Исследование молока при бруцеллезе

В соответствии с требованиями Санитарных и ветеринарных правил для молоч­ных ферм колхозов, совхозов и подсобных хозяйств запрещается использовать в пищу и скармливать животным молоко от коров, больных: сибирской язвой, эм­физематозным карбункулом, бешенством, злокачественным отеком, лептоспирозом, чумой, контагиозной плевропневмонией, Ку-лихорадкой, а также при поражении вымени актиномикозом, некробактериозом и в других случаях, пре­дусмотренных соответствующими инструкциями. Такое молоко после кипяче­ния в течение 30 мин уничтожают.

Молоко животных, карантинированных по поводу сибирской язвы, можно допускать в пищу после кипячения. В сыром виде его используют только после снятия карантина. Молоко кобыл, больных сапом, а также положительно реагирующих на маллеин, после кипячения в течение 30 мин уничтожают.

Туберкулез. Возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота опасен для человека, и особенно для детей, которые при употреблении молока от зара­женных коров заболевают туберкулезом в 90-100% случаев.

Микобактерии туберкулеза кислотоустойчивы. В кислом молоке они со­храняют патогенность в течение 20 дней, в сыре — более 60 дней, в сливочном масле — до 100 дней, в мороженом масле — до 6,5 лет. В жидкой среде при 60 °С микобактерии инактивируются в течение 30 мин.

Молоко больных туберкулезом коров по химическим и физическим свой­ствам резко отличается от молока здоровых животных. В нем в 2 раза (до 7,2%) увеличивается содержание белковых веществ (альбуминов и глобулинов), по­вышается вязкость молока, количество минеральных веществ и воды, снижается содержание жира (до 0,7%), лактозы и титруемая кислотность. Молоко становится жидким, с наличием хлопьев, приобретает зеленовато-желтую окраску и соленый вкус. Если туберкулезом поражена молочная железа — молоко голубова­того цвета.

Молоко от животных, больных туберкулезом, кипятят в течение 10 мин и используют для откорма животных.

Молоко от нереагирующих аллергически коров из неблагополучного по туберкулезу хозяйства пастеризуют непосредственно на ферме при температуре 90 °С в течение 5 мин или при температуре 85 °С в течение 30 мин. На молоко­приемный пункт, молочный завод или маслозавод разрешается вывозить только пастеризованные сливки.

От животных, положительно реагирующих на тубер­кулин, молоко обеззараживают кипячением с последующим использованием внутри хозяйства. Допускается переработка такого молока в топленое масло. Обрат кипятят и используют внутри хозяйства.

Бруцеллез. Для человека патогенными, видимо, являются бруцеллы всех шести видов: Br. suis, Br. neotome, Br. ovis, Br. canis, но особенно опасен Br.militensis. В охлажденном молоке бруцеллы сохраняются до 80 дней, в слив­ках — до 10, в сливочном масле — до — 67, в сырах — до 42, в кумысе при кислот­ности 120-140 0 Т — до 3 дней. Пастеризация молока при температуре 60 °С в те­чение 30 мин убивает бруцелл.

Молоко от бруцеллезных животных с клиническими признаками болезни кипятят в хозяйстве в течение 5 мин или перерабатывают на топленое масло-сырец.

Молоко от животных, положительно реагирующих по серологическим реакциям на бруцеллез, но не имеющих клинических признаков болезни, раз­решается употреблять в пищу после пастеризации при температуре не ниже 70 °С в течение 30 мин.

Молоко от нереагирующих коров неблагополучной фермысепарируют и обеззараживают пастеризацией непосредственно на данной фер­ме. На молокоприемный пункт, молочный завод или маслозавод можно выво­зить только пастеризованные сливки.

В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах запрещается доить коз и овец.

Молоко, полученное от вакцинированных животных, в течение 6 мес по­сле последнего зарегистрированного в стаде аборта и удаления из него аборти­ровавших коров подвергают пастеризации.

Ящур. Возбудитель — фильтрующийся вирус, который содержится и в мо­локе больных животных. Восприимчивы к ящуру животные и человек, особенно дети.

В молоке вирус сохраняется до 45 дней. Холод консервирует его, нагрева­ние до 60-70°С в жидкой среде убивает через 15 мин.

В молоке коров, больных ящуром, увеличивается количество лейкоцитов (в 7 раз), жира (на 7-8%), сыво­роточных белков, кальция.

При переработке молока на масло и творог его реко­мендуется пастеризовать при температуре 85-90°С в течение 30 мин.

Иногда молоко коров, больных ящуром, приобретает неприятный вкус и запах, слизи­стую консистенцию, в нем появляются хлопья. Такое молоко утилизируют или уничтожают.

Листериоз. К листериозу восприимчивы животные и человек. Листерии у лактирующих коров, овец и коз выделяются с молоком. Его можно использо­вать в пищу после пастеризации при температуре не ниже 80°С в течение 30 мин.

Туляремия. Возбудитель выделяется с молоком, в котором он сохраняет­ся до 8 дней, в мороженом молоке — до 104 дней. Восприимчив к болезни чело­век.

Молоко животных в хозяйствах, где зарегистрировано массовое заболева­ние грызунов, а также молоко животных, положительно реагирующих на туля­ремию по реакции агглютинации, перед использованием в пищу пастеризуют или кипятят.

Инфекционная агалактия овец и коз. Возбудитель выделяется с моло­ком в период болезни животных и в течение 4 мес после переболевания.

Моло­ко с измененными органолептическими показателями и с признаками мастита у животных после кипячения уничтожают.

Молоко животных, у которых отмеча­ется глазная и суставная формы болезни, после кипячения допускают в пищу.

Молоко от овец и коз неблагополучных по этой болезни отарпастеризуют и ис­пользуют в хозяйстве.

Некробактериоз. Если молочная железа не поражена, молоко используют после кипячения.

Оспа. Молоко, полученное от коров, коз и овец в неблагополучных по ос­пе хозяйствах, кипятят или пастеризуют, а затем перерабатывают на месте. Продукты переработки молока разрешается вывозить за пределы хозяйства по­сле снятия карантина.

Болезнь Ауески. Молоко допускают в пищу после кипячения или пасте­ризации.

Злокачественная катаральная горячка. Молоко больных коров исполь­зуют в пищу людям или в корм животным после кипячения на месте его полу­чения.

Паратуберкулез. Молоко коров, реагирующих на птичий туберкулин, можно выпускать в пищу или в переработку после пастеризации при 70 °С в те­чение 30 мин, при температуре не ниже 90 °С — в течение 10-15 мин или после кипячения в течение 5 мин.

Лейкоз. Молоко коров, больных лейкозом, использовать в пищу людям запрещается. Его уничтожают или после кипячения оно идет на откорм телятам, родившимся от больных лейкозом животных, или на откорм свиней.

Молоко от коров, подозрительных по заболеванию лейкозом, допускается в пищу людям после пастеризации при температуре 85°С в течение 10 мин или кипячения в те­чение 5 мин. Такое молоко можно перерабатывать в топленое молоко, ряженку, кефир и ацидофилин.

Молоко от здоровых коров из неблагополучного по лей­козу хозяйстваразрешается направлять на завод, где оно подвергается пастери­зации.

Лучевая болезнь. Молоко от больных в легкой и средней степени может иметь повышенную бактериальную обсемененность. Если содержание в таком молоке радиоактивных веществ не превышает предельно допустимых уровней, его пастеризуют при 95 °С в течение 10 мин и выпускают на общих основаниях. Пастеризацию молока необходимо проводить на протяжении 30 дней после радиа­ционного поражения животных.

При тяжелой и крайне тяжелой степени болезни надои молока у коров снижаются на 60-90%, а затем лактация может вообще прекратиться. У такого молока значительная бактериальная обсемененность, в том числе возбудителя­ми пищевых токсикоинфекций, и существенные сдвиги в биохимических по­казателях и биологической ценности. После кипячения молоко можно исполь­зовать в корм животным или его уничтожают.

Сальмонеллезы. С молоком сальмонеллы выделяются при тяжело проте­кающей инфекции, связанной с бактериемией. Они могут попадать в молоко из­вне при обработке и хранении. Инфицируется молоко и человеком, если он яв­ляется бактерионосителем.

Молоко, полученное от сальмонеллезных животных, рекомендуется кипя­тить в течение 5 мин.

Молоко из хозяйств, неблагополучных по сальмонеллезу телят в период вспышки и в течение 2 мес после нее, пастеризуют при 80 °С в течение 30 мин. Готовые молочные продукты при обнаружении в них сальмо­нелл направляют на техническую утилизацию.

Маститы. Возбудителями считаются стрептококки, нередко пиогенная инфекция, стафилококки, реже кишечная палочка, Вас. cereus, Cl. perfringens и другие микроорганизмы.

Состав и свойства молока заболевших маститом животных изменяются в зависимости от глубины и характера болезни. Стрептококки и стафилококки, содержащиеся в молоке, могут быть причиной пищевых отравлений бактери­ального происхождения, так как применяемые режимы обеззараживания молока не инактивируют токсины. Чаще в молоке больных коров уменьшается количе­ство казеина, лактозы, жира и обезжиренного сухого вещества, снижаются плотность и способность к свертыванию. Увеличивается содержание хлора, альбумина, уменьшается диаметр жировых шариков.

При выраженной клиниче­ской картине болезни молоко приобретает творожистую консистенцию, синева­тый или желтоватый цвет, соленый вкус. Такое молоко после кипячения подле­жит уничтожению.

Очень сложно или невозможно определить органолептически молоко от коров с хронической (скрытой) формой мастита. Для доения ко­ров больных маститом, используют переносные доильные ведра, которые де­зинфицируют после каждой дойки.

Молоко от этих .коров из непораженных четвертей вымени собирают в отдельную емкость, пастеризуют при 85°С в те­чение 30 мин или кипятят и используют в хозяйстве для кормления животных. Молоко из пораженных четвертей вымени уничтожают.

Гастроэнтерит, эндометрит. Молоко допускается в пищу только внутри хозяйства после кипячения в течение 10 мин.

Кетоз коров. При болезни у лактирующих животных нарушается жировой и углеводный обмен, в результате чего в крови и в молоке появляются кето­новые (ацетоновые) тела. Кетоз наблюдается у молодых и старых высокопро­дуктивных коров за несколько дней перед отелом или чаще после отела.

Моло­ко, содержащее значительное количество кетоновых тел, может быть токсично для человека и животных, поэтому его следует пастеризовать при 72 °С в тече­ние 30 мин или при 85 °С без выдержки. При положительной реакции на кето­новые тела молоко коров индивидуального пользования бракуют.

Обеззараживание молока, полученного от больных животных

Чаще применяют пастеризацию — нагревание молока до температуры не выше 100 °С с выдерж­кой или без нее. При этом инактивируют вегетативные формы бактерий.

Пастеризуют молоко в хозяйствах в том случае, если его отправляют не­посредственно в торговую сеть, столовые, детские сады, ясли, а также при неко­торых болезнях или подозрении в заболевании животных. Пастеризация может быть:

— длительной — молоко нагревают до температуры 63-65°С и выдерживают 30 мин,

— кратковременной — нагревание до температуры 72-76°С с выдержкой в течение 15-20 с,

— моментальной — нагревание молока до температуры 85-95°С без выдержки.

Режим пастеризации молока больных коров устанавливают в за­висимости от характера заболевания, чаще это делается при температуре 85-90°С с выдержкой в течение 30 мин.

Стерилизация  нагревание молока свыше 100 о С под давлением. Стерилизация обеспечивает полное уничтожение даже спор микроорганизмов.

Кипячение  простое нагревание молока до температуры кипения 100 о С. При некоторых болезнях молоко кипятят в течение 5 мин и более.

Актинизация  обработка молока инфракрасными и ультрафиолетовыми лучами.

источник

При заболевании коров бруцеллезом в молоке появляются антитела, которые при добавлении к молоку бруцеллезного антигена склеиваются (реакция агглютинации) и адсорбируются на жировых шариках.

Ход определения в пробирку диаметром 5-8мм наливают 1мл молока и 1 каплю цветного бруцеллезного антигена (взвесь бруцелл, окрашенных гематоксилином) и ставят в термостат при температуре 37°С на 40-45мин. Положительная реакция характеризуется появлением в верхнем слое жидкости кольца синего цвета, при сомнительной реакции -слабоокрашенного синеватого кольца, а при отрицательной — никаких изменений не наступает.

5. УИРС. Ветеринарно-санитарная оценка исследуемых проб молока с заполнением качественного удостоверения.

Контрольные вопросы

1. Отбор проб молока. Пороки молока.

2. Методы исследования молока.

3. Ветеринарно-санитарная оценка молока, полученного от животных, больных инфекционными болезнями (туберкулез, бруцеллез, лейкоз, ящур и др.).

4. Ветеринарно-санитарная экспертиза молока коров при незаразных болезнях и субклинических маститах.

УДОСТОВЕРЕНИЕ О КАЧЕСТВЕ №

Выдано на молоко____________________________________________________ ,

предприятие-изготовитель, район, город

Показатели безопасности подтверждены сертификатом

Дата выработки «_____» ___________г.

ВЕТЕРИНАРНОЕ СВИДЕТЕЛЬСТВО № 00 – 000000

от«_____»_______________________________200 г

Я, нижеподписавшийся ветеринарный врач, выдал настоящее ветеринарное свидетельство

(кому — наименование юридического лица или ФИО физического лица)

в том, что_______________________________________________________________

( наименование продукта или сырья животного происхождения согласно ГОСТ, ОСТ, ТУ)

в количестве ___________ ____________ _____________

(мест, штук, кг) (упаковка) (маркировка)

(наименование предприятия. Ф.И.О. владельца, адрес), (дата выработки) подвергнута ветеринарно-санитарной экспертизе в полном объеме изготовлена из сырья, прошедшего ветеринарно-санитарную экспертизу (ненужное зачеркнуть), и признана годной для

(реализации без ограничений, с ограничением — указать причины

или переработки согласно правилам ветсанэкспертизы)

(вид транспорта, маршрут следования)

(наименование и адрес (№ товаротранспортных документов)

Продукция подвергнута дополнительным лабораторным исследованиям

(наименование лаборатории, № экспертизы и результаты исследования)

_________________________________________________________________ (указываются эпизоотическое благополучие местности, дата и номер разрешений вышестоящего)

_____________________госветинспектора на вывоз продукции за пределы территории, перечисляются №№ клейм и др )

Свидетельство предъявляется для контроля при погрузке в пути следования и передается грузополучателю Копии свидетельства недействительны. При установлении нарушений порядка заполнения бланка свидетельство передается главному госветинспектору Субъекта российской Федерации по месту выхода груза с указанием выявленных нарушений

М.П. ФИО ветеринарного врача (полностью)

Пороки цвета молока.

Дата добавления: 2016-10-06 ; просмотров: 1836 | Нарушение авторских прав

источник

При исследовании молока кольцевой пробой на бруцеллез в пробирку диаметром 5 — 8 мм наливают 1 мл молока и 1 каплю цветного бруцеллезного антигена (взвесь бруцелл, окрашенных гематоксилином) и ставят ее в термостат при температуре 37 град. C на 40 — 45 минут. Положительная реакция характеризуется появлением в верхнем слое жидкости кольца синего цвета, при сомнительной реакции слабо окрашенное синеватое кольцо, а при отрицательной — никаких изменений не наступает.

ФАЛЬСИФИКАЦИЯ МОЛОКА И МЕТОДЫ ЕЁ ВЫЯВЛЕНИЯ

Контроль пастеризации молока

Проба на пероксидазу:

В пробирку наливают 5 мл пастеризованного молока, добавляют 5 капель р-ра крахмального КСl и 5 капель 0,5 % р-ра перекиси водорода. Содержимое перемешивают. Если цвет содержимого пробирки не изменился, то молоко пастеризовано правильно. Окрашивание содержимого пробирки в синий цвет показывает, что молоко пастеризовано с нарушением режима или к правильно пастеризованному молоку добавлено сырое молоко.

Лактоальбуминовая проба:

Используется для установления пастеризации при температуре выше 80 °С.

В колбе смешивают 5 мл пастеризованного молока и 20 мл воды, добавляют 3 мл 0,1 н р-ра серной кислоты для осаждения казеина и отфильтровывают. В пробирку вносят 5 мл фильтрата и кипятят. Если молоко пастеризовано при 80 °С, то при его кипячении не образуется хлопьев альбумина, а при охлаждении фильтрата не будет осадка.

Определение добавления воды в молоко

Для установления наличия добавленной воды по нейтральной пробе в пробирку наливают 1,5-2см3 концентрированной химически чистой серной кислоты. К такому же количеству контролируемого молока прибавляют одну каплю формалина и перемешивают. Молоко осторожно наливают по стенке в пробирку с серной кислотой. При наличии в молоке воды на границе соприкосновения кислоты и молока образуется сине-фиолетовое кольцо. В натуральном молоке такого кольца не будет.

Определение примеси соды ГОСТ 24065-80

Примесь соды в молоке и молочных продуктах определяют путем добавления к 3-5 мл исследуемого молока или молочного продукта такого же количества 0,2%-кого спиртового раствора розоловой кислоты. При наличии соды содержимое в пробирке окрашивается в розово-красный цвет, а при отсутствии — в оранжевый.

Определение примеси крахмала

Фальсификацию молокакрахмалом определяют путем добавления в пробирку с 5 мл хорошо перемешанного молока (сметаны, сливок) 2-3 капель люголевского раствора. Содержимое пробирки тщательно взбалтывают. Появление через 1-2 минуты синей окраски указывает на присутствие в исследуемой пробе крахмала.

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА

КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ

Продукты, получаемые из молока в результате молочнокислого брожения (иногда с участием спиртового брожения), называются кисломолочными. Различают продукты, получаемые в результате только молочнокислого брожения (1-я группа) — ряженка, простокваша различных видов, ацидофильное молоко, творог, сметана, йогурт, и продукты, получаемые при смешанном молочнокислом и спиртовом брожении (2-я группа) — кефир, кумыс и др. Продукты 1-й группы имеют достаточно плотный, однородный сгусток и кисломолочный вкус, обусловленный накоплением молочной кислоты. Продукты 2-й группы обладают кисломолочным освежающим, слегка щиплющим вкусом, обусловленным присутствием этилового спирта и углекислоты, и нежным сгустком, пронизанным мельчайшими пузырьками углекислого газа. Сгусток этих продуктов легко разбивается при встряхивании, благодаря чему продукты приобретают однородную жидкую консистенцию, поэтому их часто называют напитками.

При производстве кисломолочных продуктов применяют чистые культуры молочнокислых бактерий. В зависимости от вырабатываемых продуктов в состав чистых культур входят молочнокислый стрептококк (Str. lactis), болгарская палочка (Васt. bulgaricum), ацидофильная палочка (Васt. аcidophilum), ароматообразующие бактерии (Str. diacetilactis) и молочные дрожжи (Тorula). Каждый продукт изготовляется с помощью определенных культур микроорганизмов.

Основные биохимические процессы, протекающие при получении кисломолочных продуктов, таковы: молочнокислое и спиртовое брожение молочного сахара, коагуляция казеина и гелеобразование; в результате этих процессов формируются консистенция, вкус и запах готовых продуктов.

Кисломолочные продукты тщательно перемешивают. Для всех продуктов объем средней пробы составляет 50 мл (за исключением сметаны и сливок – 15 г, творог – 20 г). Во всех случаях исследуют органолептически и выборочно содержание жира и кислотность. При необходимости выявляют фальсификацию и контролируют режим (пастеризации или кипячения). Продукт исследуют не позднее 4 часов после отбора. Для отбора используют трубчатые и цилиндрические пробоотборники.

Рисунок 2 – Пробоотборники для сливочного масла, творога и сметаны

Методика оценки качества кисломолочной продукции:

Органолептика: Простокваша должна иметь вкус и запах чистые, кисломолочные, без посторонних, не свойственных продукту привкусов и запахов, в простокваше южной допускается спиртовой привкус, в варенце и ряженке – привкус пастеризации. Цвет молочно-белый, у ряженки и варенца – с буроватым оттенком. Сгусток в меру плотной, ненарушенный, без газообразования, на поверхности допускается незначительное выделение сыворотки, на изломе сгусток глянцевидный, устойчивый, для варенца и ряженки допускается наличие молочных пенок, для ацидофильной и южной – слегка тягучий. Не допускается к приемке простокваша с пустотами, дряблую, вспученную, загрязненную, с кормовым, горьким вкусом и запахом. Кислотность простокваши 80-1100Т, южной – 90-1400Т, ряженки 75-1000Т.

Кефир должен иметь вкус чистый, кисломолочный, освежающий, слегка острый, специфический, без посторонних привкусов и запахов. Консистенция однородная, наполняющая жидкую сметану. Допускается газообразование в виде отдельных глазков, не более 2% отделившейся сыворотки. Кислотность 85-1200Т не допускается к приемке кефира с горьким, аммиачным, кормовым и другими привкусами и запахами, а также грязный.

По качеству творог делят на высший и 1-й сорта. Творог высшего сорта должен иметь вкус и запах чистые, нежные, кисломолочные, без посторонних привкусов и запахов. Консистенция нежная, допускается неоднородная. Цвет белый, слегка желтоватый, с кремовым оттенком, равномерный по всей массе. В 1-м сорте допускаются слабовыраженные привкусы кормов, тары и наличие слабой горечи. Консистенция рыхлая, мажущаяся, а для обезжиренного творога – с незначительным выделением сыворотки, рассыпчатая кислотность жирного творога высшего сорта не более 200 0 Т, полужирного – 210 0 Т, нежирного – 220 0 Т. Пороками творога являются кормовые привкусы, выраженный кисломолочный вкус, горечь, крупитчатость. Не допускают к приемке творог плесневелый и загрязненный.

Сметану 30%-ой жирности по качеству делят на высший и 1-й сорта. Цвет белый с кремовым оттенком. Вкус и запах чистый, молочнокислый, с выраженными вкусом и ароматом, свойственными пастеризованным продуктам.

Консистенция однородная, в меру густая, без крупинок жира и белка, глянцевитая. Кислотность сметаны 65-900 о Т. В 1-м сорте допускается слабо выраженный кормовой вкус, наличие горечи, консистенция недостаточно густая, слегка комковатая, наличие легкой тягучести; кислотность 65-110 0 Т.

Остальные виды сметаны на сорта не подразделяют. Пороками сметаны являются жидкая, комковатая консистенция, прогорклый вкус и др. Не допускают к приемке сметану с горьким, кислым, кормовым вкусом и запахом, тягучую, загрязненную и с выделившейся сывороткой.

Лабораторные методы исследования исследования:

источник

При заболевании коров бруцеллезом в молоке появляются антитела, которые при добавлении к молоку бруцеллезного антигена склеиваются (реакция агглютинации) и адсорбируются на жировых шариках.

Ход определения в пробирку диаметром 5-8мм наливают 1мл молока и 1 каплю цветного бруцеллезного антигена (взвесь бруцелл, окрашенных гематоксилином) и ставят в термостат при температуре 37°С на 40-45мин. Положительная реакция характеризуется появлением в верхнем слое жидкости кольца синего цвета, при сомнительной реакции -слабоокрашенного синеватого кольца, а при отрицательной — никаких изменений не наступает.

5. УИРС. Ветеринарно-санитарная оценка исследуемых проб молока с заполнением качественного удостоверения.

1. Отбор проб молока. Пороки молока.

2. Методы исследования молока.

3. Ветеринарно-санитарная оценка молока, полученного от животных, больных инфекционными болезнями (туберкулез, бруцеллез, лейкоз, ящур и др.).

4. Ветеринарно-санитарная экспертиза молока коров при незаразных болезнях и субклинических маститах.

Выдано на молоко____________________________________________________ ,

предприятие-изготовитель, район, город

Показатели безопасности подтверждены сертификатом

Дата выработки «_____» ___________г.

ВЕТЕРИНАРНОЕ СВИДЕТЕЛЬСТВО № 00 – 000000

Я, нижеподписавшийся ветеринарный врач, выдал настоящее ветеринарное свидетельство

(кому — наименование юридического лица или ФИО физического лица)

в том, что_______________________________________________________________

( наименование продукта или сырья животного происхождения согласно ГОСТ, ОСТ, ТУ)

в количестве ___________ ____________ _____________

(мест, штук, кг) (упаковка) (маркировка)

(наименование предприятия. Ф.И.О. владельца, адрес), (дата выработки) подвергнута ветеринарно-санитарной экспертизе в полном объеме изготовлена из сырья, прошедшего ветеринарно-санитарную экспертизу (ненужное зачеркнуть), и признана годной для

(реализации без ограничений, с ограничением — указать причины

или переработки согласно правилам ветсанэкспертизы)

(вид транспорта, маршрут следования)

(наименование и адрес (№ товаротранспортных документов)

Продукция подвергнута дополнительным лабораторным исследованиям

(наименование лаборатории, № экспертизы и результаты исследования)

_________________________________________________________________ (указываются эпизоотическое благополучие местности, дата и номер разрешений вышестоящего)

_____________________госветинспектора на вывоз продукции за пределы территории, перечисляются №№ клейм и др )

Свидетельство предъявляется для контроля при погрузке в пути следования и передается грузополучателю Копии свидетельства недействительны. При установлении нарушений порядка заполнения бланка свидетельство передается главному госветинспектору Субъекта российской Федерации по месту выхода груза с указанием выявленных нарушений

источник

Экспресс-метод диагностики бруцеллеза овец и коз в реакции непрямой гемагглютинации (рнга) для исследования молока

Владельцы патента RU 2571560:

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики бруцеллеза овец и коз. Изобретение заключается в применении молока в реакции непрямой агглютинации для диагностики бруцеллеза овец и коз. Заявленное изобретение позволяет выявлять бруцеллезные гемагглютинины в молоке овец и коз, позволяет своевременно ставить диагноз на бруцеллез, установить источник возбудителя бруцеллеза для людей и животных и является более чувствительным способом, пригодным для диагностики бруцеллеза у овец и коз и осуществления контроля за благополучием овцеводческих хозяйств по бруцеллезу. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к экспресс-методу диагностики бруцеллеза овец и коз в реакции непрямой гемагглютинации для исследования молока.

В доступной нам литературе мы не нашли данных по использованию реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с молоком и кольцевой реакции с молоком (КР с молоком) для выявления бруцеллеза у овец и коз. Кольцевая реакция с молоком официально применяется для исследования коров на бруцеллез. В связи с этим, в качестве аналога мы применяли кольцевую реакцию с молоком для исследования молока овец и коз.

Постановка кольцевой реакции

Перед исследованием молоко тщательно перемешивают путем энергичного встряхивания для равномерного распределения сливок.

Реакцию ставят в серологических пробирках Флоринского, которые нумеруют в соответствии с описью проб молока. В пробирки вносят по 2 мл молока. После взятия каждой пробы молока пипетку двукратно промывают теплой водой. Антиген вносят по 0,1 мл в каждую пробирку с пробой молока. После внесения антигена в каждые 10 проб штатив с пробирками энергично встряхивают для равномерного распределения антигена в молоке.

При постановке реакции одновременно с испытуемыми пробами молока ставят следующие контрольные пробы:

— молоко от заведомо здоровой коровы;

— смесь молока здоровой коровы с позитивной бруцеллезной сывороткой (0,1 мл сыворотки на 2 мл молока).

Штатив с испытуемыми и контрольными пробами молока помещают в термостат или водяную баню при температуре 37-38°С на один час и затем выдерживают 30 минут при комнатной температуре.

Результаты реакции учитывают визуально через 30-40 минут после извлечения штативов из термостата (водяной бани) в крестах по следующей схеме:

+++ (3 креста) — четко выраженное синее или красно-вишневое кольцо (в зависимости от использованного антигена) в верхней части столбика молока в слое сливок, остальная часть молока остается белой;

++ (2 креста) — четко выраженное синее (красно-вишневое) кольцо в верхней части столбика молока в слое сливок, остальная часть молока имеет синеватый или бледно-розовый цвет;

+ (1 крест) — синее (красно-вишневое) кольцо в слое сливок выражено слабо и весь столбик молока имеет синий (розовый) цвет;

— (минус) — столбик молока остается равномерно окрашенным в первоначальный синий (красно-вишневый) цвет.

Все пробирки молока, давшие кольцевую реакцию с оценкой 3 и 2 креста, считают положительными, 1 крест — сомнительными.

При получении отрицательных результатов КР по всему стаду коров его считают благополучным по бруцеллезу.

Преимущество КР с молоком заключается в простоте постановки, быстроте получения результатов и в том, что ее можно использовать для контроля благополучия дойных стад коров.

Недостатком КР является ее слабая чувствительность и возможность получения неспецифических реакций у больных маститом животных.

Кольцевая реакция с молоком овец и коз не входит в число официально принятых методов диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота и не используется в практике с этой целью. Данная реакция применяется для исследования коровьего молока и имеет диагностическое значение для выявления больных бруцеллезом коров. Она менее эффективна для диагностики бруцеллеза овец и коз.

Основная причина недостаточной эффективности кольцевой реакции с молоком овец и коз при диагностике бруцеллеза заключается в том, что более мелкие жировые шарики молока овец и коз менее активно, чем у крупного рогатого скота, абсорбируют агглютинированные окрашенные бруцеллы (бруцеллезный антиген для КР с молоком) в положительных молочных образцах и не поднимаются для образования типичного окрашенного кольца.

Имеется еще один недостаток КР с молоком овец и коз — низкое содержание специфических антител в молоке овец и коз и слабая серологическая активность их по сравнению с антителами, содержащимися в коровьем молоке.

В связи с указанными причинами, кольцевая реакция оказалась непригодной для диагностики бруцеллеза у овец и коз. Поэтому для диагностики бруцеллеза овец и коз путем исследования молока возникает необходимость в изыскании более чувствительного метода, пригодного для выявления специфических антител, содержащихся в молоке у животных этого вида.

Известен метод диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота, предназначенный для выявления специфических антител в сыворотке крови — реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с применением эритроцитарного антигена, разработанного Прикаспийским зональным НИВИ, ФГБУ «ВГНКИ» и ГНУ ВНИИБТЖ.

В связи с тем что в специальной литературе нет сообщений о возможности исследования на бруцеллез молока овец и коз с помощью РНГА, целесообразно испытать эту реакцию для выявления бруцеллезных специфических антител в молоке и установить диагностическую ценность РНГА с молоком животных этого вида.

На основании изложенного, мы решили испытать РНГА с эритроцитарным бруцеллезным антигеном, разработанным ПЗНИВИ, ВГНКИ и ВНИИБТЖ, для исследования молока овец и коз, по сравнению с КР с молоком и сывороткой крови РА, РСК и РНГА.

Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности метода исследования на бруцеллез молока овец и коз.

При исследовании на бруцеллез молока коров в неблагополучном по бруцеллезу хозяйстве в РНГА выявлено гемагглютининов в молоке 44% больных, тогда как по КР реагировало 31%, что доказывает чувствительность РНГА. Полученные результаты были подтверждены при одновременном исследовании коров в РБП, РА, РСК и РНГА с сыворотками крови.

На большом фактическом материале при серологическом исследовании крупного и мелкого рогатого скота установлено, что РНГА с разработанным нами эритроцитарным антигеном для исследования сывороток крови реакция по диагностической эффективности значительно превосходит используемые в ветеринарной практике другие методы диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РБП и РИД с ОП-С антигеном), вместе взятые, выявляет больных бруцеллезом животных в более ранние сроки после заболевания и может заменить все эти реакции.

По заключению республиканских, краевых и областных ветеринарных лабораторий, испытавших РНГА, эта реакция обладает специфичностью, высокой чувствительностью и пригодна для массовых исследований животных на бруцеллез.

Поэтому мы решили испытать возможность использования РНГА для исследования молока овец и коз по сравнению КР с молоком и другими серологическими реакциями, применяемыми в практике для исследования сывороток крови (РНГА, РБП, РА и РСК).

Специфичность РНГА с бруцеллезным эритроцитарным антигеном и КР для исследования молока изучали путем исследования 220 проб молока от овец и коз благополучных по бруцеллезу хозяйств.

Результаты исследования даны в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, при исследовании 220 проб молока овец и коз в РНГА со всеми пробами молока здоровых животных получен отрицательный результат, что показывает ее специфичность, тогда как по КР в трех случаях получен положительный результат. При проверке животные, которые реагировали в КР с молоком положительно, оказались больными маститом.

В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах исследованию в РНГА и КР были подвергнуты молоко и сыворотки крови от 95 овец и коз. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Как видно из приведенных в таблице 2 данных, РНГА с молоком по чувствительности не уступает РНГА с сывороткой крови и превосходит КР с молоком и РА, РСК с сывороткой крови. В частности, положительная РНГА с сывороткой крови получена у 12 (12,6%) овец и коз, которые положительно реагировали и в РНГА с молоком, тогда как с помощью КР с молоком бруцеллез был установлен у 5 (5,3%) овец и коз. В РА и РСК реагировало 8 (8,4%) животных.

Дополнительно к КР с молоком, РНГА с молоком выявила 7 больных бруцеллезом овец и коз.

Достоверность показаний РНГА с молоком была подтверждена положительными результатами ПНР и РНГА с антительным бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом проб молока и образцов биоматериала (экстракт гомогенизированных лимфоузлов и органов) от больных бруцеллезом животных. Эти данные свидетельствуют о высокой эффективности РНГА с эритроцитарным антигеном, разработанным Прикаспийским зональным НИВИ, ФГБУ ВГНКИ и ВНИИБТЖ для исследования на бруцеллез молока овец и коз.

Наряду с этим, нами было подвергнуто исследованию в РНГА молоко от 2 коз, принадлежащих частным владельцам г. Хасавюрт и с. Новый Параул, реагировавших положительно на бруцеллез в РНГА с сывороткой крови.

В обоих случаях с молоком этих коз получена положительная РНГА в титрах 1:200 и 1:4092. При этом было установлено, что владельцы животных, употреблявшие козье молоко, заболели бруцеллезом в острой форме.

Проведенными исследованиями установлено, что использование РНГА с эритроцитарным антигеном для обнаружения бруцеллезных гемагглютининов в молоке овец и коз позволяет своевременно установить диагноз на бруцеллез, выявлять источник возбудителя болезни для людей и животных и является высокочувствительным и специфичным методом, пригодным для осуществления контроля за благополучием овцепоголовья по бруцеллезу.

Применение молока в реакции непрямой агглютинации для диагностики бруцеллеза овец и коз.

источник

Сущность кольцевой реакции.

По наблюдениям некоторых ученых данная реакция пригодна для исследования фляжного молока, если оно содержит молоко хотя бы одной бруцеллезной коровы.

Молоко повышенной кислотности (32-33ºТ), молозиво, молоко коров, больных маститом, и содержимое молочной железы сухостойных коров не дают правильных показателей по этой реакции. Пробы молока, консервированные формалином, разведенные пополам водой, и свежие сливки после их разведения 10% раствором хлорида натрия 1:1 можно исследовать по кольцевой реакции.

Реакция заключается в том, что добавленный в молоко бруцеллезный антиген соединяется (склеивается) с антителом. Возникший комплекс антитело+антиген адсорбируется на жировых шариках, которые при температуре реакции поднимаются на поверхность содержимого пробирки, образуя кольцо синего цвета. При отсутствии антител антиген распределяется равномерно в молоке и синее кольцо не образуется.

Техника определения.

В агглютинационные пробирки наливают 1мл исследуемого молока и добавляют 1каплю цветного бруцеллезного антигена (смыв культуры бруцелл, окрашенных гематоксилином). Для равномерного распределения антигена в молоке содержимое встряхивают и пробирки ставят в термостат при 37-39ºС на час, после чего читают реакцию.

При исследовании молока овец кольцевой реакцией рекомендуется разводить молоко 10-20% раствором хлорида натрия или молоком коровы (здоровой) 1:1.

«+» реакция – характеризуется тем, что в верхнем слое пробирки появляется кольцо, окрашенное в интенсивно синий цвет при некотором просветлении содержимого пробирки;

«-»реакция – равномерное окрашивание содержимого; слой сливок остается белого или коричневого цвета.

«±» реакция – наличие слабого окрашивания кольца без просветления содержимого пробирки.

Техника определения.

К 10мл теплого молока (35-37ºС) + 5капель 10% сычужного фермента (на физ.растворе) и помещают на 5мин в водяную баню при температуре 38-40ºС для быстрого свертывания. Свернувшееся молоко обводят стеклянной палочкой по стенке пробирки, центрифугируют и полученную прозрачную надосадочную жидкость (сыворотку) используют для исследования. Для реакции берут по 1мл сыворотки в 6 разведениях (1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80 и 1:160), добавляют в каждую пробирку по 0.5 мл стандартного антигена, затем пробирки встряхивают и помещают на 30мин в термостат при 37ºС. После выдержки в термостате пробы центрифугируют 5мин при 3000об/мин и читают реакцию.

«+» реакция – в пробирке появляется осадок в виде круглой шляпки, которая при взбалтывании разбивается на хлопья и комочки.

«-» реакция – осадок при взбалтывании образует равномерную муть.

Для осаждения казеина вместо сычужного фермента можно применять уксусную кислоту.

Способы установления молока коров, больных маститом.

Методические указания.

Для диагностики субклинических маститов используют основные пробы с димастином или мастопримом. Если эти реакции положительные, их уточняют пробой «отстаивания». При заболевании у коров вымени в молоке увеличивается число лейкоцитов и проявляется щелочная реакция (рН 7 и выше), что устанавливают с помощью димастина и мастоприма, содержащих поверхностноактивные вещества, которые, взаимодействуя с лейкоцитами, образуют сгусток, а индикатор изменяет цвет в зависимости от реакции среды (рН).

А. Бромтимоловая проба.

Техника определения.

На белую фарфоровую пластинку наносят 2-4капли исследуемого молока и 1-2капли 0.2% спиртового (спирт 60%) раствора бромтимолового синего.

Желтое, зеленовато-желтое или желто-зеленое окрашивание характерно для молока, полученного от здоровой коровы. Молоко коров, больных маститом, в зависимости от стадии заболевания и его характера окрашивается в цвета от сине-зеленого до желтоватого.

Б. Лейкоцитарная проба.

Техника определения.

На молочно-контрольную пластинку наносят 5капель молока и 1каплю 4% едкого натра, перемешивают палочкой в течение 20с и определяют результат пробы. При воспалительном процессе в молочной железе (мастит) на пластинке появляется желеобразная масса (значительное количество лейкоцитов), а при нормальном количестве лейкоцитов изменения не наблюдаются – проба отрицательная.

Реакция заключается в том, что под влиянием щелочи лейкоциты растворяются с освобождением ДНК (вещество ядра), обуславливающей желеобразование в пробе.

В.Проба отстаиванием.

Техника определения.

В пробирку наливают по 10-15мл исследуемого молока и отстаивают его при температуре 4-8ºС. Пробирки просматривают вначале через 2-3ч и окончательно через 16-24ч.

В молоке с наличием мастита на дне пробирки появляется осадок белков молока, клеток и микробов, в котором при микроскопировании обнаруживается значительное количество лейкоцитов. Такое молоко часто бывает водянистым, с синеватым оттенком (субклиническая форма). Появление розового цвета в слое сливок будет свидетельствовать о наличии эритроцитов.

Г. Проба с димастином.

Техника определения

В луночки молочно-контрольной пластинки помещают по 1мл исследуемого молока, затем вносят по 1мл димастина. Перемешивают реактив и молоко вращательными движениями и в каждой луночке определяют консистенцию и цвет смеси.

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ — конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

источник

Основными тестами при массовых диагностических исследованиях явля­ются пробирочная РА, РА на стекле (Роз-бенгал проба), РСК и РДСК, коль­цевая реакция с молоком, реакция диффузионной преципитации.

Пробирочная реакция агглютинации.Используют при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота, шец, коз, лошадей, буйволов, верблюдов, оленей, собак, пушных зверей И т.д. Реакцию проводят в объеме
1 мл. Сыворотки крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов исследуют в разведениях 1:50-1:400; онец, коз, свиней, буйволов, оленей и собак — 1:25 -1:200; пушных зве­рей и морских свинок — 1:10-1:80. При массовых исследованиях до­пускается постановка РА в двух первых разведениях, но при этом надо иметь в виду возможность феномена «прозоны». Сыворотки крови круп­ного рогатого скота, лошадей, собак, пушных зверей, верблюдов разво­дят 0,85%-ным раствором натрия хлорида с 0,5% фенола; сыворотки кро­ви овец, коз и буйволов разводят 5%-ным, а сыворотки крови оленей — 10%-ным фенолизированным раствором натрия хлорида. Разведения сы­воротки крови делают в объеме 0,5 мл, затем в каждую пробирку вносят 0,5 мл единого бруцеллезного антигена, разведенного 1:10, при этом раз­ведения сыворотки крови удваиваются. Компоненты перемешивают Встряхиванием и штатив с пробирками помещают в термостат при 37-38° С на 18-20 часов, затем выдерживают несколько часов при комнат­ной температуре и учитывают результат общепринятым способом (техни­ку постановки и учета результатов РА см. в разделе «Серологические ре­акции»). В качестве контролей параллельно исследуют заведомо положи­тельную и отрицательную сыворотки. РА при бруцеллезе крупного рога­того скота, лошадей и верблюдов считают положительной при титре 1:100 и более (1:50 — сомнительный результат), у овец, коз, оленей, буйволов и собак — 1:50 (1:25 — сомнительный результат). При получении сомни­тельных результатов сыворотки крови от этих животных исследуют через три-четыре недели повторно.

Помимо титра результаты пробирочной РА выражают в международ­ных единицах (ME). В разных странах готовят антигены, различающиеся по агглютинабилыюсти, что приводит к несопоставимости титров РА. По­этому была предложена международная стандартная бруцеллезная сыво­ротка, по отношению к которой определяют активность национальных ан­тигенов. Активность стандартной сыворотки определена в 1000 МЕ/мл. Например, при исследовании этой сыворотки с определенным нацио­нальным антигеном она показывает в РА титр 1:500. Следовательно, если в РА с этим антигеном исследуют сыворотку крови от животного из хозяй­ства и получают титр РА 1:500, то она также содержит 1000 ME бруцеллез­ных антител, а вторая сыворотка, давшая титр 1:400, содержит 1000 х 400 : 500 = 800 ME и т.д. В настоящее время в странах разработаны национальные стандартные бруцеллезные сыворотки, соответствующие по активности международной сыворотке. В РФ в соответствии с «Наставлением по диаг­ностике бруцеллеза животных» (2000) приняты следующие критери оценки РА в ME. Реакцию считают положительной у невакцинироваппого крупного рогатого скота, верблюдов, лошадей, а также иммунизированных неаг-глютиногенными вакцинами при наличии 200 ME антител (сомнительной — 50-100 ME); у овец и коз — 100 ME; оленей и собак — 50 ME; пушных зверей и морских свинок —10 ME. PA считают сомнительной у овец, коз, оленей, собак этой группы на уровне 25-50 ME. При сомнительных пока­заниях РА животных повторно исследуют через 15-30 суток. В случае повышения уровня антител животных признают больными, при отсутствии динамики — здоровыми. Выявление в стадах крупного рогатого скота, иммунизированного ра­нее агглютиногенными вакцинами, животных с уровнем антител не более 200 ME предполагает через 15-30 суток их повторное исследование. Если при повторном исследовании наблюдают повышение уровня антител, то животных признают больными. При отсутствии повышения дополнитель­ными методами уточняют специфичность результатов РА.

При обнаружении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота (ранее иммунизированного или не иммунизированного) жи­вотных с уровнем антител 100 ME и более их признают больными,
50 ME — результат РА сомнительный. В случае сомнительной РА животных исследу­ют через 15-30 суток повторно и при вторичном сомнительном результате животных признают больными.

При исследовании в РА невакцинированных баранов-производителей, пробников, ярок, козлов, содержащихся в благополучных отарах, где про­водилась иммунизация, РА оценивают как положительную при уровне ан­тител 100 ME и более, сомнительной — 50 ME. В последнем случае живот­ных через 15-30 суток исследуют повторно, и, если содержание антител не увеличилось, их признают здоровыми.

Роз-бенгал проба (РБП).РА на стекле с корпускулярным антигеном, окрашенным розовым бен­гальским, используют для диагностики бруцеллеза крупного рогатого ско­та, овец, коз, лошадей, свиней, буйволов, верблюдов и северных оленей. Реакцию проводят на чистых, сухих эмалированных пластинках с лунками при температуре не ниже 18°С. Исследуемые сыворотки в дозе 0,03 мл вно­сят на дно лунки, затем в лунку рядом с сывороткой помещают при исследо­вании крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов и свиней 0,03 мл ан­тигена, сывороток овец, коз, буйволов и северных оленей — 0,015 мл анти­гена. Компоненты должны иметь температуру не ниже 18°С.

Затем компоненты перемешивают в течение 4 минут, одновременно учи­тывая результат. В положительных случаях в течение указанного времени появляются розовые хлопья агглютината. В РБП исследуют неразведен-ные сыворотки, влияние нормальных антител нивелируется использовани­ем кислого антигена со значениями рН, при которых нормальные антитела с низкой авидностыо не реагируют с антигеном, что обеспечивает специ­фичность результата реакции. Перед началом исследований антиген проверяют в РБП на активность, специфичность и на спонтанную агглютинацию соответственно с позитивной, негативной сыворотками и в последнем случае — с физиологическим раствором. В соответствии с «Наставлением по диагностике бруцеллеза животных» в РФ результат РБП считают положительным при наличии четко выраженной агглютинации. В благополучных по бруцеллезу хозяйствах в случае позитивной РБП сыворотки крови исследуют в РА и РСК (РДСК) или РА и РИД. Если при этом получают отрицательные результаты, то животных с позитивной РБП повторно исследуют через 15-30 дней в этих же серологических реакциях. В неблагополучном по бруцеллезу хозяйствах овец, коз, северных оленей с позитивной РБП признают больными. Сыворотку крови крупного рогатого скота, вер­блюдов и лошадей дополнительно исследуют в РА, РСК (РДСК) или РА и РИД, животных с положительными результатами этих серологических ре­акций признают больными, сомнительно реагирующих исследуют повторно через 15-30 суток в РА, РСК (РДСК) или РА и РИД. При получении положительных или сомнительных результатов животных признают больными бруцеллезом.

Кольцевая реакция с молоком (КР).Реакцию применяют для проверки благополучных по бруцеллезу стад крупного рогатого скота и молока на рынках.

В РФ, в соответствии с «Наставлением по диагностике бруцеллеза животных», реакцию и оценку результатов проводят следующим образом. В уленгутовские пробирки наливают 0,05 мл антигена (клетки бруцелл, окрашенные гематоксилином) и 1 мл исследуемого молока. Если используют пробирки Флоринского — 2 мл молока и 0,1 мл антигена, компоненты пе­ремешивают, пробирки помещают в водяную баню (37-38° С) на 1 час, затем учитывают результат по нижеследующим критериям:

КР на 2-3 креста считают положительной, 1 крест — сомнительной. При положительной КР от всех животных стада берут кровь для исследо­вания в РА или РСК (РДСК) или РА и РИД. Если получают их отрицатель­ный результат, то независимо от позитивной КР животных признают здоро­выми.

Реакция связывания комплемента (РСК, РДСК). Данную серологическую реакцию применяют для диагностики бруцел­леза практически у всех видов животных. Согласно «Наставлению по ди­агностике бруцеллеза животных» исследуемые сыворотки крови крупного рогатого скота для РСК инактивируют разведенными 1:5 в водяной бане в течение 30 минут при 60-62°С; сыворотки крови ослов, мулов при 64-65°С; буйволов — 62-64° С; свиней — 60-62° С 50 минут; при постанов­ке РДСК 30 минут при 62-64° С. Используют единый бруцеллезный анти­ген в рабочем титре, гемолизин для РСК в удвоеном титре, для РДСК — в утроенном, 2,5%-ную взвесь эритроцитов барана для РСК и 3%-ную для РДСК. Комплемент в количестве 1,2 единицы (титр комплемента принима­ется за 1 единицу). Реакцию проводят в объеме 1 мл с сыворотками, разве­денными 1:5 или 1:10 (технику постановки и учета результатов см. в разде­ле «Серологические реакции»).

При исследовании сывороток в одном разведении (1:5) и задержке гемо­лиза на один крест эти сыворотки повторно исследуют в двух разведениях (1:5, 1:10). В случае сомнительной РСК животных повторно исследуют че­рез 15-30 суток. Если при повторном исследовании животных из благопо­лучного по бруцеллезу хозяйства вновь получена сомнительная РСК — жи­вотных признают здоровыми. Если аналогичный результат получен у жи­вотных неблагополучного хозяйства, их рассматривают как больных. По­лучение только позитивной РСК в разведении 1:10 в благополучных по бруцеллезу стадах ранее вакцинированного крупного рогатого скота пред­полагает повторное исследование через 15-30 суток. При нарастании титров РСК диагноз на бруцеллез считают установленным, в обратном слу­чае результат исследования считают отрицательным («Наставление по ди­агностике бруцеллеза животных», 2000).

Реакция иммунодиффузии (РИД). Согласно «Наставлению по диагностике бруцеллеза животных» (2000) в РФ РИД используют при плановых исследованиях в благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах, где не применяются вак­цины, одновременно с РА, а также при проверке сомнительно реагирую­щих в РА или РСК (РДСК) животных для дифференциации неспецифичес­ких реакций; в благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах, где проводится иммунизация крупного рогатого скота аг-глютиногенными вакцинами при контроле эпизоотического состояния (не ранее 1,5 месяца после вакцинации); для дифференциации реакций, полу­ченных в РА (не более
200 ME) или РСК (РДСК) в разведениях не выше 1:10; при плановых исследованиях животных одновременно с РА; в не­благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах через 1,5 месяца после иммунизации; среди телок и нетелей в течение первых шести месяцев после иммунизации (реиммунизации) 2-4-кратно; через месяцев после иммунизации (реиммунизации) животных для оздоровления стада от бруцеллеза в комплексе предусмотренных реакций; при постановке хозяйства на контроль и снятии ограничений одновременно с РА и РСК (РДСК).

При диагностике бруцеллеза северных оленей для оценки эпизоотического состояния стад, благополучных по бруцеллезу, вакцинированных против бруцеллеза; для исследования на бруцеллез не ранее чем через два месяца после применения вакцин; для дифференциации неспецифических реакций.

Техника проведения РИД. Расплавленный агар разливают по 2,5 мл на предметные стекла, пластинки размером 6×9 см —12 мл, стандартные чашки Петри слоем не менее 2 мм, которые предварительно размещают на строго горизонтальной поверхности. В застывшем агаровом геле штампом делают лунки: центральную диаметром 5 мм и шесть переферических по 3 мм.

В центральную лунку вносят 20 мкл О-полисахаридного антигена, в пе­риферические — 40 мкл исследуемых сывороток крови. Одновременно на каждой пластинке (чашке Петри) ставят контроль с позитивной сывороткой крови. Затем стекла (чашки Петри) выдерживают во влажной камере при температуре не ниже 18° С и учитывают результат в косопроходящем свете через 24 и 48 часов. Как положительный результат оценивают наличие ли­нии преципитации, появившейся через 24 часа. Сыворотки крови, давшие реакцию преципитации через 48 часов, исследуют повторно и при получении линии преципитации через 24 или 48 часов результат реакции признают по­ложительным.

Печеночно-сывороточный или печеночно-аминопептидный агар.Готовят печеночный отвар: 500 г свежего фарша говяжьей печени смешивают с 500 мл воды, кипятят 1 час, фильтруют через ватный фильтр, стерилизуют в автоклаве, смешивают равные объемы печеночного отвара и водопроводной воды, добавляют 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 2% агар-агара. На 1000 мл смеси вносят 17 мл 10%-ной двууглекислой соды, автоклавируют 20-25 минут при 115° С, фильтруют через ватный фильтр, ус­танавливают рН 7,0-7,2, добавляют 1% глюкозы и 2% глицерина, разливают по колбам и стерилизуют 20-25 минут при 110° С. Перед использо­ванием агар расплавляют, остужают до 50° С, добавляют 10-20% сыво­ротки крови лошади или крупного рогатого скота (печеночно-сывороточ-иый агар) или 10-15% аминопептида (печеночно-аминопептидный агар) и разливают по чашкам или пробиркам. Также готовят полужидкие агары, внося 0,15-0,2% агар-агара. Рекомендуют среды данного типа для культивирования В. ovis.

Печеночный агар Хеддльсона.В 500 мл воды вносят 10 г пентона,
5 г натрия хлорида, 20 г агар-агара, автоклавируют 30 минут, добавляют 500 мл печеночного отвара, охлаж­дают до 60° С, устанавливают рН 7,0. К 1 л среды добавляют один яичный белок, автоклавируют 30 минут при 120° С, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН 7,0, разливают по емкостям и стерилизуют 30 минут при 115° С.

Плотный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (ППГГА). 400 г свежей говяжьей печени освобождают от жира и пленок, измель­чают, добавляют 500 мл водопроводной воды, кипятят 1 час, фильтруют через ватный фильтр. Полученный печеночный отвар разводят водопро­водной водой 1:1, добавляют 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 2,5% ага­ра и
17 мл 10%-ного раствора гидрокарбоната натрия на 1000 мл. Среду автоклавируют 20 минут при 115° С, отстаивают в автоклаве 3-4 часа, фильтруют через ватный фильтр, устанавливают рН 7,2. Затем в среду вно­сят 1% глюкозы и 2-3% глицерина, разливают по пробиркам, колбам, сте­рилизуют 20-25 минут при 110° С. Данную среду рекомендуется приме­нять для культивирования В. abortus, В. melitensis и В. suis, при бактериостатическом методе дифференциации бруцелл. ППГГБ готовят так же, но агар не добавляют.

Сывороточно-декстрозиый агар.К 835 мл дистиллированной воды добавляют 15г агар-агара, 10г пептона, 5 г химически чистого натрия хлорида и 165 мл мягкой воды. Прогре­вают 1 час текучим паром, устанавливают рН 7,8, автоклавируют 30 мин при 127° С, фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 7,4. Среду разливают по сосудам и стерилизуют при 116° С 15 минут. Перед использованием среду расплавляют, охлаждают до 50° С, добавляют сте­рилизованные фильтрованием сыворотку крови лошади или крупного ро­гатого скота до концентрации 5% и раствор декстрозы до уровня 1%. Сре­да рекомендуется для первичного выделения бруцелл.

Сывороточно-декстрозный бульон.Готовят так же, как сывороточно-декстрозный агар, но без добавления агар-агара.

Альбими-агар.В 1000 мл дистиллированной воды добавляют 20 г сухого пептона, 20 мл дрожжевой воды, 5 г натрия хлорида, 20 г агар-агара. Устанавливают рН 7,3, все компоненты растворяют в аппарате Коха, фильтруют через ватный фильтр. Вносят 1 г глюкозы, 0,2 г бисульфита натрия, устанавливают рН 7,2 0-7,3, разливают по колбам и стерилизуют 40 минут текучим паром, затем 20 минут в автоклаве при 110° С. Дрожжевую воду получают путем кипячения 1 кг хлебных дрожжей в 1000 мл дистиллированной воды, затем фильтруют через полотно и хранят под флороформом в темноте (не более 15 дней).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник