Меню Рубрики

Методы микробиологической диагностики бруцеллеза

Возбудители бруцеллеза (Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis и Brucella canis) высоко контагиозны и работа с ними проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций. Постановку серологических реакций и аллерги­ческих проб для диагностики бруцеллеза производят соответственно в обычных микробиологических лабораториях и больничных условиях.

Главным резервуаром бруцелл являются домашние сельскохозяйственные животные, а также другие виды животных, от которых человек заражается преимущественно контактным или контактно-бытовым, реже алиментарным путем. Клинические проявления бруцеллеза многообразны, поражаются лимфатическая, сосудистая, гепато-лиенальная системы и особенно опорно-двигательный аппарат Методы микробиологической диагностики бруцеллеза представлены в схеме 7.

Схема 7. Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Материал: кровь, костный мозг, моча, испражнения, грудное молоко у кормящих женщин

Серологический метод— постановка РА с сывороткой крови больного (реакция Райта, ставят в начале 2-й недели болезни, диагностический титр 1:200 и выше), ускоренной РА на стекле (реакция Хеддльсона), РСК и ИФА.

Диагностикумом в реакции Райта и Хеддльсона является взвесь убитых бруцелл с красителем генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым.

Реакцию агглютинации Хеддльсона ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят микропипеткой неразведенную исследуемую сыворотку в количествах 0,08; 0,04; 0,02; 0,01 и 0,02 мл, добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума, кроме по­следней дозы, в которую вносят 0,03 мл ФР (контроль сыворотки). Контролем диагностикума является смесь из 0,03 мл антигена и 0,03 мл ФР. Все капли перемешивают стеклянной палочкой или бактериологической петлей и после легкого покачивания стекла наблюдают за появлением мелкозернистого окрашенного агглютината. Отсутствие агглюти­нации во всех пробах сыворотки оценивается как отрицательная реакция, наличие агглютинации в 1-й пробе (0,08 мл сыворотки) — сомнительная, во 2-й (0,04 мл) — слабоположительная, в 3-й или 4-й пробах (0,02-0,01 мл) — положительная, во всех пробах — рез­ко положительная реакция. Поскольку реакция агглютинации Хеддльсона иногда бывает положительной у здоровых людей за счет нормальных антител, она обязательно подтверждается реакцией Райта.

РИФ, РНГА, РСК и особенно ИФА более чувствительны, чем реакция агглютинации. Для ранней диагностики бруцеллеза особую ценность имеет ИФА, позволяющий выявить в сыворотке больных антибруцеллезные антитела класса IgM,которыев отличие от IgG по­являются в ранние сроки болезни, свидетельствуя о свежем инфицировании.

Аллергический метод –постановка внутрикожной аллергической пробы Бюрне с 15-20 дня заболевания. Учет реакции проводится через 24-48 часов, положи­тельной считается реакция в случае появления на месте введения аллергена (бруцеллина) болезненности, гиперемии и инфильтрации кожи диаметром 3 см и более. Положительная аллергическая ре­акция на бруцеллин сохраняется в течение длительного времени после перене­сенного бруцеллеза, а также после прививки.

Бактериологический метод— посев крови для выделения гемокультуры в 2 флакона с 50 мл печеночного или асцитического бульона (рН 7,1-7,2) или МПБ с добавлением 1 % глюко­зы, 2 % глицерина и антифаговой сыворотки (для инактивации бруцеллезного бактериофага) в первые дни болезни при наличии лихорадки. При отрицательных резуль­татах исследование повторяют, т.к. бактериемия наблю­дается в течение 1 года и более.

Один флакон выращивают в обычных аэробных условиях, другой — в герметично закрытом сосуде с 10 % углекислого газа (или СО2-инкубаторе) при температуре 37 0 С до 1 ме­сяца, делая пересевы на скошенный пече­ночный агар или эритрит-агар каждые 4-5 дней. На жидких средах бруцеллы растут с образованием легкого помутнения и небольшого слизистого осадка, на плотных средах в виде округлых, диаметром до 5 мм, серовато-белых, блестя­щих, прозрачных с янтарным оттенком в проходящем свете колоний. Типичные колонии пересевают на скошенный агар и идентифицируют выделенную культуру до уровня вида.

Выполняются также посевы ис­следуемого материала в желток свежего куриного яйца или в жел­точный мешок куриного эмбриона с последующей их инкубацией в течение 5 дней при 37 0 С и пересевом содержимого желточного мешка на плотные и жидкие питательные среды для выделения чистой культуры бруцелл.

Бруцеллы идентифицируют на основании изучения морфологических (рис. 13 — грамотрицательные коккобактерии), культуральных, биохимических (они не ферментируют уг-

Рис. 13. Возбудитель бруцеллеза (Brucella melitensis). Окраска по Граму. Мелкие грамотрицательные коккобактерии.

леводы, не свертывают молоко и не разжижают желатину, выделяют сероводород), антигенных свойств (постановка РА с моноспеци­фическими сыворотками против антигеновА, М, R), чувствительности к специфическому бактери­офагу и бактериостатическому действию анилиновых красителей (табл. 8).

Таблица 8.Дифференциация основных видов бруцелл

Признак Вид бруцелл
Br. melitensis Br. abortus Br. suis
Условия культивирования аэробные 10% СО2 аэробные
Рост на средах с красителями:
фуксином 1:50000 + +
тионином 1:25000 + +
пиронином 1:200000 + +
Образование Н2S ± ±
РА с монорецепторными сыворотками
А ± ± +
М ± ± ±
Чувствительность к бруцеллезному фагу + ±

. Обозначения: «-« — отрицательная; «+» — положительная; «±» — непостоянная реакции.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Сдача сессии и защита диплома — страшная бессонница, которая потом кажется страшным сном. 8578 — | 7059 — или читать все.

193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

источник

84. Возбудитель бруцеллеза. Таксономия и характерис­тика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.

Таксономия: Возбудители бруцеллеза B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.canis, B.ovis относятся к отделу Gracilicutes, роду Brucella.

Морфологические и тинкториальные свойства: Мелкие, грамотрицательные палочки овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, иногда образуют микрокапсулу.

Культуральные свойства: облигатные аэробы. B.abortus для своего роста нуждается в присутствии 5—10 % углекислого газа. Оптимальными для роста являются темпера­тура 37С. Требовательны к питатель­ным средам и растут на специальных средах (пече­ночных, кровяной агар). Их особенностью является медленный (в течение 2 нед) рост. В жидких средах – равномерное помутнение с небольшим осадком. На плотных – мелкие, круглые гладкие голубые колонии. Диссоциация от S- к R-формам колоний.

Биохимическая активность: очень низкая; содержат каталазу и оксидазу, нитраты редуцируют в нитриты, цитраты не утилизируют, продуцируют Н2S.

Антигенная структура. O-антиген – соматический, и капсульный антигены. Две разновид­ности О-антигена — А(абортус) и М(мелитензис). Иногда обнаруживают К-антиген.

Факторы патогенности: Образуют эндотоксин, обладающий высокой инвазивной активностью. Продуцируют один из ферментов агрессии — гиалу-ронидазу. Их адгезивные свойства связаны с белками наружной мембраны.

Резистентность. Быстро погибают при кипяче­нии, при действии дезинфицирующих веществ, устойчивы к низкой температуре: в замороженном мясе они со­храняются до 5 мес, в молочных продуктах — до 1,5 мес.

Эпидемиология. Зоонозная инфекция. Источник — крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, овцы, выделяющие B.melitensis. Люди более восприимчивы к этому виду возбудителя. Реже заражение происхо­дит от коров (B.abortus) и свиней (B.suis). Больные люди не являются источником заболевания.

Патогенез. Проникают в организм через слизи­стые оболочки или поврежденную кожу, попадают сначала в регионарные лимфатические узлы, затем в кровь, разносятся по всему организму и внедряются в органы ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенку, костный мозг). Там они могут длительное время сохраняться и вновь попадать в кровь. При гибели освобождается эндоток­син, вызывающий интоксикацию.

Клиника: Инкубационный период составляет обычно 1—3 нед. Длительная лихорадка, озноб, потливость, боли в суставах, радикулиты.

Иммунитет: После перенесенного заболевания формирует­ся непрочный иммунитет. Клеточно-гуморальный, нестерильный, относительный.

Микробиологическая диагностика обычно проводится путем серологических исследований (реакция Райта и Хеддлсона).

Бактериологическое исследование. Для получе­ния гемокультуры кровь засевают в два флакона печеночного бульона. Один из них (для выделения культуры В. melitensis) инкубируют в обычных аэробных условиях, другой (для выделения первич­ной культуры В. abortus) —с СО2. В первых генерациях бруцеллы растут очень медленно. На агаре бруцеллы образуют бесцветные коло­нии, в бульоне — помутнение и слизистый осадок. В мазках, ок­рашенных по Граму, обнаруживаются мелкие грамотрицательные формы. Они неподвижны, спор не образуют, в опре­деленных условиях появляется видимая капсула.

Для быстрой идентификации бруцелл ставят реакцию агглю­тинации со специфическими агглютинирующими сыворотками на стекле и определяют чувствительность к специфическому фагу. Все виды бруцелл не ферментируют углеводы. Их дифференци­руют по образованию H2S, чувствительности к СО2, действию анилиновых красителей (основной фуксин).

Серодиагностика. Реакция агглютина­ции Райта с бруцеллезным диагностикумом. Положительные ре­зультаты отмечаются спустя 1 нед. после начала заболевания и сохраняются у переболевших многие годы. Диагностический титр реакции 1:200. Для ускоренной серодиагностики применяется реакция агглю­тинации Хеддлсона, которая ставится с неразведенной сыворот­кой больного и концентрированным антигеном — диагностикумом, окрашенным метиленовым синим. При положительной реакции появляются хлопья си­него цвета. Реакция положительна при наличии агглютинации на «++».

Для серодиагностики используют РПГА, РИФ, РСК, метод опреде­ления неполных антител. В поздние периоды заболевания процент положительных серологических реакций (агглютинации, РПГА и РСК) начинает снижаться и большее диагностическое значение приобретают кожно-аллергическая проба и реакция Кумбса.

Биопроба. Применяется для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Исследуемый материал вводят морским свинкам подкожно в паховую область. Кусочки органов и лимфатических узлов засевают на питательные среды для получения чистой культуры и ее идентификации.

Кожно-аллергическая проба (реакция Бюрне). На предплечье внутрикожно вводят 0,1 мл бруцеллина. При наличии аллергии уже через 6 ч. могут появиться гипере­мия кожи и болезненная отечность. Учет реакции производят через 24 ч. Реакция обладает высокой чувстви­тельностью.

Лечение: Антибиотики широкого спектра действия. Специфическая иммунотерапия убитой лечебной бруцеллезной вакциной или бруцеллина (фильтрат бульонных культур В. melitensis, B.abortus, В.suis, убитых нагреванием . При острых формах – бруцеллезный иммуноглобулин.

Профилактика: Живая бруцеллезная вакцина получена штамма ВА-19А, полученную из В. abortus, создает перекрестный иммунитет против других видов бруцелл.

Бруцеллезный единый диагностикум. Взвесь убитых бруцелл, окрашенных метиленовым синим, применяется при серо­логической диагностике бруцеллеза постановкой реакции агглю­тинации Райта и Хеддлсона.

Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вак­цина. Взвесь вакцинного штамма. В. abortus применяется для профилактики бруцеллеза.

источник

Возбудители Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis входящих в роду Brucella. Материалом для микробиологической диагностики является кровь, костный мозг, моча, грудное молоко, околосуставных жидкость, околоплодные воды, абортированные плоды животных. Микробиологическую диагностику бруцеллеза проводят микроскопическим, бактериологическим, серологическим, биологическим и аллергологическим методами.
Микроскопический метод. Из материала, который исследуют, готовят мазок и красят сначала карболовым фуксином (разведение 1: 5) в течение 3 минут. Затем препарат промывают водой и дополнительно окрашивают 2% водным раствором метиленовой синьки в течение 5 минут. При микроскопии обнаруживают на голубом фоне бруцеллы в виде коротких палочек с закругленными концами красного цвета.
Бактериологический метод. Поскольку возбудители бруцеллеза высоковирулентные и контагиозные, работать с культурами этих микробов могут только специалисты, имеющие соответствующую подготовку.
Материал, который исследуют, высевают в печеночный бульон или МПБ с 1% глюкозы и 1% глицерина. При этом используют 2 флакона со средой. Во втором флаконе создают условия для роста B. abortus. Этот вид бруцелл для роста требует СО2. Поэтому флакон с бульоном после посева в него материала, который исследуется, закрывают тлеющей ватно-марлевой пробкой. Посевы размещают в термостате при t 37 ° С и культивируют в течение нескольких дней. Далее делают пересел на плотные питательные среды: печеночный агар, сывороточно-декстрозных или кровяной агар.
На этих средах бруцеллы растут в виде нежных бесцветных выпуклых круглых колоний диаметром от 1 до 5 мм (S — формы). Их сравнивают с капельками росы. Иногда появляются R-формы колоний. В мазках из типичных колоний оказываются мелкие грамотрицательные бактерии шаровидной, овоподибнои или палочковидной формы.
Подозрительные колонии пересевают на скошенный печеночный агар и после выделения чистой культуры микробов идентифицируют их. При этом учитывают морфологические, тинкториальных, культуральные свойства, потребность в СО2 для роста, способность расти на средах в присутствии фуксина, тионином, выделять H2 S, образовывать уреазу, фосфатазу, каталазу, чувствительность к специфическому поливалентного бактериофага, агглютинацию моноспецифическими бруцеллезного сыворотками.
Серологический метод. Определяют титр антител к бруцелл в сыворотке обследуемого в реакциях Райта и Хеддльсона. В качестве антигена используют бруцеллезный единственный диагностикум. Этот диагностикум представляет собой гомогенную суспензию бруцелл, инактивированную нагриваннямфенолом и окрашенную в синий цвет. При постановке реакции агглютинации Райта из сыворотки больного готовят разведения 1:50, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800 в физиологическом растворе, в который добавляют перед тем 0,5%
фенола в объеме 0,5 мл, а затем добавляют по 0,5 мл бруцеллезного единого диагностикума в разведении 1:10. Реакция считается положительной при титре 1: 100 — 1: 200, а при титре 1: 800 и выше — резко положительной.
Реакцию Хеддльсона ставят на хорошо обезжиренном стекле, расчерченном на 6 квадратов. На первом квадрате записывают номер сыворотки, а на второй, третий, четвертый, пятый квадрат наносят сыворотку, которую исследуют, в объемах 0,04; 0,02; 0,01 мл 0,02 мл (контроль сыворотки). В контроль сыворотки добавляют 0,03 физиологического раствора, в другие капли сыворотки — 0,03 мл не разбавленное бруцеллезного единого диагностикума. На шестом квадрате контроль антигена (0,03 мл антигена + 0,03 мл физиологического раствора). Учет реакции проводят в течение 8 мин. Негативная реакция — аглютинат отсутствует во всех объемах сыворотки. Сомнительная реакция — аглютинат есть только в объеме 0,04 м / л. Положительная реакция — аглютинат в объемах 0,02-0,01 мл. Резко положительная — аглютинат во всех объемах сыворотки. Реакцию применяют при массовом обследовании людей. Положительный результат позволяет отобрать лиц с подозрением на бруцеллез для дальнейшего углубленного обследования.
Биологический метод применяют для выделения бруцелл в чистой культуре из материалов, загрязненных сторонними микроорганизмами. Для этого используют морских свинок и белых мышей. Материал, который исследуют, вводят подкожно или внутрибрюшным путем.
Аллергологический метод (проба Бюрне). В среднюю часть внутренней поверхности предплечья внутрикожно вводят 0,1 мл бруцеллина (фильтрат из 3-4 недельных бульонных культур бруцелл трех типов). Положительная реакция характеризуется образованием через 24 часа патологического инфильтрата размером 4 х 6 см и гиперемией. Эта реакция специфична. Она проявляется через 1-2 недели после начала заболевания и сохраняется годами.

Читайте также:  Возбудители бруцеллеза в крови

источник

Бруцеллеззоонозное инфекционно-аллергическое заболевание, характеризующееся длительной лихорадкой, поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой и других систем организма со склонностью к затяжному, хроническому течению.

Бруцеллез как заболевание известно давно, со времен Гиппократа, но научное его изучение началось в 60-х годах XIX века. В то время оно получило название «средиземноморская или мальтийская лихорадка». В 1886 г. Д. Брюс обнаружил возбудителя заболевания в мазках из селезенки погибшего от бруцеллеза больного, а в 1887 г. выделил чистую культуру возбудителя (впоследствии этот возбудитель был назван В. melitensis). В 1897 г. датские ученые Б. Банг и Б. Стрибольт выделили сходные микроорганизмы из околоплодной жидкости при инфекционных абортах у коров (B. abortus bovis). В 1914 г. Д. Траум обнаружил аналогичных возбудителей у свиней и назвал их B. suis. Позднее были выделены другие виды бруцелл: в 1957 г. – B. neatomae (от кустарниковых крыс), в 1960 г. – B. canis (от гончих собак), а в 1970 г. – B. ovis (от барана).

Виды – наиболее патогенные для человека – В. melitensis, B. abortus, B. suis.

Мелкие кокковидные палочки размерами 0,5-0,7×0,6-1,5 мкм, грамотрицательные, в мазках располагаются беспорядочно, неподвижны, спор не образуют, свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу.

Строгие аэробы. Оптимальные условия культивирования: температура – 37 0 С, рН – 6,8-7,2. Особенностью бруцелл бычьего типа является их потребность в повышенном содержании в атмосфере углекислого газа (5-10% СО 2 ). Характерен медленный рост бруцелл – первые генерации появляются через 1-3 недели и более. При пересеве лабораторных культур рост наблюдается через 1-2 дня. Требовательны к питательным средам: хорошо растут на печеночном, сывороточном или кровяном агаре. В жидкой среде наблюдается рост в виде диффузного помутнения. На плотных питательных средах бруцеллы образуют перламутровые мелкие выпуклые гладкие колонии с нежной зернистостью (S-форы). Возможна диссоциация в R-формы.

Биохимическая активность.
Выражена слабо. Ферментируют глюкозу и арабинозу до кислоты без газа. Восстанавливают нитраты, разлагают белки с образованием Н 2 S, индол не образуют.

Разделение на виды основано на биохимических и культуральных различиях

Рост на средах с красителями

У бруцелл выявлено до 15 антигенных фракций: родовые и видовые поверхностные антигены.

1. Выделяют два соматических антигена – А и М, причем М-антиген доминирует у В. melitensis, А-антиген преобладает у B. abortus и B. suis.

2. Третий – L(Vi)-антиген – поверхностно расположенный капсульный антиген вирулентности, термолабильный, имеет сходство с Vi-антигеном сальмонелл.

Токсины. Бруцеллы обладают эндотоксином (ЛПС КС), имеющим высокую инвазивную способность.

Ферменты – гиалуронидаза и нейроминидаза.

Структурные и химические компоненты клетки: пили I порядка и белки клеточной стенки (адгезивные свойства), капсула.

Считают, что бруцеллы обладают высокой инвазивностью: могут проникать в организм человека через неповрежденные кожные и слизистые покровы.

Также являются факультативными внутриклеточными паразитами.

Бруцеллы довольно устойчивы во внешней среде:

— В воде и влажной почве – они могут сохраняться до 5 месяцев;

— Они устойчивы к низким температурам и в замороженном мясе выживают до 5 месяцев.

Чувствительны к повышенной температуре (до 60 0 С – погибают за 30 минут, кипячение – мгновенно), действию дезинфиктантов (3% раствор хлорной извести, 1% хлорамин, 2% формалин убивают их за 5 минут), антибиотикам (стрептомицину, тетрациклину, рифампицину).

Основной резервуар и источник инфекции – больные домашние животные: овцы, козы, свиньи, КРС.

— Фекально-оральный (путь – алиментарный – большую опасность представляет сырое молоко и молочные продукты, не подвергающиеся в процессе приготовления тепловой обработке, например, сыр, брынза);

— Контактный (путь – прямой контактный – при попадании возбудителя на поврежденные кожные или слизистые покровы при уходе за больными животными);

— Аэрогенный (путь – воздушно-пылевой – описан при вдыхании воздушно-пылевой смеси, содержащей инфицированные частицы шерсти, навоза, земли во время уборки помещения).

Для бруцеллеза свойственен выраженный профессиональный характер заболевания!

Инкубационный период – 1-4 недели (может длиться до 2-3месяцев).

Патогенез и клинические особенности.

Бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки или кожные покровы, не оставляя никаких изменений в области входных ворот. Лимфогенным путем возбудители заносятся в региональные лимфоузлы и подвергаются незавершенному фагоцитозу. С макрофагами возбудители проникают в кровоток и диссеминируют в печень, селезенку, почки, костный мозг, суставы, эндокард. В пораженных органах образуются очаги некроза, окруженные инфильтратами. Появляются признаки очаговых поражений со стороны опорно-двигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой и других систем. Внутри фагоцитов бруцеллы способны формировать L-формы и длительно персистировать в организме. Переход в исходные формы обуславливает рецидив болезни.

Постинфекционный иммунитет – гуморальный (образуются неполные антитела) и клеточный, нестойкий, нестерильный. Формируется ГЗТ.

Бруцеллы могут быть выявлены непосредственно в патологическом материале и объектах внешней среды с помощью прямой или непрямой реакции иммунофлюоресценции.Ее используют также для идентификации выделенной культуры.

Бруцеллы в острую фазу болезни выделяют из крови при посеве на питательный бульон. Кроме того, делают посевы пунктатов костного мозга и лимфатического узла, а также стерильно взятой мочи. Выделенную культуру идентифицируют по типичной морфологии бактерий и колоний, положительной реакции агглютинации на стекле с поливалентной бруцеллезной сывороткой. Для видовой идентификации используют признаки видов и биоваров бруцелл. Серодиагностику проводят в развернутой реакции агглютинации (р. Райта) и пластинчатой реакции агглютинации (р. Хедльсона), реже ставят РНГА, а также р. Кумбса для выявления

Кожно-аллергическую пробу (по Бюрне) применяют для выявления ГЗТ к бруцеллам. Положительная реакция наблюдается как у больных, так и у привитых живой бруцеллезной вакциной

Проводят вакцинацию по эпидпоказаниям живой вакциной из аттенуированного штамма B. abortus.

Специфическое лечение – противобруцеллезный иммуноглобулин, для лечения хронических форм заболевания применяется убитая бруцеллезная вакцина.

источник

РАЗДЕЛ 2: частная микробиология

ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:

  • дать понятие о правилах забора, хранения и транспортировки исследуемого
материала при диагностике туляремии и бруцеллеза;
  • сформировать понятие о диагностике туляремии и бруцеллеза, особенностях аллергического метода;
  • обучить методике серологической и экспресс — диагностике туляремии и бруцеллеза
1. Произвести микроскопию препаратов, окрашенных люминисцирующими сыворотками. Результаты зарисовать.
2. Поставить и произвести учет реакции Райта и Хеддельсона.
3. Поставить развернутую РА с туляремийным диагностикумом.
4. Изучить схему бактериологического выделения и идентификации бруцелл и франциселл туляремии.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ.

1. К какой группе инфекций относятся туляремия и бруцеллёз?

2. Какова антигенная структура бруцелл и франсиселл?

3. С каким антигеном связывают вирулентность Francisella tularensis?

4. Перечислите виды бруцелл, какой из них патогенен для человека?

5. Почему бактериологический метод не является основным при микробиологическом исследовании туляремии?

6. Как растут возбудители туляремии и бруцеллёза на питательных средах?

7. Какой токсин вырабатывают бруцеллы и франциселлы?

ТЕМА: “Микробиологическая диагностика бруцеллеза”.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: выявление возбудителя бруцеллёза.

Род Brucella включён в семейство Brucellaceae отдела Gracilicutes. Представлены неподвижными мелкими (0,5-0,7×0,6-1,5 мкм) Gr — палочками или коккобациллами, факультативные внутриклеточные паразиты. Патогенны для человека B. melitensis, B. bovis, B. suis

Работа проводится в строго режимных условиях!

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ:

Кровь для выделения гемокультуры берут из локтевой вены 5-10мл, для серологической реакции можно брать из пальца – 1-2мл.

СМЖ, косный мозг – берут стерильным шприцем в стерильную посуду.

Мочу – берут стерильным катетером в стерильную посуду.

Грудное молоко – собирают в стерильную посуду.

ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Экспресс методы: РИФ и РНГА;

РИФ. Из исследуемого материала готовят мазки на чистых обезжиренных предметных стеклах. Фиксируют в 96 0 этиловом спирте 20 мин, затем высушивают на воздухе. На поверхность мазка наносят бруцеллезную люминесцирующую сыворотку. Окраска проводится 20 минут во влажной камере при 37 0 С. Препарат ополаскивают дистиллированной водой, погружают на 15 минут в физиологический раствор, опять ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Просматривают под люминесцентным микроскопом.

РНГА – ставится в полистироловых планшетах в 2-х лунках.

1-я опытная: 0,25мл исследуемого материала + 1 капля бруцеллезного эритроцитарного диагностикума.

2-я контрольная: 0,25мл исследуемого материала + 1 капля иммунной специфической сыворотки +

1 капля бруцеллезного эритроцитарного диагностикума.

Результат положительный, если эритроциты выпадают на дно лунки равномерным слоем (зонтик), при отрицательной реакции они оседают в виде пуговки.

Реакция Райта – это развернутая РА, ставится в пробирках. Сыворотка больного разводится от 1:25 до 1:1600 в объеме 0,5мл, в каждую пробирку вносим по 0,5мл бруцеллезного диагностикума.

Учет результатов через 2 часа t= 37 0 С, окончательный через 24 часа.

Положительная реакция – титр 1:100 и выше. Можно ставить РА на стекле — реакция Хеддельсона.

3. Аллергический метод (проба Бюрне).

В предплечье внутрикожно вводят 0,1мл бруцеллина. Через 24-48 часов учет результатов. В положительном случае отек и гиперемия размером 4 × 6см.

Заражение проводят путем введения исследуемого материала в паховую область белым мышкам. Из органов павшего животного готовят мазки-отпечатки, окрашивают люм-сывороткой и микроскопируют.

5. Бактериологический метод – посев проводят в комбинированную среду (МПА скошенный +МПБ) в два флакона. Один инкубируют при повышенном содержании СО2, другой в обычных условиях. Начиная с 4-го дня просматривают посевы. При положительном результате на агаре появляются мелкие, бесцветные, выпуклые колонии.

Если в течение месяца колонии не обнаруживаются, делаем контрольный высев на плотную питательную среду.

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА — BRUCELLA

источник

79. НАИБОЛЕЕ ВИРУЛЕНТНА ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА

81. ДЛЯ БРУЦЕЛЛЕЗА ХАРАКТЕРНО

2) самопроизвольные аборты

82. ФАКТОРЫ ПЕРЕДАЧИ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ ДЛЯ ЖИТЕЛЕЙ ГОРОДА

1) выделения больных людей

3) выделения больных животных

4) нетребовательны к питательным средам

5) время генерации 15-20 мин.

84. ОСОБЕННОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРУЦЕЛЛЕЗА

1) отсутствие роста при первичном посеве

3) особо медленный рост в первых генерациях

4) не вирулентны для животных

85. ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ПРИМЕНЯЮТ

86. ВЫСОКАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ РА ХЕДДЛСОНА ОБУСЛОВЛЕНА ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

1) малых объемов диагностикума и разных объемов сывороток

2) больших объемов ингредиентов

3) живых культур возбудителя

4) проведением реакции при повышенной температуре

5) неразведенной сыворотки и концентрированного диагностикума

87. ИСТОЧНИК ИНФЕКЦИИ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ

88. С ПОМОЩЬЮ ПРОБЫ БЮРНЕ ОПРЕДЕЛЯЮТ

1) аллергическую перестройку организма

2) видовую принадлежность бруцелл

3) напряженность гуморального иммунитета

4) антигенную структуру бруцелл

89. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ МОЖЕТ ПРОВОДИТЬСЯ

3) живой вакциной Гайского-Эльберта

4) живой вакциной Вершиловой

90. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ ХЕДДЛСОНА И РАЙТА РАЗРЕШАЕТСЯ СТАВИТЬ В

1) лабораториях ООИ Госсанэпиднадзора России

2) серологических лабораториях ЛПУ

3) лабораториях службы переливания крови

4) сельских фельдшерско-акушерских пунктах (ФАП)

91. ОСНОВНОЙ ФАКТОР ПАТОГЕННОСТИ БРУЦЕЛЛ

92. ВО ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ БРУЦЕЛЛЫ

1) относительно высоко устойчивы

4) устойчивость различна по видам

1) общий родоспецифический антиген

4) антигены, общие с антигенами возбудителей холеры, туляремии, иерсиниоза О9

94. ПРИ МАССОВОМ ОБСЛЕДОВАНИИ НА БРУЦЕЛЛЁЗ ИСПОЛЬЗУЮТ

95. ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ НЕПОЛНЫХ АНТИТЕЛ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ ИСПОЛЬЗУЮТ РЕАКЦИЮ

96. В ПЕРВЫЕ ДНИ БОЛЕЗНИ ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ ИСПОЛЬЗУЮТ

97. БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ПРИ ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА ПРИМЕНЯЕТСЯ

1) при работе с контаминированным материалом

2) для экспресс-диагностики

3) с конца первого месяца заболевания

5) только при исследовании трупного материала

98. ДЛЯ БРУЦЕЛЛЕЗА ХАРАКТЕРНО

4) отсутствие разработанных схем лечения

5) молниеносное развитие заболевания

99. ВОЗБУДИТЕЛИ БРУЦЕЛЛЕЗА

100. ТИПИЧНАЯ МОРФОЛОГИЯ БРУЦЕЛЛ

101. ЗАРАЖЕНИЕ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ НЕ ВОЗМОЖНО ОТ

4) крупного рогатого скота

102. ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ НЕОБХОДИМО

1) повышенное содержание СО2 (для отдельных видов)

3) длительное инкубирование

103. В ЭПИДЕМИОЛОГИИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЧЕЛОВЕК

3) фактор изменчивости возбудителя

4) фактор селекции более вирулентных вариантов возбудителя

104. ПУТИ ЗАРАЖЕНИЯ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ

1) алиментарный, контактный

3) воздушно-капельный, контактный

4) трансплацентарный, половой

5) трансмиссивный, алиментарный

105. ДЛЯ ПАТОГЕНЕЗА БРУЦЕЛЛЕЗА ХАРАКТЕРНО

1) захват микробных клеток макрофагами

2) лимфогенное и гематогенное распространение

3) аллергическая перестройка организма

106. ДЛЯ ПРОБЫ БЮРНЕ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА ИСПОЛЬЗУЮТ

1) люминесцентную сыворотку

3) агглютинирующую сыворотку

5) бруцеллезный диагностикум

107. ВЫДЕЛЕНИЕ ГЕМОКУЛЬТУРЫ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ НАИБОЛЕЕ ВЕРОЯТНО

1) в конце инкубационного периода

2) при лечении антибиотиками

3) в период реконвалесценции

4) при обострении заболевания

108. БРУЦЕЛЛЕЗНАЯ ЛЕЧЕБНАЯ ВАКЦИНА СОДЕРЖИТ

2) специфический белок бруцелл

4) антитела к антигенам бруцелл

109. ОСОБЕННОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРУЦЕЛЛЕЗА

1) отсутствие роста при первичном посеве

2) особо медленный рост в первых генерациях

5) не культивируется in vitro

110. ВИДЫ БРУЦЕЛЛ ДИФФЕРЕНЦИРУЮТ ПО

2) образованию сероводорода

3) агглютинации с монорецепторными сыворотками

4) росту на средах с красителями

5) всему вышеперечисленному

111. ПОСТИНФЕКЦИОННЫЙ ИММУНИТЕТ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ

112. В ОБЫЧНЫХ ЛАБОРАТОРИЯХ ОСНОВНОЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА

Читайте также:  Резидуальный бруцеллез локомоторная форма

113. ИНКУБАЦИОННЫЙ ПЕРИОД ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ СОСТАВЛЯЕТ

114. В КРАСНОЯРСКОМ КРАЕ СЕРЬЕЗНУЮ ОПАСНОСТЬ БРУЦЕЛЛЕЗ ПРЕДСТАВЛЯЕТ

4) в местах концентрации крупного рогатого скота

5) опасности не представляет

115. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ БРУЦЕЛЛЕЗА ВОЗМОЖНО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

4) живой вакцины Вершиловой

116. ОСНОВНАЯ МЕРА ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗОМ

1) всеобщая вакцинация людей

2) выведение генетически устойчивых животных

3) санэпиднадзор за молокозаводами, мясокомбинатами и в животноводстве

117. БРУЦЕЛЛЕЗ ОТНОСИТСЯ К ОСОБО ОПАСНЫМ ИНФЕКЦИЯМ В СИЛУ

2) повсеместного распространения

3) способности передаваться от человека к человеку

4) сложности микробиологической диагностики

118. НЕДОСТАТОК ЛЕЧЕБНОЙ БРУЦЕЛЛЕЗНОЙ ВАКЦИНЫ

2) необходимость многократного применения

3) высокая аллергизация организма

4) отсутствие производства в России

5) ограничения по возрасту

ВОЗДУШНО-КАПЕЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИИ

источник

Методы МБ диагностики бруцеллеза.

· К биологической пробе ( заражение морских свинок) прибегают в том случае, если материал сильно загрязнён посторонней микрофлорой и получить непосредственно из него чистую культуру возбудителя трудно. (Вводится морской свинке по 1.0 подкожно в паховую обл. Через 30 дней: Проба Бюрне, р-ия Райта, посев материала из органов и лимфатических узлов на питатетльные среды для выделения чистой культуры)

· Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:

А. Для обнаружения антител

1. Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах — МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.

2. Реакция Кумбса (для определения неполных антител).

3. Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

5. Иммуноферментный метод (ИФМ – лунки сенсибилизируют антигеном).

6. Реакция связывания комплемента.

7. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР) – прогностическое значение.

Б. Для обнаружения антигена

1. Реакция агрегат-гемагглютинации.

2. Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).

3. РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл.

Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза используют ПЦР.

· Аллергический — проба Бюрне

От больного человека — кровь, костный мозг , моча (печеночный бульон + антифаговая сыворотка)

От больного животного — абортивный плод, околоплодная жидкость, кусочки некротизированной плаценты, моча, молоко, мясо (печеночный агар и бульон+ антифаговая сыворотка+ генциа-виолет)

Печеночный МПА + антифаговая сыворотка:

1)Биохимические тесты( активность уреазы, образование сероводорода. При необходимости др тесты.

2)Р-ия агглютинации со спец. сывороткой

3) Изучение отношения к Тбилиотическому бруцеллезному фагу

4)Изучение роста на средах с красителями

Серодиагностика бруцеллеза.

Преимущества реакции Кумбса при серодиагностике бруцеллеза.

При помощи р-ии прямой и пассивной агглютинации определяют полные ( бивалентные) антитела. Неполные ( моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами , так как, соединяясь с антигеном , блокируют его, но не могут вызвать аггрегации антигены в крупные конгломераты. Для выявления неполных антител используют спец. р-июКумбса. В р-ии участвуют : а)сыворотка больного в которой преобладают неполные антитела, б)антиген-диагностикум, в)антиглобулиновая сыворотка- антитела к человеческому глобулину.

Реакция протекает в 2 этапа:

1)взаимодействие антигена с неполными антителами

2)взаимодействие антиглобулиновой сыворотки с антителами, адсорбированными на антигене.

В силу того, что антиглобулиновые антитела двувалентны, они связывают 2 одновалентных антитела, адсорбированных соотвественно на 2 антигенах , что приводит к склеиванию антигенов, к их агглютинации.

Серологические экспресс-реакции для диагностики бруцеллеза.

Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

Реакция Хеддльсона и реакция Райта, их сущность.

1. Реакция Хеддльсона: На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3×3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл, в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль). В каждую каплю другой микропипет­кой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.

Оценка реакции: агглютинация только в первой капле – реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях – реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях – реакция резко положи­тельная.

Примечание: Реакция Хеддльсона имеет только скрининговое, ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить более надежные серологические реакции (Райта, РПГА, ИФМ) и/или аллергическую пробу Бюрне.

Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.

2. Реакция Райта(ставится по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 16). Диагностический титр реакции Райта — 1:200): Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза. Отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки — реакция «отрицательная». Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости. Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза

Дата добавления: 2019-01-14 ; просмотров: 68 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

источник

В 1886 г. Д. Брюс в селезенке больного, погибшего от мальтийской лихорадки, обнаружил маленькую коккобактерию, которую выделил в чистой культуре и назвал Micrococcus.

В 1896 г. Б. Банг из околоплодной жидкости при аборте коров также выделил коккобактерии. В 1914 г. Ж. Траум выделил подобную палочку от больных свиней. А в 1916 г. Ивенс, изучив все выделенные микроорганизмы, определила их схожесть и в честь Брюса они были названы бруцеллами. В дальнейшем (1953, 1957, 1966) были открыты и другие виды бруцелл. Все они объединены в род Brucella.

В настоящее время бруцеллы подразделяют на виды по признаку их основного хозяина: В. melitensis — болеет мелкий рогатый скот (овцы, козы); В. abortus — болеет крупный рогатый скот; В. suis — болеют свиньи и т. д.

Каждый вид бруцелл подразделяют на биовары: В. melitensis включает 3 биовара; В. abortus — 9 биоваров; В. suis — 5 биоваров. Наиболее патогенным для человека является В. melitensis. B. abortus редко вызывают клиническое проявление заболевания у человека.

Морфология. Возбудители бруцеллеза мелкие 0,6-0,8 × 0,3-0,5 мкм бактерии палочковидной или овоидной формы. Неподвижны. Спор не имеют. Образуют нежную капсулу. Грамотрицательны. В мазке располагаются беспорядочно.

Культивирование. Бруцеллы — аэробы. Прихотливы к питательным средам. Характеризуются замедленным ростом (2-3 нед). Выращивают их на специальных питательных средах: сывороточно-декстрозном агаре, на агаре из картофельного настоя с сывороткой и кровяным агаром (5% овечьей крови), среде «Д», печеночном агаре МПА и МПБ. Растут они при температуре 37° С и рН 6,8-7,2. Некоторые штаммы требуют для роста 5-10% СО2, особенно при первоначальном выделении. На плотных питательных средах вырастают нежные, мелкие, бесцветные, выпуклые с перламутровым блеском колонии в S-форме. Под влиянием некоторых факторов они могут диссоциировать в R-форму. Под действием антибиотиков у них возникают L-формы. В жидких питательных средах бруцеллы дают равномерную муть. Бруцеллы можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриона.

Дифференцируют виды бруцелл на основании их способности образовывать сероводород и расти на средах с красителями — основным фуксином и тионином (табл. 44).


Таблица 44. Биологические свойства бруцелл

Ферментативные свойства. Бруцеллы расщепляют D-рибозу, D-галактозу, аланин, аспарагин. Некоторые штаммы гидролизуют аминокислоты с образованием аммиака.

Бруцеллы образуют гиалуронидазу, каталазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу и др. Бруцеллы обладают выраженными инвазивными и агрессивными свойствами.

Токсинообразование. Патогенное действие бруцелл определяется, по-видимому, наличием эндотоксина. Кроме того, они обладают аллергенными свойствами.

Антигенная структура. Бруцеллы содержат два соматических антигена А и М. Эти антигены являются видоспецифичными. Они всегда входят в состав микробной клетки, но в разных соотношениях. У В. melitensis преобладает антиген М, у В. abortus и В. suis — антиген А. Кроме того, у них выявлен термолабильный Vi-антиген.

Устойчивость к факторам окружающей среды. При 100° С бруцеллы погибают мгновенно. При температуре 80-85° С — через 5 мин, при 60° С — через 30 мин. К низким температурам они очень устойчивы. Прямые солнечные лучи действуют на них губительно. Во влажной среде бруцеллы сохраняются длительно — 3-4 мес. В молочных продуктах — до 40-45 дней, замороженном мясе — до 5 мес, почве и воде — до 3-5 мес.

Восприимчивость животных. Бруцеллезом болеют в основном сельскохозяйственные животные: мелкий и крупный рогатый скот, свиньи, олени и др. Каждый вид бруцелл поражает определенный вид животного. Но бруцеллы могут мигрировать, т. е. переходить от одного вида животного другому. Например, В. abortus могут поражать мелкий рогатый скот.

Основными признаками заболевания являются: у самок — аборты, у самцов — орхиты. Кроме того, у них бывает поражение суставов, похудание, выпадение шерсти и т. д. Но бруцеллез у животных может протекать в скрытой форме, что способствует распространению инфекции.

Из экспериментальных животных к бруцеллам чувствительны белые мыши и морские свинки. После заражения они абортируют, резко худеют, у них выпадает шерсть. У мышей иногда развивается септицемия.

Источники инфекции. Основным источником заболевания бруцеллезом людей являются мелкий и крупный рогатый скот. Роль человека в передаче бруцеллезной инфекции эпидемиологического значения не имеет.

Пути передачи. Пищевой, контактно-бытовой, воздушно-капельный.

Контактный путь — при работе с животными: в процессе ухода за животными, на предприятиях, перерабатывающих сырье и продукты животного происхождения; при соприкосновении с выделениями больных животных, плодом, в процессе убоя, разделки туши и т. д.

Аэрогенным путем бруцеллы проникают в кожу и неповрежденные слизистые оболочки.

Пищевой путь — употребление зараженных пищевых продуктов. Наиболее опасны молочные продукты — молоко, брынза и т. д.

Патогенез. Попав в организм, бруцеллы по лимфатическим путям проникают в лимфатические узлы, кровь, костный мозг, паренхиматозные органы и локализуются внутри клеток. При обострении процесса бруцеллы из клеток вновь попадают в кровь и возникает рецидив. Заболевание характеризуется воспалением суставов, невралгией и естественными абортами.

Иммунитет — обусловливается клеточными (фагоцитоз) и гуморальными факторами — агглютининами, комплементсвязывающими антителами и др. Иммунитет сочетается с состоянием аллергии. В опытах на морских свинках было показано, что устойчивость к повторному заражению у них сочеталась с положительной реакцией к бруцеллину.

Профилактика. Плановые обследования в животноводческих хозяйствах, на пастбищах, в убойных пунктах, на мясных и молочных комбинатах.

Специфическая профилактика. Вакцинация живой вакциной В. abortus (штамм 19-ВА). Прививки проводят накожным методом однократно, ревакцинируют через 8-12 мес.

Лечение. Антибиотики: левомицетин, эритромицин. Для предупреждения рецидивов используют также бруцеллезный иммуноглобулин.

1. Какие Вы знаете виды бруцелл и какой из них патогенен для человека?

2. На каких средах культивируют бруцеллы и чем характеризуется их рост на средах?

3. С чем связано патогенное действие бруцелл?

Цель исследования: выявление возбудителя бруцеллеза.

Работу с бруцеллами проводят в строго режимных условиях.

2. Спинномозговая жидкость.


Способы сбора материала


Ход исследования


Ход исследования

1. В каких условиях проводят работу с материалом, полученным от больного бруцеллезом?

2. Какой материал служит для диагностического исследования?

3. Перечислите основные методы исследования.

4. На каких животных ставят биологическую пробу?

Сывороточно-декстрозный агар. Основой этой среды является питательный агар, который готовят следующим образом: к 835 мл дистиллированной воды добавляют 15 г агар-агара, 10 г пептона, 5 г х. ч. хлорида натрия и 165 мл мясной воды. Все ингредиенты вводят в сосуд и подвергают обработке текучим паром в течение часа. Устанавливают рН 7,8. Затем сосуд ставят в автоклав, при 2 атм, температуре 120° С выпадают фосфаты. Среду фильтрют через бумажные фильтры, устанавливают рН 7,4, разливают в мерную посуду и стерилизуют при температуре 116° С в течение 15 мин. Заготовленный таким образом агар по мере надобности расплавляют на водяной бане и охлаждают до 50° С. Затем к нему добавляют нормальную инактивированную (при 56° С 30 мин) лошадиную или бычью сыворотку и раствор декстрозы, простерилизованный путем фильтрации через фильтр Зейтца. Окончательная концентрация сыворотки должна быть 5% и декстразы — 1%.

Среда «Д»: а) бульон «Д» — к 100 мл холодной дистиллированной воды добавляют 2,5 г порошка стандартного бульона «Д», прогревают и тщательно размешивают до полного его растворения; затем бульон фильтруют, разливают в необходимую посуду и стерилизуют при 120° С в течение 20 мин (рН среды 7,1-7,2); б) агар «Д» — к 100 мл холодной дистиллированной воды добавляют 20 г порошка стандартного агара «Д», прогревают при помешивании до полного растворения порошка, не допуская его подгорания, затем фильтруют, разливают в необходимую посуду и стерилизуют при 120° С в течение 20 мин (рН среды 7,2). Среды готовит Институт эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалея АМН СССР.

источник

Лабораторная диагностика бруцеллеза осуществляется с помощью биологической пробы, бактериологического метода, серологических реакций, аллергической пробы Бюрне и метода ДНК—ДНК гибридизации. Материалом для исследования служат кровь, костный мозг, конъюнктивальный секрет, моча, грудное молоко (у кормящих матерей), реже — испражнения, околосуставная жидкость. Поскольку основным местом пребывания возбудителя в организме являются клетки гемо- или лимфопоэтической систем, предпочтение следует отдавать выделению гемо- или миелокультуры. При бактериологическом исследовании необходимо обеспечить условия для роста В. abortus (потребность в СО2). Идентификацию выделенных культур бруцелл проводят на основании указанных в табл. 30 признаков. К биологической пробе (заражение морских свинок) прибегают в том случае, когда материал сильно загрязнен посторонней микрофлорой и получить непосредственно из него чистую культуру возбудителя трудно. Серологические реакции могут быть использованы либо для обнаружения антигенов возбудителя, либо для выявления антител к нему. Для обнаружения бруцеллезных антигенов, которые могут циркулировать в крови либо в свободном виде, либо в виде комплексов антиген + антитело (ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы), используют следующие реакции: РПГА (особенно с использованием эритроцитарных диагностикумов с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл); реакцию агрегат-гемагглю-тинации (РАГА); эритроциты несут антитела к бруцеллезным антигенам; реакции коагглютинации, преципитации и ИФМ. Для обнаружения антител в сыворотке больного используют: реакцию агглютинации Райта, реакцию Кумбса (для выявления неполных антител), реакцию иммунофлуоресценции в непрямом варианте, рПГА, ИФМ, РСК, ОФР, а также ускоренные реакции на стекле: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинации, непрямую реакцию гемолиза (эритроциты, сенсибилизированные ЛПС бруцелл, в присутствии антител и комплемента лизируются).

Читайте также:  Можно ли брать кровь на бруцеллез у стельных коров

Специфическая профилактика осуществляется с помощью живой вакцины, приготовленной из штамма В. abortus (живая бруцеллезная вакцина — ЖБВ), только в очагах козье-овечьего бруцеллеза. Вакцина применяется накожно, однократно. Ревакцинацию проводят только лицам, у которых проба Бюрне и серологические реакции отрицательны.

10. Серологические методы диагностики бруцеллеза. Серологические реакции могут быть использованы либо для обнаружения антигенов возбудителя, либо для выявления антител к нему. Для обнаружения бруцеллезных антигенов, которые могут циркулировать в крови либо в свободном виде, либо в виде комплексов антиген + антитело (ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы), используют следующие реакции: РПГА (особенно с использованием эритроцитарных диагностикумов с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл); реакцию агрегат-гемагглю-тинации (РАГА); эритроциты несут антитела к бруцеллезным антигенам; реакции коагглютинации, преципитации и ИФМ. Для обнаружения антител в сыворотке больного используют: реакцию агглютинации Райта, реакцию Кумбса (для выявления неполных антител), реакцию иммунофлуоресценции в непрямом варианте, рПГА, ИФМ, РСК, ОФР, а также ускоренные реакции на стекле: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинации, непрямую реакцию гемолиза (эритроциты, сенсибилизированные ЛПС бруцелл, в присутствии антител и комплемента лизируются).

1. Неклостридиальная анаэробная микрофлора. Состав группы, роль в патологии человека.

Дата добавления: 2015-01-29 ; просмотров: 15 ; Нарушение авторских прав

источник

Название работы: Микробиологическая диагностика бруцеллеза и сибирской язвы

Категория: Практическая работа

Предметная область: Медицина и ветеринария

Описание: Цель: Изучение методов микробиологической диагностики терапии и профилактики бруцеллеза и сибирской язвы. Тема 5: Микробиологическая диагностика бруцеллеза и сибирской язвы. Возбудитель сибирской язвы Сибирская язва nthrx зоонозная инфекционная болезнь вызываемая Bcillus nthrcis.

Методические указания для студентов к практическому занятию № 34.

Тема занятия: Микробиологическая диагностика бруцеллеза и сибирской язвы.

Цель: Изучение методов микробиологической диагностики, терапии и профилактики бруцеллеза и сибирской язвы.

Модуль 2 . Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10 . Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема 5: Микробиологическая диагностика бруцеллеза и сибирской язвы.

Бруцеллез — инфекционная болезнь, вызываемая бактериями рода Brucella, характеризующаяся длительной лихорадкой, поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой и мочеполовой систем. Название рода связано с именем Д.Брюса, открывшего в 1886 г. возбудителя бруцеллеза.

Таксономия. Основные возбудители бруцеллеза – B . melitensis , В. abortus , В. suis , относятся к отделу Gracilicutes , роду Brucella .

Морфология и тинкториальные свойства. Бруцеллы — мелкие грамотрицательные палочки овоидной формы длиной 0,6-1,5 мкм, шириной 0,5-0,7 мкм. Не образуют спор, не имеют жгутиков и капсулы.

Культивирование. Бруцеллы — облигатные аэробы; В. abortus для роста нуждается в присутствии 5-10 % углекислого газа. Оптимальная температура для роста 37 0 С, оптимальное значение рН среды 6,8-7,2. Бруцеллы требовательны к питательным средам и растут на специальных средах (печеночных и др.). Их особенностью является медленный (в течение 2.3 нед) рост.

Ферментативная активность. Биохимическая активность бруцелл сравнительно невысока.

Антигенная структура. Бруцеллы имеют 2 разновидности О-антигена — А и М. Эти антигены видоспецифичны; у В. melitensis в большем количестве содержится М-антиген, у В. abortus и В. suis преобладает А-антиген.

По биохимическим, антигенным свойствам, способности расти на средах с красителями фуксином и тионином внутри видов различают биовары.

Факторы патогенности. Бруцеллы образуют эндотоксин, обладающий высокой инвазивной способностью, а также продуцируют один из ферментов агрессии — гиалуронидазу. Их адгезивные свойства связаны с белками наружной мембраны.

Резистентность. Бруцеллы очень быстро погибают при кипячении, действии дезинфицирующих средств, но довольно устойчивы к низким температурам (в замороженном мясе сохраняются до 5 мес, в молочных продуктах до 1,5 мес).

Восприимчивость животных. К бруцеллам очень чувствительны морские свинки, кролики, белые мыши.

Эпидемиология. Бруцеллез — зоонозная инфекция; источником инфекции являются крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, реже олени, лошади, собаки, кошки и другие животные. В России основной источник бруцеллеза — овцы, выделяющие В. melitensis, но могут быть и коровы (B.abortus). Больные люди не являются источником инфекции. Заражение бруцеллезом происходит при употреблении молочных продуктов, мяса. Нередко заболевают люди, имеющие контакты с больными животными, например доярки, пастухи. Бруцеллез встречается в разных странах. Наблюдаются как спорадические случаи, так и вспышки заболевания в основном в животноводческих районах.

Патогенез. Бруцеллы проникают в организм через слизистые оболочки и кожу, попадают в регионарные лимфатические узлы, затем в кровь. Током крови бактерии разносятся по всему организму и внедряются в органы ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенку, костный мозг). Там они могут длительное время сохраняться и вновь попадать в кровь. При гибели бруцелл освобождается эндотоксин, вызывающий интоксикацию организма. В патогенезе заболеваний играет также роль сенсибилизация организма бруцеллами.

Клиническая картина. Инкубационный период составляет от 1 до 3 нед. Симптоматика развивающегося заболевания очень разнообразна. Бруцеллез характеризуется длительной лихорадкой, ознобами, потливостью, болями в суставах в результате их поражения. Нередко возникают радикулиты и миозиты. В патологический процесс вовлекаются также сердечно-сосудистая, мочеполовая и другие системы. Болезнь имеет затяжной характер.

Иммунитет. После перенесенного заболевания формируется непрочный и непродолжительный иммунитет, он сохраняется в течение 6.9 мес. Нередко люди, перенесшие бруцеллез, вновь заболевают этой инфекцией.

Микробиологическая диагностика. В качестве материала для исследования используют кровь, мочу, костный мозг. Основной метод диагностики — бактериологический, позволяющий определить не только род возбудителя, что важно для постановки диагноза, но и вид, установление которого производят для выявления источника инфекции. Применяют также серологический метод (реакции агглютинации Райта и Хеддльсона, РИГА, РСК и др.), кожные аллергические пробы (проба Бюрне с бруцеллином).

Лечение. Основное лечение — антибиотикотерапия. Очень редко используют для вакцинотерапии убитую вакцину.

Профилактика. Основная роль в профилактике бруцеллеза принадлежит санитарно-гигиеническим мероприятиям (в том числе пастеризации молока). Кроме того, применяют по эпидемическим показаниям живую бруцеллезную вакцину.

Возбудитель сибирской язвы

Сибирская язва (anthrax) — зоонозная инфекционная болезнь, вызываемая Bacillus anthracis, характеризующаяся тяжелой интоксикацией, поражением кожи и лимфатической системы.

Возбудитель сибирской язвы В. anthracis выделен Р. Кохом в 1876 г.

Таксономия, морфология, культивирование. Возбудитель относится к отделу Firmicutes. Это крупная, грамположительная, неподвижная палочковидная бактерия длиной 6-10 мкм, имеет центральную спору; в организме человека и животного, а также на специальных питательных средах образует капсулу.

Бациллы сибирской язвы хорошо растут на основных питательных средах; на МПА вырастают шероховатые колонии R-формы, края которых под малым увеличением микроскопа сравнивают с головой медузы или гривой льва.

Антигенная структура и факторы патогенности. Возбудитель имеет капсульный протеиновый и соматический полисахаридный родовой антигены; продуцирует экзотоксин, представляющий собой белковый комплекс из нескольких компонентов (летального, вызывающего отек, и протективного).

Резистентность. В живом организме возбудитель существует в вегетативной форме, в окружающей среде образует устойчивую спору. Вегетативные формы малоустойчивы: погибают при 60 0 С в течение 15 мин, при кипячении — через минуту. Споры высокорезистентны: сухой жар убивает их при температуре 140 0 С в течение 2-3 ч; в автоклаве при температуре 121 0 С они гибнут через 15-20 мин. Споры десятилетиями сохраняются в почве.

Восприимчивость животных. К возбудителю сибирской язвы восприимчивы крупный и мелкий рогатый скот, лошади, верблюды, свиньи, дикие животные.

Эпидемиология. Сибирская язва распространена повсеместно. Восприимчивость людей является всеобщей, но больной человек незаразен для окружающих: как и при других зоонозах, он представляется биологическим тупиком для этой инфекции. Уровень заболеваемости среди людей зависит от распространения эпидемий среди животных (эпизоотии), особенно среди домашних животных. Источник инфекции — больные животные. Длительная сохраняемость возбудителя в почве служит причиной эндемичных заболеваний сибирской язвой среди животных. Пути передачи инфекции различные: контактно-бытовой (при уходе за животными, снятии шкуры, приготовлении изделий из кожи и шерсти больных животных), аэрогенный (при вдыхании пыли, содержащей микробы), пищевой (употребление недостаточно термически обработанного мяса больных животных) и трансмиссивный (при кровососании слепнями, мухами, жигалками).

Патогенез. Входными воротами для возбудителя являются кожа, реже слизистые оболочки дыхательных путей, пищеварительного тракта. Основным патогенетическим фактором служит экзотоксин, компоненты которого вызывают отек, некроз тканей и другие повреждения.

Клиническая картина. Различают кожную, легочную, кишечную формы сибирской язвы, которые могут осложняться сепсисом. Инкубационный период в среднем равен 2-3 дням. При кожной форме на месте внедрения возбудителя развивается сибиреязвенный карбункул — очаг геморрагически-некротического воспаления глубоких слоев кожи с образованием буро-черной корки (anthrax — уголь). При кишечной и легочной форме развиваются интоксикация, геморрагические поражения кишечника и легких. Летальность высокая.

Иммунитет. В результате перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет. Однако возможны рецидивы.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат содержимое карбункула, мокрота, испражнения, кровь. Проводят бактериоскопию мазков, делают посевы на питательные среды, заражают лабораторных животных (биопроба). Для обнаружения антигена в исследуемом материале используют РИФ и реакцию преципитации Асколи с диагностической преципитирующей сибиреязвенной сывороткой. Применяют аллергическую внутрикожную пробу с антраксином — аллергеном из сибиреязвенных бацилл.

Лечение. Назначают антибиотики: пенициллины, тетрациклины, левомицетин, рифампицин.

Профилактика. Неспецифическая профилактика основывается на комплексе ветеринарно-санитарных мероприятий: выявляют и ликвидируют очаги инфекции. Специфическая профилактика заключается в применении живой сибиреязвенной вакцины СТИ, предложенной Н. Н. Гинсбургом и А. Л. Тамариным. Вакцина представляет собой споровую культуру бескапсульного варианта сибиреязвенных бацилл. Вакцина применяется по эпидемическим показаниям; прививают работников животноводства в населенных пунктах, неблагополучных по сибирской язве.

Ознакомиться с биологическими свойствами и классификацией вида Bacillus anthracis.

Патогенность для человека вида Bacillus anthracis.

Описывать патогенез сибирской язвы.

Изучить методы микробиологической диагностики сибирской язвы.

Трактовать результаты микроскопического исследования нативных препаратов.

Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии сибирской язвы.

Проводить дифференциацию Bacillus anthracis.

Забирать материал для исследования от больных сибирской язвой .

Выделить чистую культуру Bacillus anthracis.

Трактовать результаты микроскопического исследования нативных препаратов.

1. Возбудитель сибирской язвы (Bacillus anthracis).

  • Свойства. Резистентность .
  • Патогенность для человека и животных. Факторы патогенности, токсины.
  • Патогенез заболевания у людей, иммунитет.
  • Микробиологическая диагностика .
  • Специфическая профилактика и лечение сибирской язвы.

Практические задания, которые выполняются на занятии:

  1. Микроскопия демонстрационных препаратов:
  • мазок-отпечаток из органов лабораторных животных (окраска метиленовым синим),
  • мазок из чистой культуры Bacillus anthracis,
  • споры Bacillus anthracis (окраска по Ожешко).
    1. Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.
      1. Разбор схемы лабораторной диагностики сибирской язвы.
      2. Оформление протокола.

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, Санкт-Петербург «Специальная литература», 1998. — 592с.

2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология / Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.- М.:Медицина, 1983,-512с.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией. — Киев: В и ща школа, 1992. — 431с.

4. Медицинская микробиология / Под редакцией В.И. Покровского. -М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.-768с.

5. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. Под ред. М.П. Зыкова. М. «Медицина». – 1977. – 288 с.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес. – М.: Медицина, 1986. – 512 с.

1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и иммунология. Алма-Ата, «Казахстан», 1974. – 372 с.

2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби. — К., 1995. – 321с.

3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. — М.: Медицина, 1990. — 559 с.

5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов. – Мн.: Выш. шк., 1986. – 255 с.

Краткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения методов микробиологической диагностики сибирской язвы. Студенты изучают схему выделения чистой культуры Bacillus anthracis и микроскопируют готовые зафиксированные мазки из чистой культуры Bacillus anthracis. Дальше студенты ознакамливаются с правилами забора материала от больных сибирской язвой для проведения прямой микроскопии исследуемого материала. Потом студенты зарисовывают микропрепараты и дают необходимые пояснения.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовка в протокол занятия.

В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итоговых результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия.

источник