген — бруцеллин (см. тему 20).

Биопрепараты. Вакцина из штамма В. abortus № 19. Это наи­более изученная вакцина. Вакцинный штамм выращивают на плотных питательных средах. Устанавливают концентрацию микробных клеток 8 • 10 10 /мл, лиофильно высушивают. Готовый препарат контролируют на чистоту роста, диссоциацию, безвред­ность на морских свинках и белых мышах, одновременно у морс­ких свинок проверяют наличие серологического ответа на введе­ние вакцины. Иммуногенность препарата контролируют на мор­ских свинках.

Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабоагглютино-генного штамма № 82 отличается от вакцины из штамма № 19 слабым серологическим ответом с быстрым снижением уровня гуморальных антител, что позволяет при помощи серологичес­ких реакций дифференцировать вакцинированных животных.

Единый бруцеллезный антиген для РА, РСК и РДСК полу­чают следующим образом: культуру вакцинного штамма № 19 выращивают на плотной питательной среде, бактериальную массу инактивируют, проверяют на чистоту и стерильность пу­тем микроскопии и высевом на питательные среды. Контроли­руют на специфичность с физиологическим раствором и нега­тивной сывороткой. Активность проверяют в РА и РСК с на­циональной стандартной бруцеллезной агглютинирующей сы­вороткой.

Антиген для кольцевой реакции с молоком. Микробную массу культуры В. abortus (штамм № 19) готовят, как для единого бру­целлезного антигена, инактивируют, устанавливают необходи­мую концентрацию микробных клеток, протравливают сульфа­том железа, окрашивают в синий цвет гематоксилином, контро­лируют на стерильность, специфичность и активность (см. тему 20).

Роз-бенгал антиген представляет собой суспензию бруцелл в буферном растворе (рН 3,6), инактивированных нагреванием и фенолом, окрашенных бенгальским розовым в малиново-розо­вый цвет. Антиген контролируют на стерильность, чистоту, рН. Специфичность проверяют с физиологическим раствором и не­гативными сыворотками, активность — методом титрования с национальной стандартной сывороткой.

Флуоресцирующую бруцеллезную сыворотку готовят из пози­тивной бруцеллезной сыворотки, глобулины которой метят флуоресцеинизотиоцианатом.

Позитивную бруцеллезную сыворотку получают гиперимму­низацией животных-продуцентов. Используют для контроля при постановке серологических реакций (РА, РСК и др.), а также серологической идентификации бруцелл.

Диагностический аллерген-бруцеллин представляет собой стерильную, прозрачную, желтоватого цвета жидкость, содержа­щую продукты жизнедеятельности бруцелл и вещества, извлеченные из них. Бактериальную массу выращивают (штамм В. abortus В-1) на агаровой среде, прогревают при 105. 110 °С 1ч, центрифугируют, надосадочную жидкость стерилизуют фильтро­ванием, бактериальную массу ресуспендируют в физиологическом растворе. Процедуру нагревания, центрифугирования и стерили­зации повторяют, после чего оба фильтрата объединяют. Полученный препарат контролируют, как описано ранее (см. тему 20).

Туляремия. Острая инфекционная болезнь. У сельскохозяй­ственных животных обычно протекает в септической форме. Ха­рактеризуется увеличением лимфатических узлов, симптомами поражения нервной системы, у крупного рогатого скота может проявляться маститами, у лошадей — абортами. Из сельскохо­зяйственных животных к возбудителю туляремии наиболее чув­ствительны поросята, ягнята, из диких животных — грызуны. Восприимчив человек.

Возбудитель туляремии — бактерия Francisella tularensis (при­надлежит к роду Francisella). Подразделяют на два биовара: F. tularensis sb. tularensis и F. tularensis sb. palaearctica. Для вида F. novicida характерна незначительная вирулентность.

Лабораторная диагностика туляремии основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры мето­дом биопробы и посевом на питательные среды; идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментатив­ным, серологическим свойствам.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют мочу, фекалии, абортированный плод; для посмертной — печень, почки, селезенку, увеличенные лим­фатические узлы; трупы мелких животных, грызунов — целиком. При необходимости материал консервируют глицерином.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки-отпе­чатки окрашивают по Граму и Романовскому—Гимзе. F. tularensis-— мелкая [(0,3. 0,7) х (0,2. 0,4) мкм] грамотрицательная палочковидная бактерия, преимущественно в форме кокко-бактерии. Красители воспринимает плохо, без жгутиков, спор не образует, но формирует капсулу (рис. 101). Из-за мелких размеров возбудителя его микроскопическое обнаружение затруднительно.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбудитель
туляремии — строгий аэроб, не растет на общепринятых средах,
температурный оптимум Зб. 37°С, рН 6,7. 7,4. Исследуемый материал высевают на среду Френсиса, кровяную среду Емельяновой или желточную Мак-Коя (см. тему 7).

Среда Френсиса: к МПА (рН 7,3) добавляют 0,1 % цистина, 1 % глюкозы, кипятят несколько минут, охлаждают до 50 ºС, до­бавляют 10 % дефибринированной стерильной крови кролика.

Среда Емельяновой: в рыбно-дрожжевой агар вносят 0,1 % цистина, 1 % глюкозы, агар охлаждают до 45 °С и добавляют 10 % стерильной дефибринированной крови.

Посевы культивируют 24. 48 ч. Возбудитель формирует мел­кие, круглые, выпуклые, с ров­ными краями, гладкой блестя­щей поверхностью, беловатые колонии (рис. 102). Из подо­зрительных колоний готовят мазки, окрашивают, микроско-пируют. В препаратах из куль­туры в отличие от препаратов из нативного материала клетки возбудителя в основном не кокковидной, а палочковидной формы.

Рис. 102. Колонии F. tularensis (х7)

У культур с типичными для F. tularensis культурально-морфо-логическими признаками исследуют ферментативные свойства (табл. 31).

Выделенную культуру дополнительно идентифицируют с ту-ляремийной иммунной сывороткой в серологических реакциях (РА, ИФА, РП, РИГА).

Биопроба. Выделить культуру F. tularensis посевом на питатель­ные среды удается не всегда. Более эффективен метод заражения белых мышей или морских свинок тканевой суспензией подкож­но или внутрибрюшинно по 0,5 мл. Практикуют проведение 2. 3 «слепых» пассажей на чувствительных лабораторных животных. Зараженные животные погибают на 3. 5-е сутки, иногда позднее (8. 12-е сутки). У павших животных обнаруживают в паренхима­тозных органах некротические очажки. Из органов путем посева на питательные среды выделяют культуру возбудителя.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Приготовить и окрасить по методу Грама (Козловского) мазки из инактивированных клеток бруцелл, F. tularensis. Опи­сать культуральные и морфологические свойства возбудителей.

2. Исследовать в пробирочной РА и роз-бенгал-тесте сыворот­ки крови от здоровых и больных бруцеллезом животных (круп­ный рогатый скот).

3. Освоить технику постановки и учета результатов кольцевой реакции с молоком.

4. Ознакомиться с биопрепаратами для специфической про­филактики и диагностики бруцеллеза.

1. Какой материал направляют в лабораторию для бактериологического иссле­дования на бруцеллез и туляремию?

2. В чем состоит бактериологическое исследование на бруцеллез и туляремию?

3. Как ставят биопробу на бруцеллез и туляремию?

4. Какие методы применяют для серологической диагностики бруцеллеза?

5. Какие выпускают вакцины против бруцеллеза?

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ПАСТЕРЕЛЛЕЗА, ГЕМОФИЛЕЗНОГО ПОЛИСЕРОЗИТА И АКТИНОБАЦИЛЛЕЗНОЙ ПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ. БИОПРЕПАРАТЫ

Цель занятий. Ознакомить студентов с лабораторной диагнос­тикой пастереллеза, гемофилезного полисерозита и актинобациллезной пневмонии свиней, основными свойствами возбуди­телей, биопрепаратами.

Оборудование и материалы. Культуры P. multocida в МПБ, на МПА, демонстрация — штативы с тестами, характеризующими видовые ферментативные признаки P. multocida (включая биовары), культуры A. pleuropneumoniae и Н. parasuis на кровяном МПА в чашках Петри с феноменом сателлитного роста, трупы мышей, павших после заражения P. multocida, пипетки Пастера, красите­ли для окраски по Граму, Гинсу, демонстрация — чашки Петри с феноменом подавления роста культуры P. multocida серовара А в присутствии S. aureus, пробирки с отрицательной и положитель­ной трипафлавиновой пробой с культурами P. multocida сероваров А и D, МПА и МПБ в пробирках.

Пастереллез (геморрагическая септицемия). Инфекционная бо­лезнь многих видов млекопитающих и птиц. При остром течении характеризуется септицемией, при подостром и хроническом — в основном поражением легких.

Возбудитель — Pasteurella multocida (включает в себя три под­вида), род Pasteurella, семейство Pasteurellaceae.

Лабораторная диагностика пастереллеза основана на результа­тах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры посе­вом на культуральные среды и методом биопробы, идентифика­цию возбудителя по культурально-морфологическим, фермента­тивным, серологическим и патогенным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют селе­зенку, печень, почку, кровь сердца, лимфатические узлы, пора­женные участки легких и регионарные лимфатические узлы. При необходимости материал консервируют 30%-м водным раство­ром глицерина, трубчатую кость заворачивают в марлю, пропи­танную 5. 10%-м раствором формалина.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки-отпе­чатки окрашивают по Граму и одним из методов для выявления капсулы. Пастереллы представляют собой грамотрицательные короткие палочковидные бактерии размером (0,3. 2) х (0,2. 0,3) мкм, без спор и жгутиков, образуют капсулу.

Возбудитель в препарате из материала обнаруживают в форме мелких (0,3×1,5 мкм) грамотрицательных коротких палочковид­ных капсулообразующих бактерий с закругленными концами вплоть до коккобактерий. При окраске синькой Леффлера бакте­риальные клетки более интенсивно окрашены в концевых частях (биполярная окраска). Клетки располагаются единично, попар­но, короткими цепочками (рис. 103).

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбуди­тель — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37 °С (диапазон 25. 40 °С), штаммы птиц растут при 42 ºС, рН 7,2. 7,4. Материал засевают на МПА, в МПБ, лучше — на кровяной или сывороточный МПА, так как нередко возбудитель в первичных посевах плохо растет или не растет на простых питательных сре­дах. Посевы инкубируют в течение 24. 48 ч, при отсутствии рос­та—в течение 4. 5 сут.

На плотных питательных средах пастереллы формируют мел­кие, пучке света колонии (S-форма) диаметром 1. 3мм (рис. 104); возможно появление крупных, слизистых (М-форма) или шероховатых (R-форма) колоний. Культуры серовара А обра­зуют крупные (диаметр более 3 мм) слизистые колонии. Гемоли­тическая активность у P. multocida не выражена. В МПБ возбуди­тель растет с равномерным помутнением среды и образованием на дне пробирки слизистого осадка, поднимающегося при встря­хивании в виде «косички», рост мукоидных штаммов сопровож­дается более интенсивным помутнением среды. У выделенных культур исследуют морфологию и тинкториальные свойства.

У культур с типичными культурально-морфологическими признаками исследуют ферментативные свойства. P. multocida расщепляет маннит, ксилозу, не разлагает мальтозу, образует ин­дол, орнитиндекарбоксилазу, не синтезирует уреазу, не проявля­ет зависимости от V-ростового фактора ДПН (дифосфопиридин-нуклеотид). Внутри вида P. multocida дифференцируют по фер­ментативным особенностям на три подвида: P. multocida subsp. multocida ферментирует сорбит и не разлагает дульцит; P. multocida subsp. septica не ферментирует сорбит и дульцит; P. multocida subsp. gallicida ферментирует сорбит и дульцит.

Серологические свойства изучают для дифференциации куль­тур P. multocida по серовариантной принадлежности. Известны четыре серовара P. multocida (А, В, D, Е). В Европе эпизоотологическое значение имеют три серовара: В, D, А. Их идентифици­руют в РНГА по капсульным антигенам, но чаще по присущим сероварам D и А особенностям химического состава клеток. Для этого устанавливают присутствие гиалуроновой кислоты в капсульном веществе и склонность бактерий агглютинировать в ра­створе трипафлавина.

Трипафлавиновая проба: исследуемую культуру выращивают в бульоне Хоттингера (3 мл) в течение 24 ч, центрифугируют, затем удаляют 2,5 мл культуральной жидкости, седимент ресуспенди-руют и добавляют 0,5 мл водного раствора трипафлавина (1:1000). Суспензию бактерий выдерживают при комнатной температуре 10. 20 мин. Учет результатов: если суспензия стабильна, культуру относят к сероварам А или В; если сформирован осадок, культу­ру относят к серовару D.

Тест на гиалуроновую кислоту в составе капсулы: исследуе­мую культуру засевают «штрихом» на агар Хоттингера в чашках Петри, затем высевают в виде прямой линии по диаметру чашки культуру S. aureus, способную продуцировать гиалуронидазу. По­севы инкубируют 18. 24 ч, после чего просматривают колонии в косопроходящем свете. Культуральные свойства P. multocida се-роваров В, D, Е вблизи «штриха» S. aureus не изменяются, коло­нии культур серовара А (из-за расщепления гиалуронидазой ста­филококка гиалуроновой кислоты в составе капсулы пастерелл) тусклые, серые или голубые, а не флуоресцирующие.

Биопроба. Метод используют для выделения культуры возбу­дителя из исследуемого материала и определения вирулентности чистых культур.

Исследуемым материалом от крупного рогатого скота, свиней, овец заражают белых мышей и кроликов; материалом, получен­ным от птиц, заражают голубей, кур, уток. Кроликов перед био­пробой исследуют на пастереллоносительство: в течение трех дней вводят интраназально по две капли 0,5%-го водного раство­ра бриллиантового зеленого. Появление гнойного истечения из носовой полости указывает на пастереллоносительство, и таких животных из опыта исключают.

Суспензию тканевого материала, разведенную физиологичес­ким раствором (1:10), вводят кроликам подкожно по 0,5 мл, бе­лым мышам подкожно по 0,2 мл, голубям внутримышечно по 0,3 мл. При наличии в материале возбудителя животные погиба­ют через 18. 36 ч. Трупы животных подвергают бактериологичес­кому исследованию.

Биопрепараты. Вакцина эмульгированная против пастереллеза крупного рогатого скота представляет собой инактивированные 0,25%-м раствором формальдегида клетки пастерелл серовара В в водно-масляной эмульсии. Контролируют на стерильность, без­вредность (белые мыши, кролики) и иммуногенность на кроли­ках. Кроме того, готовят эмульгированные вакцины против пас­тереллеза свиней, кроликов, нутрий.

Преципитированная формолвакцина против пастереллеза овец и свиней представляет собой выращенные в реакторе в бу­льоне Хоттингера культуры пастерелл серовара В, инактивированные формальдегидом, сорбированные алюмокалиевыми квас­цами. Контролируют на стерильность, безвредность (белые мыши), иммуногенность на голубях.

Гипериммунную сыворотку против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней получают гиперимму­низацией волов. Контролируют на стерильность, безвредность (белые мыши, морские свинки), на специфическую активность на белых мышах, которым ее вводят по 0,1; 0,05 и 0,03 мл. Сы­воротку признают активной, если при контрольном заражении остаются живыми мыши, привитые первыми двумя дозами пре­парата.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник