Диагностические исследования бруцеллез крс

Бруцеллез (лат., англ. — Brucellosis; синоним: мальтийская лихорадка). Бруцеллез — инфекционная хроническая болезнь многих видов домашних и диких животных и человека, характеризующаяся абортами, задержанием последа, эндометритами, расстройством воспроизводительной способности животных, бурситами, гигромами и артритами.

Впервые бруцеллез описан в 1861 г. Мэрстоном при заболевании солдат английского гарнизона на о. Мальта. Возбудителя обнаружил и выделил чистую культуру Д. Брюс в 1887 г. Возбудитель бруцеллеза крупного рогатого скота был выделен в 1896 г. датчанином и В. Стрибольтом. Венгерский ученый Ф. Гутира в 1909 г.

Болезнь распространена во многих странах Азии, Африки, I Центральной и Южной Америки. Болезнь регистрируется в некоторых (гранах СНГ. В Республике Беларусь бруцеллез не регистрируется.

Экономический ущерб большой, складывается из недополучения приплода, вынужденного убоя и больших затрат на проведение оздоровительных мероприятий.

Возбудители бруцеллеза относятся к семейству Brucellaceae роду Brucella, который включает 6 видов: Br. abortus — возбудитель бруцелеза крупного рогатого скота; В. melitensis — овец и коз; B. suis — свиней; В. ranis — собак; В. neotomae — кустарниковых крыс; В. ovis — инфекционного эпидидимита баранов. Некоторые виды бруцелл подразделяются на Гни варианты: В. abortus — 9, В. melitensis — 3 и В. suis — 5. Бруцеллы видов мглитензис и абортус могут мигрировать на животных других видов. Морфологически бруцеллы представляют мелкие (0,3-0,6 х 0,6-1,5 мкм) (к истерии палочковидной, овоидной или шаровидной форм. Бруцеллы грамо отрицательные, спор не образуют, некоторые штаммы образуют капсулу, (многие аэробы. Для дифференциации бруцелл применяются специальные методы окраски: по Козловскому, Шуляку-Шину, Ганзену или Стемпу. Для культивирования бруцелл применяют печеночно-глюкозо-глицериновый бульон и агар, сывороточно-глюкозный и картофельный агары, среды с генцианфиолетом или малахитовой зеленью, среду Кроля. На ЖИД — mix средах бруцеллы вызывают равномерное помутнение и пристеночное кольцо. На плотных средах образуются округлые, гладкие, прозрачные или серовато-белые с голубоватым оттенком колонии. Из лабораторных животных к возбудителю восприимчивы морские мишки, в меньшей степени — белые мыши. Бруцеллы относительно устойчивы к действию различных физических и химических факторов. Прямые солнечные лучи убивают их за 4,5 ч, в йоде бруцеллы сохраняются более 5 месяцев, в навозе — до 120 дней, и моче — до 4 дней, в почве — 5 месяцев, в плодных оболочках — 120 дней, и охлажденном молоке — 6-8 дней, в кислом молоке — 1-4 дня, в масле — 30 дней, в сырах — 42 дня, в замороженном мясе — 320 дней, в засоленных ш курах — 2 месяца, в шерсти — 3-4 месяца. При температуре + 60°С бруцеллы погибают через 30 мин, при +80. +85°С — через 5 мин, при +100°С — мгновенно. Такие дезинфицирующие средства, как хлорная известь, хлорамин, гидроксид натрия в концентрации 2-3 %, убивают бруцелл в течение 5 мин; 0,5% -й раствор глютарового альдегида и 5% -й раствор фенолята натрия обезвреживают возбудителя в течение одного часа.

К бруцеллезу восприимчивы крупный рогатый скот, овцы, козы, свиньи, олени, маралы, яки, буйволы, лошади, верблюды, собаки, кошки, зайцы, сайгаки, лисицы, грызуны, дикие кабаны. Наиболее восприимчивы к бруцеллезу крупный и мелкий рогатый скот, буйволы, свиньи. Взрослые половозрелые животные более восприимчивы, чем молодые. Источником возбудителя инфекции являются больные бруцеллезом животные, особенно в период клинического проявления болезни. Из организма больного животного бруцеллы выделяются с околоплодными вода-ми, плодными оболочками, абортированными плодами, выделениями из половых органов. Также возбудитель может выделяться с молоком, мочой, калом, спермой. У коров бруцеллы могут сохраняться в вымени до 7-9 лет, у овец — до 2-3 лет, у самцов в семенниках — до 9 лет. Факторами передачи служат корма, вода, кормушки, предметы ухода, одежда обслуживающего персонала, контаминированные возбудителем. Заражение животных происходит главным образом алиментарным путем, а также половым и контактным путями. От больных бруцеллезом животных могут заражаться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз. У крупного и мелкого рогатого скота бруцеллез может протекать в виде эпизоотии, у других видов животных — спорадических случаев. В благополучные хозяйства возбудитель заносится чаще всего с латентно больными животными, если не выполняются ветеринарно-санитарные правила при продаже животных для племенных и пользовательских целей. Сезонность для бруцеллеза не характерна, однако количество больных животных увеличивается в стойловый период. Возникновению бруцеллеза способствуют неудовлетворительные ветеринарно-санитарные условия содержания и кормления животных, приводящие к снижению резистентности организма животных, несвоевременное удаление и утилизация последов, абортированных плодов, навоза, не своевременная и некачественная дезинфекция. Заболеваемость при первичной вспышке болезни может достигать 60 %, а летальность 1-2 %.

Развитие болезни во многом зависит от вирулентности и количества попавшего в организм возбудителя, иммунной реактивности животного и условий, в которых находится больное животное. К развитии инфекционного процесса при бруцеллезе различают три: регионарной инфекции, генерализации и вторичной латенции. Бруцеллы вначале размножаются в воротах инфекции, а затем по лимфатическим путям OHPI проникают в регионарные лимфатические узлы и паренхиматозные органы, в которых развиваются воспалительные процессы, образуются гранулемы, в организме развивается иммунологическая тройка. Клинические признаки в стадию регионарной инфекции не проявляются. Если заражающая доза возбудителя невелика, а устойчивость организма высокая, инфекционный процесс не развивается и организм освобождается от возбудителя. При недостаточной сопротивляемости организма животного, у беременных животных развивается генерализация инфекционного процесса. Бруцеллы, размножившись в лимфатических узлах, проникают в кровь, вызывая бактериемию, которая длится 10-30 дней после заражения.

Затем бруцеллы локализуются в матке, вымени, лимфоузлах, селезенке, печени и других органах. Наиболее благоприятные условия для размножения бруцелл имеются в беременной матке, так как плодные оболочки многих животных содержат эритриол — фактор роста для бруцелл. Размножение бруцелл приводит к воспалительно-некротическим изменениям плодных оболочек. Нарушается трофика плода, наступает его гибель и, а к следствие, аборт, рождение нежизнеспособного, слабого приплода, задержание последа. У небеременных маток бруцеллы длительно сохраняются в вымени, надвыменных лимфоузлах, а также в лимфоузлах тазовой полости. При очередной беременности (или снижении резистентности организма) местная инфекция может обостриться и перейти в генерализованную. У самцов бруцеллы наиболее длительно локализуются в семенниках и их придатках. Воспалительный процесс с явлением некроза может разминаться в различных тканях и органах и клинически проявляться в виде орхитов, бурситов, абсцессов под кожей. Вторичная латенция характеризуется отсутствием клинических примы ков и аллергической перестройкой организма.

Течение и симптомы болезни

Инкубационный период длится 2-4 недели и более. При отсутствии среди восприимчивого поголовья беременных животных заболевание чаще протекает бессимптомно. У таких животныx болезнь выявляют серологическими или аллергическими методами. У беременных животных всех видов бруцеллез проявляется абортами во второй половине беременности. Коровы абортируют чаще на 8-м меся — 1н овцы и козы — на 3-5-м, свиноматки могут абортировать как в первой, так и во второй половине супоросности, собаки на 40-50-й день. У крупного рогатого скота и овец повторные аборты наблюдаются редко, у свиней они могут быть многократными. За 1-2 дня до аборта у самки набухает вымя, припухают наружные половые органы, отмечается незначительное выделение из влагалища буровато-красной слизистой жидкости. Аборты, как правило, сопровождаются задержанием последа и развитием гнойного эндометрита. В процесс могут вовлекаться яичники и фаллопиевы трубы, что приводит к нарушению полового цикла и к временному или стойкому бесплодию. Кроме абортов бруцеллез у животных может сопровождаться серозными бурситами, гигромами, артритами, тендовагинитами, а у мужских особей — орхитами и эпидидимитами со значительным увеличением семенников и опуханием мошонки.

У свиноматок, больных бруцеллезом, аборты наблюдаются как в первой, так и во второй половине супоросности, преимущественно на 60-90-й день беременности. После аборта у некоторых свиноматок наблюдаются задержание последа, эндометрит и мастит. Кроме абортов у больных свиней может наблюдаться мумификация плодов, появляются абсцессы в под-кожной клетчатке и паренхиматозных органах, паралич мышц таза и конечностей. У лошадей характерными для бруцеллеза являются бурситы в области затылка и холки, которые сопровождаются некрозом хрящей, остистых отростков, образованием свищей. Также могут обнаруживаться бурситы и гигромы. Характерным клиническим признаком бруцеллеза у северных оленей и маралов считают бурситы конечностей. Течение болезни у пушных зверей зависит в основном от времени их заражения. При заражении животных в период гона и беременности наблюдается бесплодие самок и повышенный падеж новорожденных щенков. В другое же время болезнь протекает латентно. Больные бруцеллезом звери остаются холостыми, наблюдаются аборты и рождение нежизнеспособного потомства. У собак и кошек болезнь протекает бессимптомно и выявляется только серологическим методом. Птицы устойчивы к бруцеллезу даже при экспериментальном заражении.

Наиболее характерные изменения встречаются в матке беременных животных. Первичный патологический процесс проявляется в форме воспалительно-некротических изменений в матке и плодных оболочках. Плодные оболочки набухшие, покрыты хлопьями фибрина и гноя. У абортированных плодов находят отеки подкожной клетчатки и пупочного канатика, скопление жидкости буро-красного цвета с хлопьями фибрина в грудной и брюшной полостях, кровоизлияния на серозных и слизистых оболочках, катаральное воспаление слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, легких; некротические участки и печени.

Диагноз на бруцеллез у животных основывается на анамнезе и эпизоотологических данных, клинических признаков, результатов аллергического и бактериологического исследований. Основным методом прижизненной диагностики бруцеллеза у животных является серологический. Серологические исследования на бруцеллез крупного рогатого скота приводит путем постановки реакции агглютинации (РА), реакции связывания комплемента (РСК), роз бенгал пробы (РПБ), кольцевой реакции (КР); овец, коз, лошадей — РА, РСК, РПБ; свиней — РСК, РПБ. Повторно животных исследуют на бруцеллез серологическим методом через 15-30 дней, а аллергическим — через 25-30 дней. Аллергический метод применяется для исследования собак и животных других видов. Коров (нетелей) исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок — через 1-2 месяца после окота или опороса, молодняк животных всех видов — с 4-месячного возраста.

Бактериологическому исследованию (включая постановку биопробы) подвергают биоматериал от животных в случае наличия у них признаков, вызывающих подозрение на заболевание бруцеллезом. Абортированные плоды, поступающие в ветеринарную лабораторию для исследования на фихомоноз, кампилобактериоз, сальмонеллез, лептоспироз, хламидиоз, подлежат также обязательному исследованию на бруцеллез. В лабораторию направляют абортированный плод с плодными оболочками и желудок плода с содержимым, кусочки печени, селезенки, семенники с придатками, измененные участки рогов матки и лимфоузлы, содержимое бурс, пробы молока. Одновременно в лабораторию направляют I р (ни, или сыворотку абортировавшего животного. Бактериологическое исследование на бруцеллез включает микроскопию мазков, окрашенных по Граму и одному из следующих специальных мг к >дон: по Стемпу, Козловскому или Шуляку-Шину; выделение культуры бруцелл путем посевов материала на мясо-пептонный печеночный бульон (МПБ), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон, печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар и др. Выделение культуры идентифицируют по морфологическим, культуральным « пометам и в реакции агглютинации на стекле с позитивной бруцеллезной сывороткой. Биопробу ставят на морских свинках (не менее двух) массой 400 г. Диагноз на бруцеллез считается установленным в одном из следующих случаев:

при выделении культуры бруцелл из биоматериала или положительной биопробе, а также при положительных результатах серологических исследований не вакцинированных животных при следующих показателях: для крупного рогатого скота и лошадей — РА с наличием антител 200 МЕ/мл и выше; для овец и коз — РА 100 МЕ/мл и выше; для собак — РА 50 МЕ/мл и выше; для всех видов животных РСК в разведении сыворотки 1: 5 и выше;

при выявлении в стадах крупного рогатого скота положительно реагирующих животных только в РА не выше 200 МЕ/мл и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1: 10 проводят повторное исследование через 15-30 дней в РА, РСК. При повышении титров в РА или РСК заболевание считается установленным.

При постановке диагноза исключают кампилобактериоз, хламидиоз, инфекционный эпидидимит, лептоспироз, листериоз, сальмонеллез, незаразные болезни с симптомами аборта. Дифференциальная диагностика основана на проведении бактериологических, вирусологических и серологических исследований.

Больные животные подлежат убою.

Иммунитет и специфическая профилактика.

В ряде стран для специфической профилактики бруцеллеза используют живые вакцины из штаммов № 19, №82, PEV-1 и др. В Республике Беларусь специфическая профилактика бруцеллеза у животных не проводится.

Мероприятия по профилактике и ликвидации.

Общие профилактические меры заключаются в соблюдение владельцами животных ветеринарно — санитарных правил содержания и эксплуатации животных. Специальные профилактические меры предусматривают серологические исследования коров и нетелей на бруцеллез один раз в три года, быков — производителей один раз в два года. При установлении диагноза на бруцеллез, согласно Ветеринарному уставу Республики Беларусь, в неблагополучном хозяйстве вводится карантин. По условиям карантина запрещается: ввоз на неблагополучные фермы, вывоз из них восприимчивых к бруцеллезу животных; перегруппировка животных внутри хозяйства без разрешения главного ветеринарного врача; заготовка на неблагополучных территориях племенных и пользовательных животных, грубых кормов для вывоза их в другие хозяйства и районы, а также проведение ярмарок, базаров и выставок животных; использование больных (положительно реагирующих) бруцеллезом животных и полученного от них приплода для воспроизводства стада; вывоз необеззараженного молока, полученного от коров неблагополучной фермы, на молокоперерабатывающее предприятие. Молоко от коров, положительно реагирующих на бруцеллез, обеззараживают кипячением или переработкой на масло топленое — сырец. Аналогично поступают с молоком коров, положительно реагирующих на бруцеллез, в благополучных хозяйствах до установления (исключения) диагноза на эту болезнь. Молоко от не реагирующих коров неблагополучного стада обеззараживают при температуре +70°С в течение 30 мин или при температуре I90°С в течение 20 с или кипячением.

Оздоровление крупного рогатого скота от бруцеллеза осуществляется путем полной ликвидации поголовья неблагополучного хозяйства (фермы) и проведения санации помещений. Животных, положительно реагирующих при исследовании на бруцеллез, абортировавших или имеющих другие клинические признаки болезни, немедленно изолируют от другого поголовья и в течение 15 дней сдают на убой без откорма и нагула, независимо от их племенной и производственной ценности, весовых кондиций, возраста, состояния беременности. Хозяйство признается оздоровленным от бруцеллеза крупного рогатого o нота и с него снимается карантин после убоя неблагополучного поголовья, санации животноводческих помещений, территории ферм и получения двух отрицательных результатов серологических исследований на (бруцеллез с интервалом 30 дней животных, имевших контакт с животными неблагополучного стада, включая скот, принадлежащий гражданам, проживающим в данном населенном пункте. На неблагополучных фермах проводят дезинфекцию, дезинсекцию, дератизацию, санитарный ремонт животноводческих помещений и другие ветеринарно-санитарные мероприятия.

Для дезинфекции в хозяйствах применяют 20% -ю взвесь свежегашеной и жести, взвесь или осветленный раствор хлорной извести, содержащей активного хлора, препарат ДП — 2,2% -й горячий раствор гидроксида па грим, 3% -й горячий раствор каустифицированной содопогашенной смеси, и раствор формальдегида, 5% -й горячий раствор кальцинированной годы, 0,5% -й раствор глутарового альдегида, 5% -й раствор технического натрия, растворы нейтрального гипохлорита кальция, тексанита, содержащие 3 % активного хлора. При установлении диагноза у овец (коз) в благополучных районах, все неблагополучное поголовье овец (коз) хозяйства, независимо от форм собственности, вместе с приплодом подвергают немедленному убою.

Остальное поголовье овец (коз), бывшее в контакте с неблагополучной тарой, подвергается двукратному серологическому исследованию с интервалом в 30 дней. При получении отрицательного результата исследований, убоя неблагополучной отары, проведении санации территории ферм, животноводческих помещений карантин снимается. На фермах и комплексах с поголовьем до 12 тыс. животных, на которых установлено заболевание свиней бруцеллезом, все поголовье, в том числе молодняк, сдают на убой. Супоросных маток сдают на убой после окончании опороса и отъема поросят. Ликвидацию очага бруцеллеза осуществляют в срок не более 6 месяцев. На неблагополучной ферме осеменение свиноматок запрещается. На комплексах по выращиванию свиней, имеющих более 12 тыс. голов, при установлении бруцеллеза убою подвергается все поголовье неблагополучных технологических групп, секторов (блоков) или свинарников. При установлении заболевания крупного рогатого скота в отдельных хозяйствах граждан все поголовье животных, содержащихся в этих хозяйствах, подвергается исследованиям серологическим методом до получения двукратных отрицательных результатов.

источник

Диагностические исследования животных в данном хозяйстве запланированы по следующим болезням; туберкулёз, бруцеллёз, лейкоз и лептоспироз крупного рогатого скота, а также диагностические копрологические исследования.

Аллергическому исследованию на туберкулёз подвергают крупный рогатый скот с двух месячного возраста один раз в год. Для этого используют туберкулин очищенный (ГТГТД) для млекопитающих в виде стандартного раствора, готового для употребления. Туберкулинизацию животных проводят ветеринарные врачи и фельдшеры. Перед исследованием все поголовье подвергают клиническому осмотру и выборочной термометрии для исключения псевдоаллергических реакций на туберкулин. Для введения туберкулина используют безигольные инъекторы. Туберкулин вводят внутрикожно, крупному рогатому скоту в средней трети шеи в дозе 0,2 мл. Перед введением шерсть в месте инъекции выстригают, кожу обрабатывают 70% этиловым спиртом. Учёт и оценку реакции на введение туберкулина проводят через 72 часа после введения; при учёте реакции у каждого животного пальпируют и осматривают место введения туберкулина. Положительная реакция проявляется в виде разлитой припухлости тестоватой консистенции, не имеющей чётких границ с окружающей тканью. Образованием отёка сопровождается повышением местной температуры, гиперемией и болезненностью воспалённого участка кожи. При сильно выраженной кожной реакции может увеличится предлопаточный лимфатический узел. При обнаружении изменений в месте введения туберкулина измеряют кутиметром толщину складки в миллиметрах и определяют величину её утолщения сравниванием с толщиной складки неизменённой кожи вблизи места введения. Коров считают реагирующими на туберкулин при утолщении кожной складки на 3 мл. С реагирующими животными поступают в порядке, предусмотренном инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулёза животных. По окончанию работы составляют акт и опись всего поголовья исследованных животных. Документация хранится в делах ветеринарной станции.

В течение последних 10 лет положительная реакция на туберкулин ни разу не регистрировалась .

На бруцеллёз исследуют животных серологически., для этого в Кезкую ветеринарную лабораторию направляют сыворотку крови животных. При плановых профилактических исследованиях животных на бруцеллез сыворотки крови животных благополучных хозяйств исследуют в РА и РСК для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител.

Исследованию на бруцеллёз подвергаются животные с 3-х месячного возраста, два раза в год. В лаборатории для диагностики бруцеллёза ставят реакцию агглютинации и реакцию связывания комплемента, В случае положительной реакции животных изолируют и исследуют повторно через 30 дней, при повторной положительной реакции сдают на мясокомбинат.

На лейкоз исследуют животных серологически- РИД- реакцию иммунодиффузии, два раза в год, для этого в Дебёсскую ветеринарную лабораторию направляют сыворотку крови животных. . Реакция позволяет обнаруживать вирус лейкоза через 2 — 4 мес после инфицирования животных. У телят материнские антитела выявляйются до 6-месячного возраста, поэтому диагностическое значение у них имеют лишь антитела, обнаруживаемые с 6-месячного возраста, поэтому исследуют с 6-ти месячного возраста. При гематологическом исследовании на лейкоз используют различные критерии, названные лейкозными ключами. Определяют отклонения от нормальных количеств лейкоцитов и молодых клеток, абсолютное число и процентное отношение лимфоцитов по спец. таблице,

Следует также учитывать, что по мере развития патологического процесса у животных может происходить снижение числа лейкоцитов, иногда даже ниже нормы, Кроме того, в 8 — 30 % случаев лейкоз может протекать алейкемически (количество лейкоцитов 5,5 — 9,5 тыс/мкл). Все животные, у которых установлен переистентныи (длительный) лимфоцитоз (ПЛЦ), являются носителями вируса лейкоза, но переистент­ныи лимфоцитоз бывает не у всех инфицированных животных (15 — 72 %). Поэтому с помощью лейкозного ключа выявляют только больных лейкозами животных — с гема­тологическими изменениями. В случае положительной РИД животных изолируют , с гема­тологическими изменениями сдают на мясокомбинат.

На лептоспироз исследуется 10 % поголовья крупного рогатого скота, сыворотку от них исследуют в РМА. Положительно реагирующих животных с титрами антител у вакцинированных 1:100, невакцинированных 1:50 сдают на мясокомбинат. Исследования кала животных (коров ) планируют 2 раза в год: перед началом пастбищного периода и после постановки на стойловое содержание. Выборочно исследуются пробы от животных из каждого корпуса и каждой возрастной группы.

Дата добавления: 2017-01-28 ; просмотров: 388 | Нарушение авторских прав

источник

Разведение крупного рогатого скота (КРС) – выгодный и прибыльный вид деятельности, благодаря которому можно получить свежее молоко и мясо. К сожалению, содержание коров и быков может принести немало проблем. У этих животных могут развиться различные инфекционные заболевания, одно из которых – бруцеллез КРС. Ему подвержены не только коровы и быки, но и другие представители фауны, в том числе и человек.

Первое упоминание заболевания появилось около 2 тысяч лет назад, сделано оно было знаменитым древнегреческим целителем Гиппократом. В 19 веке бруцеллез был научно описан английским врачом, а вскоре ученые нашли микроорганизм, который вызывал недуг. В то время заболевание называлось средиземноморской или мальтийской лихорадкой. На протяжении долгого времени постоянные аборты у скота считались отдельным заболеванием, но в итоге была найдена связь недуга и биологических признаков возбудителей.

Бруцеллез у крупного рогатого скота – серьезное бактериальное заболевание, которое вызывается микроорганизмами рода Бруцелла (Brucella). Характеризуется патологиями в половой структуре у КРС, а также поражениями нервной системы, сердца, сосудов, костей и суставов. Проникая в организм коровы, инфекция перемещается в молочные железы, селезенку, печень и матку, в итоге стимулируя аборт. Выделяют несколько форм недуга, описанных в таблице ниже.

Бактерия Бруцелла, вызывающая бруцеллез

Бактерия очень устойчива к внешней среде. Она отлично выживает в условиях отрицательной температуры. До пяти месяцев Бруцелла живет в водных условиях, в земле – три месяца и больше. В молоке она присутствует до 46 дней, в брынзе – до двух месяцев. Остальные молочные продукты содержат бактерию на протяжении всего срока их пищевой ценности. Бактерия погибает, если прокипятить молоко и произвести его пастеризацию. Препараты же дезинфекции способны избавиться от Бруцеллы за несколько минут.

Заражение может осуществляться разными способами, но чаще всего инфекция проникает в организм животных фекально-оральным методом. Распространяется инфекция очень быстро, передаваясь от зараженных коров к здоровым особям. Также бактерии могут попасть бытовым способом, когда на пораженную слизистую животного попадает возбудитель недуга.

Самые частые случаи заражения – через корм, воду, предметы ухода, подстилку и другие вещи, с которыми чаще всего контактирует скот.

Микробы так же могут попасть в организм через трещины на коже, органы пищеварения и дыхательные пути.

Чаще всего бруцеллез развивается у скота, который проживает на частных фермерских и приусадебных предприятиях. Происходит это преимущественно в пастбищный период, во время контакта с другими животными. Многие фермеры не понимают, насколько опасна болезнь (не только для животных, но и для человека). Вспышки заболевания могут наблюдаться после завоза новых особей на ферму, а также при несоблюдении правил карантина и отсутствии правильных лабораторных мероприятий и вакцинации.

Главный признак бруцеллеза у КРС – это выкидыш или появление на свет нежизнеспособной особи. Развитие тех или иных симптомов зависит от индивидуальных особенностей каждого отдельно взятого животного. Если есть подозрение на заболевание, следует обратить внимание и на другие симптомы болезни.

Пошаговая инструкция по осмотру и выявлению бруцеллеза у КРС.

Шаг 1. Проверьте, появились ли на задних конечностях коровы/быка/теленка абсцессы (нарывы, гнойники, которые появляются из-за воспалительного процесса) или гугромы (кисты, образующиеся в тканях). Часто у животного развивается бурсит – воспаление суставов на передних конечностях;

Шаг 2. Понаблюдайте за тем, как питается животное. Если скот болен, то аппетит у него упадет, он станет малоподвижным и слабо активным. Корова/бык/теленок становятся угнетенными, их походка может быть неуверенной. Вес начнет снижаться. Иногда может наблюдаться повышенная температура тела;

Шаг 3. Проверьте, нет ли у животного слизистых выделений из половых органов. Они бурого или коричневого цвета, совсем не имеют запаха;

Шаг 4. Участвуйте в родах скота. У коров, которые пережили выкидыш, может наблюдаться задержка последа (плаценты). Иногда развивается эндометрит, вызванный воспалительными процессами, он сопровождается обильным выделением гноя;

Шаг 5. Внимательно следите за количеством молока. Удой коровы снижается, если она больна бруцеллезом. Ее вымя может отекать, воспаляются молочные железы.

Симптомы бруцеллеза у КРС: поражение конечностей

У быков также можно диагностировать болезнь. У них наблюдаются признаки воспаления препуции (крайней плоти), а также орхит (воспаление тканей яичек). Помните о том, что некоторые симптомы могут оказаться двоякими: например, выкидыши могут происходить из-за туберкулезного заболевания. Если даже корова получила заражение через открытую ранку, в ее области не наблюдается никаких признаков недуга.Симптоматика бруцеллеза слабовыраженная, и реальный диагноз может определить только специалист.

Установить диагноз самостоятельно очень сложно. Если вы не являетесь опытным фермером и не можете самостоятельно диагностировать заболевание, обратитесь к специалисту (ветеринару). Он осмотрит животное, получит от вас всю необходимую информацию. Если у врача появится подозрение на заражение, он назначает исследование в лаборатории. В зависимости от формы диагностики используется абортированный плод, а также проводится анализ молока или крови коровы. Лабораторные методы диагностики бруцеллеза:

1. Реакция аллергии. Самке вводится абортин, ответ будет получен примерно через сутки (но не позднее 72 часов). По величине опухоли можно судить о наличии заболевания. Следует насторожиться, если образование достигло величины фасоли. Есть отрицательная сторона у этого метода: перенесшие бруцеллез, но полностью здоровые животные также дают положительную реакцию;
2. Реакция агглютинации Райта. Иногда невозможно найти причину заражения в крови животного. Чаще всего в диагностике болезни используется анализ на реакцию агглютинации, специалисты оценивают ее и исследуют. Это самый надежный метод определения возбудителя. Для его применения необходимо приготовить антиген, затем оценить и исследовать реакцию. У заболевших животных она положительная.

Диагностика бруцеллеза: реакция агглютинации Райта

Шаг 1. Привяжите корову, зафиксируйте ее голову за рога или недоузок;

Шаг 2. У самого начала шеи наложите жгут из резины или плотный ремешок, затяните его. Если вы все сделали правильно, яремная вена должна налиться кровью. Попробуйте ее прощупать;

Шаг 3. Возьмите острую иглу (предварительно прокипяченную), вколите ее в яремную венку, двигаясь снизу вверх (глубина – около 4 сантиметров). Каждой корове – своя, индивидуальная иголка;

Шаг 4. Кровь должна вытечь из иглы, поэтому предварительно подставьте чистую пробирку. Если жидкость не идет, поверните иглу вокруг оси и подвигайте ее то вперед, то назад;

Шаг 5. Когда пробирка наполнится на 2/3 от объема, ослабьте ремешок, зажмите венку пальцами и резко выньте иглу;

Шаг 6. Закройте пробирку специальной пробкой, кожу в месте укола смажьте настойкой йода.

Правильная фиксация коровы для взятия анализа

Необходимо четко следовать инструкции и учитывать все меры безопасности при заборе крови. Чтобы не заразиться бруцеллезом, рекомендуется проводить забор крови и прочих жидкостей в специально оборудованных лабораториях.

Болезнь может иметь острое, хроническое или бессимптомное течение. Больше всего предрасположены к болезни взрослые особи. Когда возбудитель проникает в организм, он начинает размножаться у ворот инфекции, после чего воспаление доставляется в кровеносные и лимфатические пути и проникает в весь организм. Инфекция заполняет тело животного, местом дислокации выбирая определенные органы и системы.

Основные органы поражения – печень, молочные железы, селезенка и матка.

Локализируясь в плаценте, инфекция вызывает нарушения в развитии эмбриона, оно останавливается, происходит аборт. Это может случиться на четвертом или пятом месяце беременности. Телята, которые родились своевременно, могут оказаться нежизнеспособными. Обычно такие особи умирают в первые несколько дней жизни. Инкубационный период заболевания – от 2 до 4 недель.

Если в стаде нет беременных особей, определить недуг поможет только лабораторное исследование.

То, как проходит бруцеллез в стае, зависит от количества беременных самок. В некоторых стадах выкидыш происходит у половины самок и более. Как правило, аборт случается один раз, гораздо реже – два раза. Если инфекция была занесена в здоровое стадо, выкидыш может произойти у 60% самок. От бруцеллеза взрослые особи не умирают. При вскрытии могут быть найдены поражения в половой структуре, некрозы в суставах, воспаления в печени, почках и селезенке.

Метод лечения выбирается исходя из тяжести бруцеллеза. На первой стадии эффективны антибиотики, которые избавляют организм от возбудителя недуга: рифампицин, левомицетин, стрептомицин, тетрациклин. Время лечения и необходимую дозу назначает ветеринар. При хроническом течении болезни антибиотики бесполезны – в этом случае назначается вакцинация, снимающая симптомы и останавливающая дальнейшее развитие бактерий.

В некоторых случаях при лечении болезни используют комплексную терапию. К антибиотикам добавляются иммуностимулирующие медикаменты либо противовоспалительные средства. Если у животного появляются боли, ему назначают болеутоляющие препараты. Назначенные врачом уколы можно производить самостоятельно.

Инструкция по правильному введению лекарства.

Методы лечения бруцеллеза КРС: укол корове

В группу риска заражения бруцеллезом попадают люди, которые работают с животными. Чтобы не допустить развитие у крупного рогатого скота заражения, необходимо придерживаться четких правил ухода, содержания и разведения КРС:

Памятка по профилактике бруцеллеза КРС

Содержание крупного рогатого скота в плохих, некомфортных условиях значительно снижает их иммунитет, увеличивая риск заражения инфекциями, в частности, ею может оказаться бруцеллез КРС.

Соблюдайте все профилактические меры по предотвращению заболевания, ухаживайте за скотом, тщательно обрабатывайте молочную и мясную пищу, при появлении первых признаков болезни животного обратитесь к ветеринару. Эти несложные правила помогут вам сохранить здоровье и благополучие всего поголовья крупного рогатого скота и будущего молодняка.

Человек может заразиться бруцеллезом при потреблении молока, которое было получено от зараженных животных (в том числе продуктов молочного происхождения). Если плохо обрабатывать мясо, также есть шанс получить заболевание. Часто заражение происходит на производстве, связанном с обработкой шерсти и кожи. Заболеть можно любым путем, даже во время контакта с больной коровой. Бывали случаи, когда человек заражался бруцеллезом во время уборки навоза. Скрытый период протекания болезни может продолжаться от недели до нескольких месяцев.

Внимательно следите за своим здоровьем, если ваша работа заключается в уходе за крупным рогатым скотом.

Симптомы бруцеллеза у человека разнообразны:

• общее недомогание;
• нервозность, стрессы;
• боль в голове, неприятные ощущения в мышцах и суставах;
• медлительность, слабая подвижность;
• сниженный аппетит;
• повышение температуры (до 37 градусов и больше);
• озноб.

Симптомы могут не проявлять себя вообще, и не обязательно, что они будут присутствовать одновременно. Во время болезни поражаются сосуды, нервные клетки и костно-суставный аппарат. Нередко появление расстройств в психике. Заболевание длится примерно 3 месяца, но может затянуться и на 2-3 года. Остаточные явления, которыми сопровождается заболевание, могут стать причиной развития инвалидности. У беременных женщин может случиться выкидыш.

Чтобы избежать появления болезни, не используйте в пищу сырое молоко, невыдержанные сыры и брынзу, а также не ешьте мясо, которое не прошло необходимую обработку.

Употребление молока от больного животного

Многие врачи не сразу могут определить наличие этого заболевания у человека. Из отрывка телепередачи «Жить здорово» с Еленой Малышевой вы узнаете, как диагностировать бруцеллез у человека, какие органы поражает недуг и что с этим делать.

источник

Бруцеллез КРС (этиология, эпизоотология, патологоанатомические изменения, диагностика, дифференциальная диагностика, профилактика и меры борьбы)

Бруцеллез (brucellessis) – хроническая инфекционная болезнь животных и человека. У многих животных проявляется абортами и задержанием последа, орхитами, рождением нежизнеспособного молодняка и бесплодием. В связи с социальной опасностью бруцеллез включен в список карантинных болезней.

Бруцеллез распространен во многих странах мира – в Африке, Центральной и Южной Америке, в некоторых странах Азии и Европы, в том числе СНГ (Украина, Россия, Казахстан). В Республике Беларусь бруцеллез не регистрируется с 1982 года.

Экономический ущерб складывается из недополучения приплода (аборты могут регистрироваться у 60% животных), яловости, снижения продуктивности, большие затраты идут на проведение карантинных мероприятий. Заболевание у человека может привести к инвалидности (чаще из-за поражения суставов) и даже к смерти.

Этиология. Бактерии из рода Brucella подразделяют на 6 видов: Br. abortus (возбудитель бруцеллеза крупного рогатого скота); Br. melitensis (овец и коз; особенно восприимчив человек); Br. suis(свиней); Br. neotomae (крыс); Br. ovis (инфекционного эпидидимита баранов); Br. canis (бруцеллез собак). Все виды бруцелл по морфологии и культуральным свойствам не отличаются друг от друга. Это мелкие неподвижные бактерии размером 0,3-0,5 х 0,6-2,5 мкм, спор не образует, грамотрицательны, растут на обычных питательных средах. К физическим и химическим факторам устойчивость бруцелл невысокая: в почве, воде, навозе, грубых кормах возбудитель сохраняет жизнеспособность до 4 мес.; прямые солнечные лучи убивают за 3-4 часа, нагревание до 900-1000С – моментально. По устойчивости к дезосредствам отнесены к 1-й группе возбудителей инфекционных болезней (малоустойчивы).

Эпизоотологические данные. Восприимчивы многие виды диких и домашних животных. Чаще заболевает крупный рогатый скот, свиньи, овцы, реже – лошади и верблюды. К бруцеллезу восприимчив человек. Молодняк до 5-ти мес. возраста относительно устойчив к бруцеллезу. Его восприимчивость возрастает к периоду созревания половой системы. Из лабораторных животных – восприимчивы морские свинки, реже – белые мыши. Источник возбудителя инфекции – больные животные. Возбудитель выделяется из организма с абортированным плодом, околоплодными водами, истечениями из половых органов, с молоком, спермой, мочой и калом. Факторами передачи являются контаминированные объекты внешней среды, акушерские инструменты, продукция и сырье животного происхождения, инвентарь и спецодежда. Заражение происходит алиментарным и половым путем, через кожу и слизистые оболочки (даже неповрежденные), трансмиссивно (через укусы клещей и кровососущих насекомых). Для заболевания характерна стационарность, которая обусловлена носительством возбудителя мышевидными грызунами, кровососущими насекомыми, дикими животными. Сезонность болезни не выражена.

У крупного рогатого скота, свиней и овец бруцеллез протекает в виде эпизоотий, заболеваемость может достигать 60%, больные животные погибают в редких случаях.

Патогенез. Бруцеллы проникают из внешней среды в организм через слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы, конъюнктиву, а также через поврежденную кожу. В течение первых 6-10 дней бруцеллы с током лимфы попадают в лимфоузлы, обусловливая скрытую форму болезни, затем в течение 10-15 дней локализуются в соответствующем лимфоузле (фаза регионарной инфекции). Через 20-30 дней, преодолев регионарный барьер, бруцеллы выхолят из лимфоузла, и с током лимфы и крови распространяются по всему организму, обсеменяя все органы, и в случае беременности – плод. Воспалительные процессы развиваются в различных органах, клинически проявляясь артритами, маститами, эпидидимитами, бурситами, абсцессами и абортами.

Течение и симптомы болезни. Инкубационный период – 3-4 недели (время от попадания бруцелл в организм до появления антител в сыворотке крови). Течение болезни чаще хроническое, в отдельных случаях протекает бессимптомно. Ведущим симптомом у беременных животных является аборт. У коров аборты чаще регистрируются во второй половине беременности, имеют место задержание последа, приводящее к эндометриту и яловости, маститы и повышается температура тела. У быков чаще регистрируют эпидидимиты и артриты.

У свиноматок нередки аборты в первую половину супоросности, проходят легко, они малозаметны. Животное через 7-10 дней после аборта может снова приходить в охоту. У свиноматок также часто наблюдаются абсцессы в подкожной клетчатке, парезы и параличи задних конечностей.

Патологоанатомические изменения. Взрослые животные гибнут от бруцеллеза очень редко. При вскрытии отмечают у самок основные поражения в половой системе (гнойно-катаральный метрит), также – гнойно-некротические изменения в суставах и придатках семенников, абсцессы в печени, почках, селезенке.

Наибольшее диагностическое значение имеют патизменения в абортированных плодах: отеки подкожной клетчатки, скопление в брюшной и грудной полостях жидкости буро-красного цвета с фибрином, кровоизлияния на слизистых и серозных оболочках, некрозы в печени.

Диагностика. Учитывают эпизоотологические, клинические и патологоанатомические данные. Окончательная диагностика осуществляется на основании лабораторных исследований.

Во всех случаях аборта проводят бактериологическое исследование плода (желудок) и ставят биопробу. Основной метод прижизненной диагностики бруцеллеза – серологический (РА, РСК, РДСК, РБП – розбенгалпроба и КР с молоком). Кроме того, у овец, коз и свиней используют аллергическую пробу. Бактериологические исследования проводят в случае аборта или появления других признаков бруцеллеза. Диагноз считают установленным при положительных результатах бактериологического исследования и при сохранении у подозрительных по заболеванию животных реакций при повторных исследованиях.

При постановке диагноза исключают кампилобактериоз, хламидиоз, инфекционный эпидидимит, лептоспироз, сальмонеллез, незаразные болезни с симптомами аборта.

Лечение. Больные животные подлежат убою.

Специфическая профилактика. В ряде стран для специфической профилактики бруцеллеза используют живые вакцины из штаммов №19, №82, REV – 1 и др. В Республике Беларусь Специфическая профилактика бруцеллеза у животных не проводится.

Мероприятия по профилактике и ликвидации. В благополучных по бруцеллезу хозяйствах осуществляют постоянный контроль за состоянием поголовья, перегруппировками, ввозом и вывозом животных, соблюдением ветеринарно-санитарных правил, раз в два года проводят серологические исследования сывороток крови животных.

При установлении впервые бруцеллеза в ранее благополучном хозяйстве животных вместе с молодняком отправляют на убой. В стационарно неблагополучных районах молодняк выращивают изолированно, формируя из него дойные стада. Неблагополучные хозяйства карантинируют и оздоравливают путем систематических диагностических исследований. При этом проводят серологическое исследование сыворотки крови, через каждые 15-30 дней, до получения двух подряд отрицательных результатов, затем стадо ставят на профилактический контроль сроком на 6 месяцев и в этот период проводят два контрольных исследования через 3 месяца. При получении отрицательных результатов карантин снимают при условии проведения всего комплекса мероприятий по ликвидации болезни

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ — конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

источник

1.1. Бруцеллез — инфекционная, хронически протекающая болезнь животных.

Возбудитель — бактерии из рода бруцелла, в который входят шесть самостоятельных видов: мелитензис (овец и коз), абортус (крупного рогатого скота), суис (свиней), канис (собак), овис (баранов и овец) и неотома (кустарниковых крыс).

Микроорганизмы первых четырех видов вызывают бруцеллез животных, а пятого вида — инфекционный эпидидимит баранов (ИЭ).

От животных, больных бруцеллезом, могут заражаться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз.

1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных.

1.2.1. При установлении диагноза на бруцеллез необходимо учитывать следующее:

— различные виды возбудителя являются патогенными, в основном, для животных соответствующего вида. Бруцеллы видов мелитензис, абортус и суис могут мигрировать на животных других видов;

— клинические признаки бруцеллеза у животных не характерны. Наиболее часто клиническое проявление болезни у маточного поголовья — аборт, у свиноматок наблюдается мумификация плодов.

При абортах отмечается утолщение плодовых оболочек, образование на них фибринозных или гнойных хлопьев. Бруцеллез сопровождается нередко поражением суставов (артриты), синовиальной системы (тендовагиниты, бурситы), половой системы (у самок — эндометрит, вагинит, у самцов — орхит, эпидидимит);

— патологоанатомическая картина при бруцеллезе не имеет характерных особенностей, позволяющих использовать их для диагностики этой болезни. Только у свиней на слизистой оболочке матки иногда находят желтовато-гнойные или казеозные узелки величиной с просяное зерно, так называемый «милиарный бруцеллез матки»;

— у баранов, больных бруцеллезом, в семенниках и придатках обнаруживают некротические или гнойные очаги различной величины; отмечают заполнение полости мошонки серозно-гнойным транссудатом, разрастание фиброзной ткани, сращение придатка с семенником и общей влагалищной оболочкой, иногда атрофию семенников.

1.3. Диагностика бруцеллеза включает лабораторные (бактериологическое, серологическое и молекулярно-генетическое) исследования материала и аллергическое исследование свиней в хозяйствах.

Плановые серологические исследования являются основным методом выявления больных и подозрительных по заболеванию животных.

Бактериологическую диагностику проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и прочие), вызывающих подозрение на данное заболевание. Одновременно проводят серологическое исследование сывороток крови этих животных.

Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию.

1.4. При взятии проб крови, молока и патологического материала, а также проведении лабораторных исследований необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями.

2.1. Материал для лабораторных исследований отбирают от каждого животного в отдельности.

2.2. Для бактериологического исследования на бруцеллез направляют абортированный плод с плодовыми оболочками (от свиноматок берут не менее трех плодов) или селезенку, печень, желудок плода с содержимым, перевязанный со стороны пищевода и двенадцатиперстной кишки, и околоплодную жидкость.

Для прижизненной диагностики бруцеллеза от животных берут кровь, молоко, содержимое гигром (бурситов) и абсцессов. При диагностическом убое — дополнительно селезенку, печень, подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые лимфатические узлы и половые органы. Жидкий материал берут в стерильную посуду (пробирки, банки).

При взятии содержимого гигром, бурс в области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70%-ным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10 — 15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.

У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Молоко должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день взятия пробы. Если это невозможно, молоко консервируют сухой борной кислотой (0,1 г на 10 мл) или генцианвиолетом (0,4 мл 1%-ного спиртоводного раствора краски на 10 мл молока). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10 дней.

2.2.1. Отобранные для бактериологического исследования пробы упаковывают в целлофан или пергаментную бумагу, помещают в непроницаемую тару (ящик, банка, полиэтиленовый пакет) и в этот же день направляют в лабораторию. От абортировавшего животного одновременно с патологическим материалом направляют кровь (сыворотку крови) для серологического исследования на бруцеллез. Если в течение 24 — 30 ч взятый материал доставить в лабораторию не представляется возможным, его консервируют стерильным 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, превышающем его объем в 4 — 5 раз. Крупные плоды направляют в неконсервированном виде.

2.3. Для серологического исследования в лабораторию направляют кровь (сыворотку крови) и молоко.

2.3.1. Кровь у животных берут из яремной вены (у свиней — из яремной, ушной или хвостовой; у собак — головной предплечья или латеральной подколенной голени; у лисиц и песцов — из бедренной вены; у норок — путем отсечения подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста в стерильные пробирки по 5 — 7 мл (от пушных зверей по 1 — 2 мл). Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

Сыворотку крови получают методом отстоя. Для свертывания крови и отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают в термостате при 30 — 38 °С в течение 1 ч или при комнатной температуре 8 — 10 ч, сгусток крови от стенок отделяют стальной спицей, а затем пробирки выдерживают при 4 — 10 °С. Через 20 — 24 ч после взятия крови отстоявшуюся сыворотку сливают в сухие стерильные пробирки и направляют для исследования в лабораторию в свежем или консервированном виде (сыворотку крови собак сливают через 3 — 4 ч и повторно через 10 — 12 ч).

Консервирование сывороток проводят:

— добавлением 0,05 мл (1 капля) 5%-ного раствора фенола на каждый миллилитр сыворотки при тщательном перемешивании;

— сухой борной кислотой (2 — 4% к объему сыворотки) до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка;

— путем однократного замораживания.

Неконсервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 6 сут. со дня взятия крови при условии хранения их при 4 — 8 °С.

Сыворотки, консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 сут.; замороженные сыворотки — в течение 3 сут. после однократного оттаивания.

Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию на бруцеллез не подлежат.

2.3.2. Для исследования на бруцеллез в кольцевой реакции пробу цельного свежего молока от коровы (буйволицы) берут сборную из каждой доли вымени одного удоя в одну стерильную пробирку в количестве 10 — 15 мл. При этом, если молоко берут перед дойкой, то первые порции молока сдаивают. Пробы молока на рынках берут из каждой отдельной посуды (бидон, фляга и проч.) после тщательного его перемешивания. Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

Молоко исследуют свежее (охлажденное до 4 — 10 °С или неохлажденное) или консервированное добавлением в каждую пробу одной капли 10%-ного раствора формалина на 5 мл молока. Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 2 — 3 сут. Перед исследованием молоко необходимо тщательно перемешать для равномерного распределения сливок.

При массовом исследовании молока работу по отбору проб и постановке кольцевой реакции можно проводить непосредственно на ферме в специально отведенном помещении.

Не разрешается исследовать в кольцевой реакции молоко от коров (буйволиц), больных маститом или болезнями, сопровождающимися повышением температуры тела, а также молоко животных в первые две недели после родов. Молоко, имеющее повышенную кислотность (30° по Тернеру и выше), исследованию не подлежит, т.к. антиген обесцвечивается.

2.4. На направляемый в лабораторию материал заполняют сопроводительный документ установленной формы.

3.1. Бактериологическую диагностику бруцеллеза проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и прочие), вызывающих подозрение на данное заболевание.

3.2. Бруцеллы обнаруживают бактериоскопией мазков из патологического материала, выделением культуры бруцелл на питательных средах и, при необходимости, путем постановки биологической пробы на морских свинках.

3.3. Бактериоскопическое исследование

Из доставленного на исследование патологического материала делают по два мазка из каждого объекта. При исследовании абортированных плодов мазки готовят из содержимого желудка, жидкости брюшной и грудной полостей, печени, селезенки, а также котиледонов плодовых оболочек. Из паренхиматозных органов, котиледонов и другого плотного материала делают мазки-отпечатки, жидкий материал наносят на предметные стекла пипеткой.

Мазки, фиксированные над пламенем горелки, окрашивают по Граму и одному из следующих специальных методов: по Стампу (модифицированный метод Циль-Нильсена), Козловскому или Шуляку-Шину (см. Прил. N 1, п. 1). При микроскопии мазков учитывают, что бруцеллы — мелкие, грамотрицательные, расположенные отдельно, попарно или кучно коккобактерии, окрашивающиеся по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шину в красный цвет.

3.4. Бактериологическое исследование

3.4.1. Для культивирования бруцелл используют мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), печеночный глюкозо-глицериновый бульон (ПГГБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночный глюкозо-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар, эритрит-агар, сывороточно-декстрозный агар, печеночно-сывороточный агар и печеночно-аминопептидный агар, (см. Прил. N 1, п. 2) и другие питательные среды, предназначенные для этой цели.

3.4.2. Перед посевом материала кожу абортированного плода с поверхности по белой линии протирают тампонами, смоченными 5%-ным раствором фенола. Стерильными ножницами вскрывают брюшную стенку и грудную клетку плода, содержимое грудной и брюшной полостей набирают пастеровскими пипетками и высевают в 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром, а содержимое желудка — в 2 пробирки с бульоном и не менее 5 пробирок с агаром.

Из печени и селезенки вырезают кусочки размером не менее 2,0 х 1,5 х 2,5 см, увлажняют их спиртом, обжигают с поверхности и растирают в стерильной ступке с песком. Затем в ступку добавляют равное количество стерильного физиологического раствора и вновь растирают. Полученную взвесь пастеровской пипеткой по 0,1 — 0,2 мл высевают на поверхность предварительно подсушенных плотных сред (в пробирках или чашках). Допускается высев материала пастеровской пипеткой из органов (место прокола органа предварительно прижигают раскаленным шпателем). Из каждого органа делают посев на 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром.

Если в лабораторию доставлен только желудок плода, высев проводят не менее чем на 10 пробирок агара.

При поступлении нескольких плодов от одного животного посевы делают из органов и тканей каждого плода отдельно.

Из плодовых оболочек и плаценты вырезают кусочки тканей с утолщенными ворсинками и стенками, наличием на поверхности фибрина или гнойного экссудата (выбирают менее загрязненные участки без некротических изменений).

Для уничтожения посторонней микрофлоры кусочки плаценты помещают в чашку Петри и заливают 3%-ным раствором гидроокиси калия на 30 мин. Затем их обмывают стерильным физиологическим раствором, готовят из этого материала суспензию в ступке со стерильным песком и делают посев пастеровской пипеткой на чашки со средой, содержащей бактериостатические препараты: генцианвиолет 1:200000 (0,1 мл 0,5%-ного спиртоводного раствора на 100 мл среды) или кристаллвиолет 1:100000, генцианвиолет и малахитовую зелень в концентрации каждой краски 1:200000, уксуснокислый натрий из расчета 12,5 мг на 100 мл среды и др.

Содержимое бурс, гигром высевают на 3 — 4 чашки с плотной питательной средой, содержащей бактериостатические препараты.

Пробы молока центрифугируют 30 мин. при 3000 об./мин. Верхний слой (сливки) и осадок набирают в пастеровскую пипетку и по 0,1 — 0,2 мл вносят на 3 — 4 чашки с агаром, содержащим бактериостатические препараты. Молоко, консервированное генцианвиолетом или другими консервантами, высевают на среды без бактериостатических веществ.

3.4.3. Для выращивания культур посевы помещают в термостат при 37 — 38 °С.

При исследовании материала от крупного рогатого скота половину

засеянных пробирок и чашек культивируют в обычных условиях, другую

— в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа (10 — 15%)

в СО -инкубаторе или эксикаторе (микроанаэростате). Аналогичные

условия можно создать в пробирках, закрытых резиновыми пробками

Перед парафинированием пробирки закрывают ватными пробками, пронося последние над пламенем горелки. Затем верхнюю часть пробки обрезают, а оставшуюся часть углубляют на 0,5 — 1,0 см внутрь пробирки и заливают расплавленным парафином.

Необходимое содержание углекислого газа в эксикаторе можно получить путем:

— заполнения части объема углекислым газом из баллона или аппарата Киппа;

— внесения бикарбоната натрия и серной или соляной кислоты (0,48 г бикарбоната натрия и 5 мл 25%-ного раствора кислоты или 0,4 г бикарбоната натрия и 0,35 мл концентрированной соляной кислоты на 1 л объема);

— сжигания ваты, смоченной спиртом. При этом пробирки и чашки с посевами должны занимать не более половины объема эксикатора. Для определения концентрации углекислого газа в эксикаторе можно использовать химический метод (см. Прил. N 1, п. 3).

3.4.4. Посевы выдерживают в термостате при 37 — 38 °С в течение 30 сут. Первичный осмотр посевов проводят через 24 — 48 ч. Пробирки с агаром и бульоном, заросшие посторонней микрофлорой, обезвреживают путем автоклавирования при 1,5 атм. в течение 1 ч.

В дальнейшем для обнаружения роста бруцелл посевы просматривают каждые 3 — 4 сут. визуально, при необходимости через лупу или малом увеличении микроскопа. При отсутствии роста часть поверхности агара орошают посевным материалом.

При значительном росте посторонней микрофлоры (80% и более засеянных пробирок) бактериологическое исследование прекращают.

При просмотре посевов обращают внимание на характер роста микробов. На поверхности агара бруцеллы образуют мелкие, блестящие, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью просвечивающиеся колонии, имеющие в отраженном свете голубоватый оттенок, в падающем свете — сероватый. С возрастом колонии мутнеют и приобретают более темную окраску, что связано с появлением пигмента.

В бульоне бруцеллы образуют равномерное помутнение и пристеночное кольцо, возвышающееся над уровнем бульона, а в дальнейшем небольшой осадок на дне пробирки. В отраженном свете пристеночное кольцо имеет голубоватый оттенок.

При обнаружении роста на жидких средах и отсутствии характерного роста на агаре из каждой пробирки готовят мазки, которые окрашивают одним из специальных методов, и делают пересев на чашки с плотной средой для выделения чистой культуры. Пересевы на чашках культивируют так же, как и высевы из патологического материала.

Выделенные культуры идентифицируют по тинкториальным (окраска мазков по Граму и одним из специальных методов — по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шину), морфологическим, культуральным свойствам и в реакции агглютинации на стекле с использованием набора компонентов для серологической дифференциации бруцелл.

Для постановки пластинчатой реакции агглютинации на стекле необходимы следующие компоненты: испытуемая культура, набор для серологической дифференциации бруцелл (выпускается биопредприятием), 0,5%-ный фенолизированный физиологический раствор рН 7,0 — 7,2.

Для исследования берут двухсуточные агаровые культуры. R- и S-сыворотки бруцеллезные агглютинирующие разводят 0,5%-ным фенолизированным физиологическим раствором до рабочего разведения, указанного на этикетке коробки. Разведенные сыворотки допускается использовать в течение месяца. R-антиген бруцеллезный цветной для РА и антиген бруцеллезный для роз бенгал пробы в пластинчатой РА применяют неразведенными. Предметные стекла для реакции подготавливают общепринятым способом. Физиологический раствор, пробирки и пипетки должны быть стерильными.

Техника постановки реакции. На предметное стекло раздельно наносят по одной капле R- и S-сывороток бруцеллезных агглютинирующих и физиологического раствора. Испытуемую культуру бактериологической петлей отдельно эмульгируют в каплях R- и S-сывороток и в капле физиологического раствора для определения самоагглютинации культуры. Параллельно в каждом опыте ставят контроли: R- и S-сыворотки в разведении, указанном на этикетке, с цветным R-бруцеллезным антигеном и с роз бенгал антигеном.

Учет и оценка реакции. Реакцию учитывают невооруженным глазом или с помощью увеличительного стекла в течение 2 минут по следующей схеме:

++++ (4 креста) — полное просветление жидкости с образованием четко выраженного агглютината — положительная реакция;

+++ (3 креста) — неполное просветление жидкости с выраженным агглютинатом — положительная реакция;

++ (2 креста) — неполное просветление жидкости со слабо выраженным агглютинатом — положительная реакция;

+ (1 крест) — жидкость без просветления с едва заметным агглютинатом — сомнительная реакция;

— (минус) — просветление жидкости не наступило, смесь гомогенная — отрицательная реакция.

Следует иметь ввиду, что реакция с R-бруцеллезной сывороткой проходит замедленно; агглютинат, как правило, мелкозернистый. Результаты реакции с испытуемой культурой считают достоверными, если в контролях R- и S- бруцеллезных сывороток с гомологичными антигенами агглютинация четко выражена не менее чем 3 креста, а с гетерологичными — отсутствует.

Реакцию с испытуемой культурой считают положительной при наличии агглютинации на 2 креста и более. При отрицательной реакции ее проводят повторно с этой же культурой, взятой из трех-четырех мест посева.

Культуры, обладающие типичными для бруцелл морфологическими, культуральными и тинкториальными свойствами, а также дающие положительную реакцию агглютинации с R- и S- бруцеллезными сыворотками в отдельности или с обеими сыворотками одновременно при отсутствии самоагглютинации в физиологическом растворе, признают бруцеллами.

Культура возбудителя инфекционного эпидидимита баранов и бруцеллеза собак, вызванного B. canis, постоянно агглютинируется только R — бруцеллезной сывороткой.

3.5. Биологическое исследование

3.5.1. Биологическое исследование проводят на морских свинках (не менее двух) массой 350 — 400 г, предварительно проверенных на бруцеллез исследованием в РА сыворотки крови в разведении 1:5 с отрицательным результатом.

3.5.2. Для постановки биологической пробы используют тот же материал, что и для бактериологического исследования.

Из органов и содержимого желудка абортированного плода готовят суспензию на стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:10 и вводят морской свинке подкожно с внутренней стороны бедра в объеме 1 мл.

Из плаценты и плодовых оболочек, предварительно обработанных тампонами, смоченными дезинфицирующим раствором, и подсушенных сухими стерильными тампонами, вырезают кусочки размером 0,5 х 0,5 см, фламбируют на пламени горелки, растирают в ступке со стерильным песком и заливают физиологическим раствором в соотношении 1:10. Полученную суспензию вводят морской свинке в объеме 1 мл.

Содержимое гигром, бурс вводят морской свинке подкожно в объеме 0,2 — 0,3 мл. При этом необходимо учитывать возможность гибели животного от сопутствующей микрофлоры, особенно стрептококков.

Пробы молока центрифугируют 30 мин. при 3000 об./мин. Морской свинке вводят подкожно 2 — 3 мл материала из верхнего слоя (сливки) и осадка молока после центрифугирования.

3.5.3. На 15, 25 и 40-е сут. после заражения у морских свинок берут кровь в количестве 1 — 2 мл из ушной вены путем надреза или из сердца — путем пункции. Сыворотку крови исследуют в пробирочной РА в разведениях от 1:10 до 1:80.

При положительной реакции агглютинации в разведении 1:10 и выше морских свинок убивают. В случае необходимости получения культуры возбудителя материал от них исследуют бактериологически. Высевы делают пастеровскими пипетками в одну пробирку бульона и две пробирки агара из паховых, парааортальных лимфатических узлов (правых и левых), селезенки (2 высева), печени и костного мозга. Посевы культивируют, как описано в подпунктах 3.4.3 и 3.4.4.

При отрицательной РА у морских свинок в указанные выше сроки биопробу считают отрицательной, подопытных животных убивают, бакисследование не проводят.

3.5.4. При выделении культуры бруцелл на питательных средах из исходного материала биологическое исследование по данной экспертизе прекращают, а ранее зараженных морских свинок убивают без бакисследования.

3.6. Результат исследования на бруцеллез считают положительным при выделении культуры возбудителя или при получении у морской свинки положительной РА в разведении сыворотки крови 1:10 и выше, если из исходного материала культура не выделена.

При положительных результатах бактериоскопии и отрицательных результатах бактериологического исследования и биопробы материал считают подозрительным на бруцеллез. При сохранении патматериала или возможности взятия нового (кровь, молоко, моча и др.) исследование проводят методом полимеразной цепной реакции. По ее результатам делают заключение о заболевании животных бруцеллезом.

— бактериологического — до 1 мес.;

3.8. В ветеринарных лабораториях все выделенные культуры бруцелл после их идентификации подлежат уничтожению путем автоклавирования при 1,5 атм. в течение 1 ч.

3.9. При необходимости определения вида бруцелл выделенные от животных культуры направляют в республиканские, краевые, областные ветеринарные лаборатории или ветеринарные научно-исследовательские учреждения, в которых имеются лаборатории или отделы, занимающиеся изучением бруцеллеза животных и имеющие разрешение органов здравоохранения на работу с микроорганизмами второй группы.

4.1. Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных в реакции агглютинации (РА) в пробирках, реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК), реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД), пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба — РБП) и в молоке коров — кольцевой реакции (КР) и других реакциях, утвержденных в установленном порядке.

4.2. Постановка и учет результатов реакции агглютинации (РА) в пробирках

4.2.1. Реакцию агглютинации в пробирках с бруцеллезным антигеном применяют при диагностике бруцеллеза у крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), овец, коз, лошадей, верблюдов, оленей (маралов), собак, пушных зверей и морских свинок.

4.2.2. Компоненты реакции агглютинации:

— испытуемые сыворотки крови (см. п. 2.3.1);

— позитивная бруцеллезная сыворотка, изготовленная биопредприятием;

— негативная сыворотка (сыворотка крови здоровых животных из опыта или консервированная), изготовленная биопредприятием или полученная в лаборатории;

— антиген бруцеллезный единый для РА, РСК и РДСК (см. Прил. N 2, п. 6);

— 0,5%-ный фенолизированный раствор хлорида натрия. При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов, собак, пушных зверей и морских свинок для разведения испытуемых сывороток и антигена используют фенолизированный физиологический раствор хлорида натрия (0,85%-ный); при исследовании крови овец и коз — 5%-ный и оленей (маралов) — фенолизированный 10%-ный раствор хлорида натрия (см. Прил. N 2, п. 1).

4.2.3. Постановка реакции агглютинации

Реакцию агглютинации проводят в серологических пробирках в объеме 1 мл в четырех разведениях:

— при исследовании сывороток крови овец, коз, оленей (маралов) и собак — 1:25, 1:50, 1:100 и 1:200;

— крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов — 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400;

— пушных зверей и морских свинок — 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80.

При массовых исследованиях допускается постановка реакции в первых двух разведениях.

Компоненты реакции вносят индивидуальными мерными пипетками (дозаторами) или групповыми дозаторами Флоринского.

Для исследования каждой испытуемой сыворотки крови требуется 5 пробирок. В пробирках первого ряда делают исходное разведение. Для этого сыворотку крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов берут в дозе 0,1 мл, вносят в пробирку, добавляют к ней 2,4 мл соответствующего раствора хлорида натрия, смешивают и получают разведение сыворотки 1:25. Сыворотку крови овец, коз, оленей (маралов) и собак берут в дозе 0,2 мл и добавляют 2,3 мл соответствующего раствора хлорида натрия (разведение 1:12,5), а сыворотку крови пушных зверей и морских свинок берут в дозе 0,3 мл и добавляют 1,2 мл соответствующего раствора хлорида натрия (разведение 1:5). Таким образом делают исходное разведение испытуемых сывороток в пробирках первого ряда штатива (по 10 проб в ряду).

После приготовления исходного разведения сывороток в первом ряду в пробирки третьего, четвертого и пятого рядов вносят по 0,5 мл соответствующего раствора хлорида натрия. Затем из пробирок первого ряда при помощи группового дозатора Флоринского или индивидуальных пипеток-дозаторов переносят в пробирки второго и третьего рядов по 0,5 мл исходного разведения сывороток (1:25; 1:12,5 или 1:5). В пробирках третьего ряда сыворотки смешивают, по 0,5 мл этого разведения переносят в пробирки четвертого ряда и так же из пробирок четвертого ряда — в пятый. Из пробирок пятого ряда 0,5 мл жидкости удаляют. Таким образом делают последовательные двукратные разведения сывороток.

После этого в каждую пробирку второго, третьего, четвертого и пятого рядов с разведенными сыворотками вносят при помощи группового дозатора Флоринского или другого дозирующего устройства по 0,5 мл антигена, предварительно разведенного 1:10 соответствующим раствором хлорида натрия. После добавления антигена разведение сыворотки в каждой пробирке удваивается и, в зависимости от вида исследуемых животных, будет составлять 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400; 1:25, 1:50, 1:100 и 1:200 или 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80.

В пробирки первого ряда бруцеллезный антиген не вносят, они служат контролем качества сыворотки. При наличии хлопьев, фибрина, эритроцитов и посторонних примесей результаты реакции агглютинации не учитывают.

При массовых исследованиях сыворотки разливают индивидуальной микропипеткой (с грушей) или групповыми дозаторами Флоринского в две пробирки в дозах 0,02 и 0,01 мл (сыворотки крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов) или 0,04 и 0,02 мл при исследовании сывороток овец, коз, оленей (маралов) и собак. Затем в каждую пробирку добавляют по 1,0 мл антигена, разведенного соответствующим раствором хлорида натрия 1:20. При этом разведения сывороток будут соответственно 1:50 и 1:100 или 1:25 и 1:50.

При постановке реакции агглютинации одновременно с испытуемыми сыворотками ставят контроли с негативной и позитивной бруцеллезной сыворотками в таких же разведениях.

После добавления к испытуемым и контрольным сывороткам антигена штативы с пробирками встряхивают для смешивания компонентов и помещают в термостат при 37 — 38 °С на 16 — 20 ч, затем выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч и проводят учет реакции.

4.2.4. Учет реакции агглютинации. Результаты реакции учитывают визуально, определяя степень просветления жидкости, внешний вид агглютината (при его наличии) или антигена на дне пробирки до и затем, после легкого встряхивания, оценивают в крестах по следующей схеме:

++++ (4 креста) — полное просветление жидкости, микробные клетки антигена осели на дно пробирки в виде «зонтика», при легком встряхивании «зонтик» разбивается на хлопья и комочки, а жидкость остается прозрачной (100% агглютинации);

+++ (3 креста) — неполное просветление жидкости и хорошо выраженный «зонтик» (75% агглютинации);

++ (2 креста) — неполное просветление жидкости, «зонтик» умеренно выражен (50% агглютинации);

+ (1 крест) — едва заметное просветление жидкости, «зонтик» выражен слабо, при встряхивании заметно небольшое количество хлопьев или комочков (25% агглютинации);

— (минус) — просветления жидкости и образования «зонтика» не наступило, на дне пробирки по центру образуется небольшой осадок микробов антигена в виде точки или пятна. При встряхивании осадок легко разбивается, поднимается вверх в виде косички и равномерно распределяется в жидкости, которая при этом приобретает первоначальную мутность.

За титр антител принимают наибольшее разведение сыворотки, в котором произошла агглютинация на 2 креста (++), что соответствует количеству международных единиц (МЕ) антител в 1 мл сыворотки (например, сыворотка с титром 1:100 содержит 100 МЕ, 1:200 — 200 МЕ и т.д.).

Для более объективной оценки результатов РА в крестах готовят стандарты мутности, соответствующие 75, 50, 25 и 0% просветления жидкости.

В четыре пробирки последовательно наливают 1, 2, 3 и 4 мл антигена, разведенного 1:10. Затем в том же порядке в три первые пробирки добавляют 3, 2 и 1 мл физиологического раствора. В четвертую пробирку раствор не добавляют. После встряхивания пробирок из каждой из них переносят по 0,5 мл в серологические пробирки и добавляют по 0,5 мл физиологического раствора. Полученные стандарты соответствуют 75, 50 и 25% просветления жидкости. В четвертой пробирке просветление отсутствует. Стандарты мутности готовят каждый раз при постановке РА и выдерживают в термостате одновременно с основной реакцией.

При массовых исследованиях в двух разведениях все сыворотки, давшие агглютинацию с оценкой не менее чем на 2 креста (++) в каком-либо из указанных разведений, исследуют повторно в четырех разведениях.

4.2.5. Диагностическая оценка реакции агглютинации

Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сывороткой крови крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), верблюдов и лошадей, не иммунизированных или иммунизированных неагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами (см. Прил. N 2, п. 7), содержащей 200 МЕ антител и выше; овец и коз — 100 МЕ и выше; оленей (маралов) и собак — 50 МЕ и выше; пушных зверей и морских свинок — 10 МЕ и выше.

При выявлении среди не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, а также иммунизированных неагглютиногенными вакцинами крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей, животных, реагирующих только в РА с содержанием антител 50 — 100 МЕ, а среди овец, коз, оленей (маралов), собак — 25 МЕ, считают сомнительно реагирующими и исследуют повторно через 15 — 30 сут. При повышении титров заболевание считают установленным. При сохранении титров на прежнем уровне проводят дополнительные исследования по дифференциации, согласно утвержденным методам.

При выявлении в стадах крупного рогатого скота, ранее иммунизированного против бруцеллеза агглютиногенными вакцинами (см. Прил. N 2, п. 7), животных, реагирующих только в РА с содержанием не выше 200 МЕ антител и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1:10, их повторно исследуют через 15 — 30 сут. в РА, РСК и РИД. При повышении содержания антител в исследуемых сыворотках в РА и (или) РСК или положительной РИД заболевание считают установленным.

При выявлении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, ранее не иммунизированных или иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, животных, положительно реагирующих в РА с содержанием 100 МЕ антител и выше, признают больными. Реакцию считают сомнительной при содержании 50 МЕ антител. Сыворотки крови от таких животных через 15 — 30 сут. исследуют повторно. При получении вновь сомнительного результата животных признают больными бруцеллезом.

При исследовании в РА неиммунизированных баранов-производителей, козлов, пробников и ярок, содержащихся в благополучных по бруцеллезу отарах, где овцы (козы) иммунизированы против бруцеллеза, реакцию считают положительной, а заболевание установленным при содержании в сыворотке крови животных 100 МЕ антител и выше. Реакцию считают сомнительной при наличии 50 МЕ антител. Сыворотки крови от таких животных через 15 — 30 сут. исследуют повторно. При получении вновь сомнительных результатов животных признают здоровыми, а отару — благополучной по бруцеллезу.

В заключении лаборатории о результатах исследования должна быть сообщена диагностическая оценка каждой пробы (положительная, сомнительная, отрицательная) и конечное разведение (титр) сыворотки, в котором получен соответствующий результат, выраженный в международных единицах (например: титр сыворотки крови крупного рогатого скота 1:200 с оценкой 2 — 4 креста — «положительная» 200 МЕ; титр сыворотки 1:100 с оценкой 2 — 4 креста — «сомнительная» 100 МЕ).

Суммарные результаты исследования испытуемых сывороток, серию антигена, срок его годности, а также титр позитивной сыворотки записывают в журнал серологических исследований.

4.3. Постановка и учет реакции связывания комплемента (РСК) и реакции длительного связывания комплемента (РДСК)

4.3.1. Реакцию связывания комплемента применяют при диагностике бруцеллеза у крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), овец, коз, свиней, верблюдов, лошадей, оленей (маралов), собак и пушных зверей.

Реакцию длительного связывания комплемента, как более чувствительную, применяют вместо РСК при исследовании на бруцеллез сывороток крови животных.

4.3.2. Компоненты реакции и их подготовка к работе:

— испытуемые сыворотки крови (см. п. 2.3.1);

— позитивная бруцеллезная сыворотка, изготовленная биопредприятием или полученная от больного бруцеллезом животного;

— негативная сыворотка (сыворотка крови здоровых животных из опыта или консервированная), изготовленная на биопредприятии или полученная в лаборатории.

Испытуемые и контрольные (позитивную и негативную) сыворотки инактивируют в водяной бане в день постановки реакции: для РСК — при 60 — 62 °С в течение 30 мин. (сыворотки крови ослов и мулов — 64 — 65, буйволов — 62 — 64, свиней — 58 — 60 °С); для РДСК — сыворотки крови животных всех видов — при 63 — 64 °С в течение 30 мин.;

— антиген бруцеллезный единый для РА, РСК и РДСК в рабочем титре, указанном биопредприятием-изготовителем (см. Прил. N 2, п. 6);

— комплемент — сыворотка крови морской свинки, лиофильно высушенная, биофабричного изготовления или нативная (свежая или консервированная добавлением 2 — 4% борной кислоты).

Сухой биофабричный комплемент растворяют физиологическим раствором, как указано на этикетке коробки. Берут такое количество ампул (флаконов), в которых содержится необходимое для проведения всего опыта количество комплемента. В каждую ампулу (флакон) вносят физиологический раствор и, не встряхивая, помещают в холодильник на 20 — 30 мин. Растворившийся комплемент осторожно перемешивают путем легкого встряхивания ампул (флаконов), сливают в одну пробирку, смешивают и помещают в холодильник при 4 — 10 °С. Непосредственно перед внесением в пробирки для титрования растворенный или нативный комплемент разводят физиологическим раствором 1:20, а остальной — хранят в холодильнике для постановки главного опыта. Рабочее разведение комплемента также готовят непосредственно перед внесением в пробирки главного опыта;

— гемолитическая сыворотка (гемолизин) — сыворотка крови кролика, гипериммунизированного эритроцитами барана, — для РСК и РДСК в удвоенном титре. Титрование гемолизина проводят при использовании каждой новой серии и по истечении срока годности (см. Прил. N 2, п. 5);

— эритроциты барана — 2,5%-ная от осадка взвесь эритроцитов барана в физиологическом растворе для РСК и РДСК (см. Прил. N 2, п. 3).

Для приготовления гемолитической системы взвесь эритроцитов и раствор гемолизина в рабочем разведении смешивают в равных объемах и при постановке РСК выдерживают в водяной бане при 37 — 38 °С в течение 15 — 20 мин. при периодическом перемешивании, а при постановке РДСК — в холодильнике. При смешивании компонентов раствор гемолизина вливают во взвесь эритроцитов;

— физиологический раствор — 0,85%-ный раствор химически чистого хлорида натрия в дистиллированной воде с рН 6,8 — 7,2 или физиологический раствор, содержащий ионы магния и кальция (см. Прил. N 2, п. 2). Последний в обязательном порядке готовят в случае использования нативного комплемента (свежей или консервированной сыворотки крови морской свинки).

Рабочие разведения всех компонентов для РСК или РДСК готовят перед постановкой реакции и при необходимости проверяют их на антикомплементарность и гемотоксичность по следующей схеме:

источник