Бруцеллез окраска по граму

В СССР в настоящее время известны 4 вида бруцелл — Br. abortus, Br. melitensis, Br. suis и Br. ovis.

Микроскопически все 4 вида бруцелл между собой не различимы.

Морфологические свойства бруцелл. Морфология бруцелл несколько варьирует в зависимости от среды, в которой они культивируются (жидкая, плотная, содержащая кровь), давности пересева и других условий. Особенно часто наблюдается это с культурами Br. ovis.

Бруцеллы имеют вид мелких кокков или очень коротких палочек, похожих на овоиды. Br. melitensis имеет размер 0,4—2,2 мкм в длину и 0,4—0,8 мкм в ширину; Br. abortus — 0,4—2,5 мкм в длину и 0,4—0,6 мкм в ширину; Br. suis чаще встречается в виде палочек 0,6—3 мкм в длину и 0,2—0,8 мкм в ширину.

В мазках из патологического материала, например из содержимого сычуга абортированного плода, бруцеллы часто группируются кучками, располагаясь в одной плоскости. В таких скоплениях бруцеллы имеют вид микрококков, а клетки, лежащие отдельно в этом же мазке, — коротких палочек.

Бруцеллы спор не образуют. В особых условиях, чаще в организме животных, образуют капсулы. Хорошо окрашиваются всеми анилиновыми красками и по Романовскому.

Методы окраски бруцелл. Для окраски бруцелл чаще применяют 2 способа — по Козловскому и по Граму. Также рекомендуется окраска их по Кюстеру.

Окраска по Козловскому. Метод Козловского основан на свойстве бруцелл более медленно воспринимать некоторые краски, в частности растворы сафранина, по сравнению с посторонними микроорганизмами, наиболее часто встречающимися в обследуемых материалах. По Козловскому очень показательно окрашиваются присылаемые в лабораторию мазки, приготовленные из выделений матки, плаценты, сычуга и других органов абортированного плода, плодных оболочек, гноя и др. Бруцеллы окрашиваются в красный цвет, а другие микроорганизмы — в зеленый. При исследовании выделений из матки бруцеллы могут быть обнаружены внутри лейкоцитов. Этот метод пригоден также для окраски музейных культур.

Окраску по Козловскому производят следующим образом. Нетолстый мазок из культуры или отпечаток из органов на предметном стекле высушивают на воздухе или в термостате, затем фиксируют над пламенем горелки. Покрывают 2%-ным водным раствором сафранина и подогревают при движении стекла над пламенем горелки в течение 1,5—2 мин, до появления пузырьков газа. Затем мазок промывают водой, окрашивают 0,75—1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 20—30 с, промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. Малахитовую зелень можно заменить 1%-ным раствором бриллиантовой зелени или метиленовой синьки.

Окраска по Граму. Приготовленные и фиксированные мазки таким же образом, как и в предыдущем случае, покрывают фильтровальной бумагой, увлажненной изотоническим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой. Наносят на 2 мин кристаллвиолет или генцианвиолет так, чтобы краска не заходила за края бумаги, и равномерно распределяют по поверхности стекла. Затем удаляют бумагу, наносят на 2 мин свежеприготовленный люголевский раствор, а по истечении указанного срока раствор смывают и на 2 мин покрывают мазок йодированным спиртом (2 мл 10%-ного спиртового раствора йода и 98 мл 96%-ного этилового спирта). После этого мазок промывают и докрашивают в течение 2 мин 1%-ным водным раствором сафранина или фуксином Циля, разведенным 1 : 10 дистиллированной водой. Затем мазок вновь промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. Окраска бруцелл по Граму является одним из лучших методов.

Окраска по Кюстеру. Приготовленный тонкий мазок из материала, разведенного изотоническим раствором хлорида натрия, высушивают и фиксируют над пламенем горелки. Готовят ex tempore щелочной раствор сафранина: берут 1,5 мл нормального раствора КОН (5,6 г КОН на 100 мл дистиллированной воды) и добавляют 5 капель 3%-ного водного раствора сафранина. Красят мазок щелочным раствором сафранина в течение 1 мин и смывают водой. Затем на мазок наносят 0,05%-ный раствор серной кислоты на 15 мин (протрава). Мазок тщательно промывают водой и красят в течение 15—20 с 3 %-ным водным раствором метиленовой синьки, промывают водой и высушиваю фильтровальной бумагой. Бруцеллы окрашиваются в красный цвет, остальные микроорганизмы — в синий.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

источник

Бруцеллез – зоонозное инфекционно-аллергическое заболевание, характеризующееся длительной лихорадкой, поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой и других систем организма со склонностью к затяжному, хроническому течению.

Бруцеллез как заболевание известно давно, со времен Гиппократа, но научное его изучение началось в 60-х годах XIX века. В то время оно получило название «средиземноморская или мальтийская лихорадка». В 1886 г. Д. Брюс обнаружил возбудителя заболевания в мазках из селезенки погибшего от бруцеллеза больного, а в 1887 г. выделил чистую культуру возбудителя (впоследствии этот возбудитель был назван В. melitensis). В 1897 г. датские ученые Б. Банг и Б. Стрибольт выделили сходные микроорганизмы из околоплодной жидкости при инфекционных абортах у коров (B. abortus bovis). В 1914 г. Д. Траум обнаружил аналогичных возбудителей у свиней и назвал их B. suis. Позднее были выделены другие виды бруцелл: в 1957 г. – B. neatomae (от кустарниковых крыс), в 1960 г. – B. canis (от гончих собак), а в 1970 г. – B. ovis (от барана).

Виды – наиболее патогенные для человека – В. melitensis, B. abortus, B. suis.

Мелкие кокковидные палочки размерами 0,5-0,7×0,6-1,5 мкм, грамотрицательные, в мазках располагаются беспорядочно, неподвижны, спор не образуют, свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу.

Строгие аэробы. Оптимальные условия культивирования: температура – 37 0 С, рН – 6,8-7,2. Особенностью бруцелл бычьего типа является их потребность в повышенном содержании в атмосфере углекислого газа (5-10% СО 2 ). Характерен медленный рост бруцелл – первые генерации появляются через 1-3 недели и более. При пересеве лабораторных культур рост наблюдается через 1-2 дня. Требовательны к питательным средам: хорошо растут на печеночном, сывороточном или кровяном агаре. В жидкой среде наблюдается рост в виде диффузного помутнения. На плотных питательных средах бруцеллы образуют перламутровые мелкие выпуклые гладкие колонии с нежной зернистостью (S-форы). Возможна диссоциация в R-формы.

Биохимическая активность.
Выражена слабо. Ферментируют глюкозу и арабинозу до кислоты без газа. Восстанавливают нитраты, разлагают белки с образованием Н 2 S, индол не образуют.

Разделение на виды основано на биохимических и культуральных различиях

Рост на средах с красителями

У бруцелл выявлено до 15 антигенных фракций: родовые и видовые поверхностные антигены.

1. Выделяют два соматических антигена – А и М, причем М-антиген доминирует у В. melitensis, А-антиген преобладает у B. abortus и B. suis.

2. Третий – L(Vi)-антиген – поверхностно расположенный капсульный антиген вирулентности, термолабильный, имеет сходство с Vi-антигеном сальмонелл.

Токсины. Бруцеллы обладают эндотоксином (ЛПС КС), имеющим высокую инвазивную способность.

Ферменты – гиалуронидаза и нейроминидаза.

Структурные и химические компоненты клетки: пили I порядка и белки клеточной стенки (адгезивные свойства), капсула.

Считают, что бруцеллы обладают высокой инвазивностью: могут проникать в организм человека через неповрежденные кожные и слизистые покровы.

Также являются факультативными внутриклеточными паразитами.

Бруцеллы довольно устойчивы во внешней среде:

— В воде и влажной почве – они могут сохраняться до 5 месяцев;

— Они устойчивы к низким температурам и в замороженном мясе выживают до 5 месяцев.

Чувствительны к повышенной температуре (до 60 0 С – погибают за 30 минут, кипячение – мгновенно), действию дезинфиктантов (3% раствор хлорной извести, 1% хлорамин, 2% формалин убивают их за 5 минут), антибиотикам (стрептомицину, тетрациклину, рифампицину).

Основной резервуар и источник инфекции – больные домашние животные: овцы, козы, свиньи, КРС.

— Фекально-оральный (путь – алиментарный – большую опасность представляет сырое молоко и молочные продукты, не подвергающиеся в процессе приготовления тепловой обработке, например, сыр, брынза);

— Контактный (путь – прямой контактный – при попадании возбудителя на поврежденные кожные или слизистые покровы при уходе за больными животными);

— Аэрогенный (путь – воздушно-пылевой – описан при вдыхании воздушно-пылевой смеси, содержащей инфицированные частицы шерсти, навоза, земли во время уборки помещения).

Для бруцеллеза свойственен выраженный профессиональный характер заболевания!

Инкубационный период – 1-4 недели (может длиться до 2-3месяцев).

Патогенез и клинические особенности.

Бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки или кожные покровы, не оставляя никаких изменений в области входных ворот. Лимфогенным путем возбудители заносятся в региональные лимфоузлы и подвергаются незавершенному фагоцитозу. С макрофагами возбудители проникают в кровоток и диссеминируют в печень, селезенку, почки, костный мозг, суставы, эндокард. В пораженных органах образуются очаги некроза, окруженные инфильтратами. Появляются признаки очаговых поражений со стороны опорно-двигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой и других систем. Внутри фагоцитов бруцеллы способны формировать L-формы и длительно персистировать в организме. Переход в исходные формы обуславливает рецидив болезни.

Постинфекционный иммунитет – гуморальный (образуются неполные антитела) и клеточный, нестойкий, нестерильный. Формируется ГЗТ.

Бруцеллы могут быть выявлены непосредственно в патологическом материале и объектах внешней среды с помощью прямой или непрямой реакции иммунофлюоресценции.Ее используют также для идентификации выделенной культуры.

Бруцеллы в острую фазу болезни выделяют из крови при посеве на питательный бульон. Кроме того, делают посевы пунктатов костного мозга и лимфатического узла, а также стерильно взятой мочи. Выделенную культуру идентифицируют по типичной морфологии бактерий и колоний, положительной реакции агглютинации на стекле с поливалентной бруцеллезной сывороткой. Для видовой идентификации используют признаки видов и биоваров бруцелл. Серодиагностику проводят в развернутой реакции агглютинации (р. Райта) и пластинчатой реакции агглютинации (р. Хедльсона), реже ставят РНГА, а также р. Кумбса для выявления

Кожно-аллергическую пробу (по Бюрне) применяют для выявления ГЗТ к бруцеллам. Положительная реакция наблюдается как у больных, так и у привитых живой бруцеллезной вакциной

Проводят вакцинацию по эпидпоказаниям живой вакциной из аттенуированного штамма B. abortus.

Специфическое лечение – противобруцеллезный иммуноглобулин, для лечения хронических форм заболевания применяется убитая бруцеллезная вакцина.

источник

Возбудители бруцеллеза (Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis и Brucella canis) высоко контагиозны и работа с ними проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций. Постановку серологических реакций и аллергических проб для диагностики бруцеллеза производят соответственно в обычных микробиологических лабораториях и больничных условиях.

Главным резервуаром бруцелл являются домашние сельскохозяйственные животные, а также другие виды животных, от которых человек заражается преимущественно контактным или контактно-бытовым, реже алиментарным путем. Клинические проявления бруцеллеза многообразны, поражаются лимфатическая, сосудистая, гепато-лиенальная системы и особенно опорно-двигательный аппарат Методы микробиологической диагностики бруцеллеза представлены в схеме 7.

Схема 7. Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Материал: кровь, костный мозг, моча, испражнения, грудное молоко у кормящих женщин

Серологический метод— постановка РА с сывороткой крови больного (реакция Райта, ставят в начале 2-й недели болезни, диагностический титр 1:200 и выше), ускоренной РА на стекле (реакция Хеддльсона), РСК и ИФА.

Диагностикумом в реакции Райта и Хеддльсона является взвесь убитых бруцелл с красителем генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым.

Реакцию агглютинации Хеддльсона ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят микропипеткой неразведенную исследуемую сыворотку в количествах 0,08; 0,04; 0,02; 0,01 и 0,02 мл, добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума, кроме последней дозы, в которую вносят 0,03 мл ФР (контроль сыворотки). Контролем диагностикума является смесь из 0,03 мл антигена и 0,03 мл ФР. Все капли перемешивают стеклянной палочкой или бактериологической петлей и после легкого покачивания стекла наблюдают за появлением мелкозернистого окрашенного агглютината. Отсутствие агглютинации во всех пробах сыворотки оценивается как отрицательная реакция, наличие агглютинации в 1-й пробе (0,08 мл сыворотки) — сомнительная, во 2-й (0,04 мл) — слабоположительная, в 3-й или 4-й пробах (0,02-0,01 мл) — положительная, во всех пробах — резко положительная реакция. Поскольку реакция агглютинации Хеддльсона иногда бывает положительной у здоровых людей за счет нормальных антител, она обязательно подтверждается реакцией Райта.

РИФ, РНГА, РСК и особенно ИФА более чувствительны, чем реакция агглютинации. Для ранней диагностики бруцеллеза особую ценность имеет ИФА, позволяющий выявить в сыворотке больных антибруцеллезные антитела класса IgM,которыев отличие от IgG появляются в ранние сроки болезни, свидетельствуя о свежем инфицировании.

Аллергический метод –постановка внутрикожной аллергической пробы Бюрне с 15-20 дня заболевания. Учет реакции проводится через 24-48 часов, положительной считается реакция в случае появления на месте введения аллергена (бруцеллина) болезненности, гиперемии и инфильтрации кожи диаметром 3 см и более. Положительная аллергическая реакция на бруцеллин сохраняется в течение длительного времени после перенесенного бруцеллеза, а также после прививки.

Бактериологический метод— посев крови для выделения гемокультуры в 2 флакона с 50 мл печеночного или асцитического бульона (рН 7,1-7,2) или МПБ с добавлением 1 % глюкозы, 2 % глицерина и антифаговой сыворотки (для инактивации бруцеллезного бактериофага) в первые дни болезни при наличии лихорадки. При отрицательных результатах исследование повторяют, т.к. бактериемия наблюдается в течение 1 года и более.

Один флакон выращивают в обычных аэробных условиях, другой — в герметично закрытом сосуде с 10 % углекислого газа (или СО₂-инкубаторе) при температуре 37 0 С до 1 месяца, делая пересевы на скошенный печеночный агар или эритрит-агар каждые 4-5 дней. На жидких средах бруцеллы растут с образованием легкого помутнения и небольшого слизистого осадка, на плотных средах в виде округлых, диаметром до 5 мм, серовато-белых, блестящих, прозрачных с янтарным оттенком в проходящем свете колоний. Типичные колонии пересевают на скошенный агар и идентифицируют выделенную культуру до уровня вида.

Выполняются также посевы исследуемого материала в желток свежего куриного яйца или в желточный мешок куриного эмбриона с последующей их инкубацией в течение 5 дней при 37 0 С и пересевом содержимого желточного мешка на плотные и жидкие питательные среды для выделения чистой культуры бруцелл.

Бруцеллы идентифицируют на основании изучения морфологических (рис. 13 — грамотрицательные коккобактерии), культуральных, биохимических (они не ферментируют уг-

Рис. 13. Возбудитель бруцеллеза (Brucella melitensis). Окраска по Граму. Мелкие грамотрицательные коккобактерии.

леводы, не свертывают молоко и не разжижают желатину, выделяют сероводород), антигенных свойств (постановка РА с моноспецифическими сыворотками против антигеновА, М, R), чувствительности к специфическому бактериофагу и бактериостатическому действию анилиновых красителей (табл. 8).

Таблица 8.Дифференциация основных видов бруцелл

Признак	Вид бруцелл
Br. melitensis	Br. abortus	Br. suis
Условия культивирования	аэробные	10% СО₂	аэробные
Рост на средах с красителями:
фуксином 1:50000	+	+	—
тионином 1:25000	+	—	+
пиронином 1:200000	+	+	—
Образование Н₂S	—	±	±
РА с монорецепторными сыворотками
А	±	±	+
М	±	±	±
Чувствительность к бруцеллезному фагу	—	+	±

. Обозначения: «-« — отрицательная; «+» — положительная; «±» — непостоянная реакции.

Самостоятельная работа студентов

Серологический метод.

· Реакция Хеддльсона (РA на стекле) – самостоятельная работа. Ингредиенты: бруцеллёзный диагностикум, сыворотка больного, физиологический раствор. Реакция ставится на стекле посхеме.. Реакция считается положительной при появлении хлопьев в каплях, в которые внесено 0,02 или 0,01 мл сыворотки больного,

· Реакция Pайта (развернутая РА) с сывороткой крови больного с подозрением на бруцеллез и бруцеллёзным диагностикумом (демонстрация). Диагностический титр I:100.

· реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с сывороткой крови больного с подозрением на бруцеллез и эритроцитарным бруцеллезным диагностикумом (демонстрация). Диагностический титр 1:100.

· Реакция связывания комплемента (РСК) с сывороткой крови больного с подозрением на бруцеллез.

· Иммуноферментный анализ (ИФА) с сывороткой крови больного с подозрением на бруцеллез

2.Специфическая профилактика и лечение бруцеллёза:

· живая вакцинадля профилактики,

· убитая вакцинадля лечения,

· сыворотки бруцеллезные,агглютини рующие диагностические

· диагностикум бруцеллезныйдля постановки реакций Райта и Хеддльсона с целью выявления антител в крови больных,

· бруцеллин—аллерген для постановки внутрикожных аллергических проб

Последнее изменение этой страницы: 2016-04-23; Нарушение авторского права страницы

источник

Цель занятия:Ознакомить студентов с правилами отбора проб материала от животных, его упаковки и пересылки в лабораторию, а также с методами бактериологических и серологических исследований материала на бруцеллез.

1. Приготовить мазки из патологического материала;

3. Окрасить по Козловскому;

4. Просмотреть под микроскопом, микрокартину зарисовать в тетради;

5. Поставить розбенгал-пробу;

6. Поставить кольцевую реакцию с молоком.

Материалы и оборудование:Растворы красителей для окраски по методу Козловского, сыворотки крупного рогатого скота — позитивная (бруцеллезная) и нормальная в пробирках по 1 мл и те же сыворотки под разными номерами (шифрами) — испытуемые, бруцеллезный антиген для розбенгал-пробы и антиген бруцеллезный для кольцевой пробы с молоком; молоко коровье, свежее — отдельно пробирки с молоком от здоровых животных и пробирки с молоком от коров, больных бруцеллезом (содержащие антитела), по 2 мл в каждой; пробирки соответственно помечены № 1 и 2; пипетки градуированные стерильные емкостью 1 и 0,1 мл (количество пипеток в зависимости от количества студентов в группе); пластины с луночками для постановки розбенгал-пробы, пробирки со взвесью бруцелл (антиген) и в смеси с бактериями других видов в физрастворе (сальмонеллы или мезентерикус), вакцинный штамм микроба сибирской язвы и пробирки по 10 мл с физраствором. Для демонстрации необходимы таблицы (морфология бруцелл); пробирки с агаровой культурой бруцелл, залитые парафином (вакцинный штамм); микроскопические препараты — мазки, окрашенные по методу Козловского и по Граму; в мазках — бруцеллы в смеси с другими бактериями; пробирки с положительной и отрицательной кольцевой реакцией с молоком; биопрепараты.

Классификация:

Секция – 4, грамотрицательные аэробные палочки и кокки.

Виды – Br. melitensis (выделен от коз и овец), Br. abortus (выделен от крупного рогатого

скота), Br.suis (свиной), Br. ovis (бараний вид), Br. canis (собачий) и Br. neotoma

Бруцеллы— микроорганизмы, вызывающие инфекционную, хронически протекающую болезнь животных (и человека) — бруцеллез. Наибольшее значение в патологии бруцеллеза животных и человека имеют бруцеллы первых трех видов. Бруцеллез животных преимущественно протекает бессимптомно. Диагностика этой болезни основывается на показаниях результатов серологических, бактериологических, а также аллергических методов исследования с учетом клинических признаков болезни — аборты, бурситы, орхиты, эпидидимиты, эндометриты.

Патологический материал. Для бактериологического исследования на бруцеллез (при жизни животного) в лабораторию направляют: абортированный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей, желудок плода, перевязанный с двух концов лигатурой, кусочки печени и селезенки плода. Молоко берут от коров в стерильные пробирки по 10—15 мл из каждой доли вымени (последние порции), у овец и коз — путем пункции цистерны вымени посредством стерильного шприца с иглой. Для исследования молоко отсылают свежим (в день взятия пробы); если это не представляется возможным, то его консервируют (лучше сухой борной кислотой из расчета 0,1 г на 10 мл молока). При убое самцов (баранов и др.) исследуют пораженные ткани органов — семенники с придатками.

Бактериологическая диагностика бруцеллеза проводится по общепринятому принципу — микроскопия, высев на питательные среды для выделения и изучения чистой культуры, биопроба (заражение морских свинок).

Микроскопия. Из каждой пробы патматериала готовят два мазка-отпечатка из тканей органов или два мазка из жидкого материала (истечения), высушивают, фиксируют над пламенем. Один препарат окрашивают по Граму, другой — специальным методом (по Козловскому; Шуляку — Шину или Стампу). Мазки, приготовленные из осадка молока (сливок), после центрифугирования перед окраской следует обезжирить смесью Никифорова. Бруцеллы — мелкие, палочко- или кокковидной формы бактерии, длиной 0,6—1,5 мкм, в диаметре — 0,3—0,5 мкм; неподвижные, спор не образуют, располагаются в мазке изолированно, попарно или небольшими скоплениями, кучками.

Грамотрицательные.

Окраска по методу Козловского. Фиксированные препараты окрашивают свежеприготовленным 2 %-ным водным раствором сафранина при подогревании до появления паров (2 минут). Мазок быстро промывают водой и докрашивают 1 %-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 1 минут, затем его промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют: бруцеллы — красные, остальные микробы — зеленые.

Культуралъные свойства. Для выделения бруцелл делают посевы на специальные питательные среды: мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), печеночно-глюкозно-глицериновый агар и бульон (ПГГА, ПГГБ), картофельный агар, эритрит-агар или сывороточно-декстрозный агар и др.

Посев исследуемого материала в жидкие и на плотные питательные среды проводят пастеровской пипеткой в несколько пробирок или чашек Петри. При исследовании молока полагается предварительно его центрифугировать (300 об/мин 30 минут). Затем осадок высевают на агаровую среду в чашках Петри, содержащую бактериостатическое вещество, например в среду Козловского (МППА с глюкозой и краской — генциан фиолетовый или малахитовая зелень). Засеянные среды помещают в термостат при +37—38 °С на 30 дней. Следует учитывать что В. abortus в первых генерациях растет при пониженном содержании 0₂. Поэтому половину посевов из пат.материала от крупного рогатого скота культивируют при обычных условиях, другую половину (и все посевы при выделении В. ovis) — в атмосфере, содержащей 10—15 % углекислоты (в эксикаторах). Все посевы просматривают через сутки, затем через каждые 3—4 дня. Рост бруцелл проявляется через 7—10—30 и даже 40 дней. По мере адаптации к питательным средам рост культуры может появиться на 2—3-й день. На плотных питательных средах рост бруцелл проявляется мелкими прозрачными выпуклыми, округлыми, блестящими колониями с гладкой (S-формы) поверхностью и голубоватым оттенком (встречаются и R-формы). При более длительном культивировании колонии мутнеют, с появлением пигмента — темнеют, сливаются. В жидких питательных средах рост бруцелл проявляется вначале равномерным помутнением и образованием пристеночного кольца голубоватого оттенка; впоследствии образуется незначительный осадок. При обнаружении роста из типичных колоний готовят мазки, окрашивают специальными методами и просматривают под микроскопом. Затем пересевают на плотную питательную среду и культивируют при тех же условиях.

Культуры идентифицируют по тинкториальным, морфологическим, культуральным свойствам. Кроме того, ставят РА на предметном стекле с позитивной бруцеллезной сывороткой, разведенной 1:50 и 1:2 (для выявления слабо агглютинирующих культур). Первичную культуру Br.ovis надлежит подвергнуть серологической идентификации — чистой выделенной культурой гипериммунизируют кроликов, затем их сыворотку исследуют в РДСК с антигеном Br.ovis (овисный антиген).

Биопроба осуществляется заражением морских свинок (параллельно с посевами материала на питательные среды), которых предварительно подвергают серологическому контролю посредством РА (должен быть отрицательный результат в разведении сыворотки 1:5). Суспензию из ткани органов, содержимого желудка плода (1:10 в физрастворе) в дозе 1 мл, осадка после центрифугирования проб молока с добавленными сливками из верхнего слоя — 2—3 мл вводят морской свинке подкожно с внутренней стороны бедра. Свинка не погибает. На 15— 25-й и 40-й день после заражения у свинок исследуют пробы сывороток крови пробирочным методом РА в разведениях от 1:10 до 1:80. При получении положительных результатов морских свинок убивают и из органов делают посевы на питательные среды с целью выделения культуры бруцелл. При выделении культуры возбудителя или получении положительного результата РА в титре 1:10 и выше лабораторный диагноз бруцеллеза считают установленным.

Все выделенные культуры бруцелл после их идентификации уничтожают автоклавированием при 1,5 атм в течение 1 часа. При необходимости определения вида бруцелл выделенную культуру направляют в областную (или республиканскую) лабораторию или в НИИ, имеющие разрешение на работу с особо опасными инфекциями, где и определяют ферментативную (биохимическую) активность чистой культуры и учитывают дифференциальные признаки бруцелл.

Биохимические свойства. Желатину и свернутую сыворотку бруцеллы не разжижают, индол не образуют, сероводород и аммиак образуют в зависимости от вида и штамма. Молоко не свертывают, образуют каталазу. Ферментируют глюкозу, арабинозу, декстрозу, левулезу и др. с образованием кислоты.

Для дифференциации видов бруцелл используют чистые культуры (в S-форме). Наличие диссоциации культуры бруцелл определяют путем реакции термоагглютинации, пробы с флавакридином, окраской колоний кристаллвиоле-том. Посредством последнего метода устанавливают: если после внесения пастеровской пипеткой в культуру, выросшую в чашке Петри, краски в разведении 1:2000, приготовленной ex tempore (ее отсасывают из чашки через 5 минут), колонии, просматриваемые под лупой, окрашены в темно-фиолетовый цвет,— культура диссоциированная. Если же колонии зеленого цвета или светло-желтого, значит, культура недиссоциирована (S-форма). Из типичных S-форм колоний микроорганизмы пересевают на скошенный МППА (в пробирках) и выросшую культуру идентифицируют по показателям.

Серологическая диагностика бруцеллеза осуществляется посредством пробирочной РА, РСК, РДСК, розбенгал-пробы (РБП) с сыворотками крови исследования молока с помощью кольцевой реакции (КР), ИФА, ПЦР.

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

источник

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики бруцеллеза/

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы схема микробиологической диагностики бруцеллеза, таблицы (морфология бруцелл), микроскопические препараты – мазки, окрашенные по методу Козловского и по Граму, пробирки с положительной и отрицательной кольцевой реакцией с молоком, биопрепараты, пробирки с культурой бруцелл (вакцинный штамм) на питательных средах (мясо-пептонный печеночный бульон – МППБ, мясо-пептонный печеночный глюкозо-глицериновый агар – МППГГА, МППБ и МППГГА с 10 % глюкозой и 2-3 % глицерином), труп морской свинки, павшей после заражения вакцинным штаммом бруцелл, бруцеллезная сыворотка, бруцеллезный антиген, взвесь бруцелл, кишечной палочки.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Виды возбудителя бруцеллеза, морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические особенности бруцелл.

2. Схема бактериологической диагностики бруцеллеза.

3. Серологическая диагностика бруцеллеза.

4. Специфическая профилактика бруцеллеза.

1. Классификация возбудителя

Виды: Вг. melitensis(овец и коз)

Вг. abortus (крупного рогатого скота)

Вг. suis (4 биовар) бруцеллез северных оленей

Вг. ovis (инфекционного эпидидимита баранов)

Вг. neotomaе (кустарниковых крыс).

2. Общая характеристика болезни:

Бруцеллез – хроническая инфекционная болезнь, у животных протекает в скрытой форме, происходят массовые аборты, задержание последа, метриты и др.

— многие виды с.-х. и диких животных, включая человека.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

— возбудитель в организм проникает алиментарным и половым путями,

— бруцеллы вначале размножаются в ближайших лимфатических узлах, далее проникают во внутренние органы, инфекция принимает генерализованный характер. Наиболее благоприятную среду для размножения бруцеллы находят в беременной матке, что приводит к эндометриту, нарушению питания плода и аборту. Плодные оболочки многих животных содержат эритриол – фактор роста бруцелл,

— факторами вирулентности у бруцелл являются эндотоксины и ферменты патогенности — гиалуронидаза, каталаза, уреаза.

Методы диагностики (рис. 101):

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

— абортированный плод с оболочками, желудок, печень, почки плода, молоко и др.

Рис. 101. Схема лабораторной диагностики бруцеллеза

а) методы окраски: по Граму, по Козловскому

— 2%-ный раствор сафранина (при подогревании) – 2 мин;

— 2%-ный раствор малахитовой зелени – 2 мин.

Бруцеллы окрашиваются в красный цвет; ткани, форменные элементы, другие бактерии – в зеленый.

б) микрокартина: мелкие коккобактерии (0,3-0,6 мкм) или мелкие палочки (0,6-2,5 мкм), располагаются одиночно, парами и небольшими группами (рис 102);

а) посев на питательные среды – мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон и агар (МГГБ и МГГА) с 10%-ной глюкозой и 2-3%-ным глицерином.

б) особенности выделения возбудителя:

— выращивают в атмосфере 10-15 % СО₂ (Вг. abortus, Вг.ovis в первой генерации);

— остальные виды бруцелл – аэробы;

— оптимальная температура 37°С;

— срок культивирования от 15 до 30 дн.

— на жидких средах – равномерное помутнение, пристеночное кольцо, незначительный осадок;

— на плотных средах – мелкие, прозрачные с ровным краем колонии.

— сахаролитические свойства выражены слабо;

Рис. 102. Возбудитель бруцеллеза из чистой агаровой культуры. Увеличение, х900

— протеолитические свойства – молоко не свертывают, желатин не разжижают, сероводород образуют Вг.suis, в меньшей степени Вг.abortus

— заражают подкожно морских свинок, белых мышей.

Дифференциацию проводят по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, по бактериостатическому действию красок, РА и вирулентности.

— используют РА, РСК, РДСК, РИД-ОПС (РИД с ОПС-антигеном), кольцевую пробу с молоком, Роз-Бенгал пробу.

— для диагностики бруцеллеза у свиней используют аллерген бруцеллин ВИЭВ, который вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины,

— у животных, больных бруцеллезом, на месте введения аллергена развивается воспалительная реакция.

5. Биопрепараты для специфической профилактики:

— для крупного рогатого скота – живые вакцины из штамма 19 и штамма 82;

— для мелкого рогатого скота – живая вакцина из штамма 19.

6. Биопрепараты для специфической терапии:

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные особенности бруцелл на плотной и жидкой питательных средах. Сравнить культуральные свойства со свойствами других видов бактерий.

2. Приготовить препараты-мазки из органов морской свинки, зараженной вакцинным штаммом возбудителя бруцеллеза. Окрасить по Козловскому и провести микроскопию. Провести дифференциацию бруцеллы от других микроорганизмов.

3. Приготовить препараты из смешанной бактериальной культуры, окрасить по Граму.

4. Провести постановку пробирочной РА на бруцеллез с сывороткой крови крупного рогатого скота.

5. Провести постановку кольцевой пробы с молоком.

источник

Схема 7. Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Материал: кровь, костный мозг, моча, испражнения, грудное молоко у кормящих женщин

Рис. 13. Возбудитель бруцеллеза (Brucella melitensis). Окраска по Граму. Мелкие грамотрицательные коккобактерии.

Таблица 8.Дифференциация основных видов бруцелл

Признак	Вид бруцелл
Br. melitensis	Br. abortus	Br. suis
Условия культивирования	аэробные	10% СО₂	аэробные
Рост на средах с красителями:
фуксином 1:50000	+	+	—
тионином 1:25000	+	—	+
пиронином 1:200000	+	+	—
Образование Н₂S	—	±	±
РА с монорецепторными сыворотками
А	±	±	+
М	±	±	±
Чувствительность к бруцеллезному фагу	—	+	±

. Обозначения: «-« — отрицательная; «+» — положительная; «±» — непостоянная реакции.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: При сдаче лабораторной работы, студент делает вид, что все знает; преподаватель делает вид, что верит ему. 9096 — | 7219 — или читать все.

193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

В 1886 г. Д. Брюс в селезенке больного, погибшего от мальтийской лихорадки, обнаружил маленькую коккобактерию, которую выделил в чистой культуре и назвал Micrococcus.

В 1896 г. Б. Банг из околоплодной жидкости при аборте коров также выделил коккобактерии. В 1914 г. Ж. Траум выделил подобную палочку от больных свиней. А в 1916 г. Ивенс, изучив все выделенные микроорганизмы, определила их схожесть и в честь Брюса они были названы бруцеллами. В дальнейшем (1953, 1957, 1966) были открыты и другие виды бруцелл. Все они объединены в род Brucella.

В настоящее время бруцеллы подразделяют на виды по признаку их основного хозяина: В. melitensis — болеет мелкий рогатый скот (овцы, козы); В. abortus — болеет крупный рогатый скот; В. suis — болеют свиньи и т. д.

Каждый вид бруцелл подразделяют на биовары: В. melitensis включает 3 биовара; В. abortus — 9 биоваров; В. suis — 5 биоваров. Наиболее патогенным для человека является В. melitensis. B. abortus редко вызывают клиническое проявление заболевания у человека.

Морфология. Возбудители бруцеллеза мелкие 0,6-0,8 × 0,3-0,5 мкм бактерии палочковидной или овоидной формы. Неподвижны. Спор не имеют. Образуют нежную капсулу. Грамотрицательны. В мазке располагаются беспорядочно.

Культивирование. Бруцеллы — аэробы. Прихотливы к питательным средам. Характеризуются замедленным ростом (2-3 нед). Выращивают их на специальных питательных средах: сывороточно-декстрозном агаре, на агаре из картофельного настоя с сывороткой и кровяным агаром (5% овечьей крови), среде «Д», печеночном агаре МПА и МПБ. Растут они при температуре 37° С и рН 6,8-7,2. Некоторые штаммы требуют для роста 5-10% СО₂, особенно при первоначальном выделении. На плотных питательных средах вырастают нежные, мелкие, бесцветные, выпуклые с перламутровым блеском колонии в S-форме. Под влиянием некоторых факторов они могут диссоциировать в R-форму. Под действием антибиотиков у них возникают L-формы. В жидких питательных средах бруцеллы дают равномерную муть. Бруцеллы можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриона.

Дифференцируют виды бруцелл на основании их способности образовывать сероводород и расти на средах с красителями — основным фуксином и тионином (табл. 44).

Таблица 44. Биологические свойства бруцелл

Ферментативные свойства. Бруцеллы расщепляют D-рибозу, D-галактозу, аланин, аспарагин. Некоторые штаммы гидролизуют аминокислоты с образованием аммиака.

Бруцеллы образуют гиалуронидазу, каталазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу и др. Бруцеллы обладают выраженными инвазивными и агрессивными свойствами.

Токсинообразование. Патогенное действие бруцелл определяется, по-видимому, наличием эндотоксина. Кроме того, они обладают аллергенными свойствами.

Антигенная структура. Бруцеллы содержат два соматических антигена А и М. Эти антигены являются видоспецифичными. Они всегда входят в состав микробной клетки, но в разных соотношениях. У В. melitensis преобладает антиген М, у В. abortus и В. suis — антиген А. Кроме того, у них выявлен термолабильный Vi-антиген.

Устойчивость к факторам окружающей среды. При 100° С бруцеллы погибают мгновенно. При температуре 80-85° С — через 5 мин, при 60° С — через 30 мин. К низким температурам они очень устойчивы. Прямые солнечные лучи действуют на них губительно. Во влажной среде бруцеллы сохраняются длительно — 3-4 мес. В молочных продуктах — до 40-45 дней, замороженном мясе — до 5 мес, почве и воде — до 3-5 мес.

Восприимчивость животных. Бруцеллезом болеют в основном сельскохозяйственные животные: мелкий и крупный рогатый скот, свиньи, олени и др. Каждый вид бруцелл поражает определенный вид животного. Но бруцеллы могут мигрировать, т. е. переходить от одного вида животного другому. Например, В. abortus могут поражать мелкий рогатый скот.

Основными признаками заболевания являются: у самок — аборты, у самцов — орхиты. Кроме того, у них бывает поражение суставов, похудание, выпадение шерсти и т. д. Но бруцеллез у животных может протекать в скрытой форме, что способствует распространению инфекции.

Из экспериментальных животных к бруцеллам чувствительны белые мыши и морские свинки. После заражения они абортируют, резко худеют, у них выпадает шерсть. У мышей иногда развивается септицемия.

Источники инфекции. Основным источником заболевания бруцеллезом людей являются мелкий и крупный рогатый скот. Роль человека в передаче бруцеллезной инфекции эпидемиологического значения не имеет.

Пути передачи. Пищевой, контактно-бытовой, воздушно-капельный.

Контактный путь — при работе с животными: в процессе ухода за животными, на предприятиях, перерабатывающих сырье и продукты животного происхождения; при соприкосновении с выделениями больных животных, плодом, в процессе убоя, разделки туши и т. д.

Аэрогенным путем бруцеллы проникают в кожу и неповрежденные слизистые оболочки.

Пищевой путь — употребление зараженных пищевых продуктов. Наиболее опасны молочные продукты — молоко, брынза и т. д.

Патогенез. Попав в организм, бруцеллы по лимфатическим путям проникают в лимфатические узлы, кровь, костный мозг, паренхиматозные органы и локализуются внутри клеток. При обострении процесса бруцеллы из клеток вновь попадают в кровь и возникает рецидив. Заболевание характеризуется воспалением суставов, невралгией и естественными абортами.

Иммунитет — обусловливается клеточными (фагоцитоз) и гуморальными факторами — агглютининами, комплементсвязывающими антителами и др. Иммунитет сочетается с состоянием аллергии. В опытах на морских свинках было показано, что устойчивость к повторному заражению у них сочеталась с положительной реакцией к бруцеллину.

Профилактика. Плановые обследования в животноводческих хозяйствах, на пастбищах, в убойных пунктах, на мясных и молочных комбинатах.

Специфическая профилактика. Вакцинация живой вакциной В. abortus (штамм 19-ВА). Прививки проводят накожным методом однократно, ревакцинируют через 8-12 мес.

Лечение. Антибиотики: левомицетин, эритромицин. Для предупреждения рецидивов используют также бруцеллезный иммуноглобулин.

1. Какие Вы знаете виды бруцелл и какой из них патогенен для человека?

2. На каких средах культивируют бруцеллы и чем характеризуется их рост на средах?

3. С чем связано патогенное действие бруцелл?

Цель исследования: выявление возбудителя бруцеллеза.

Работу с бруцеллами проводят в строго режимных условиях.

2. Спинномозговая жидкость.

Способы сбора материала

Ход исследования

1. В каких условиях проводят работу с материалом, полученным от больного бруцеллезом?

2. Какой материал служит для диагностического исследования?

3. Перечислите основные методы исследования.

4. На каких животных ставят биологическую пробу?

Сывороточно-декстрозный агар. Основой этой среды является питательный агар, который готовят следующим образом: к 835 мл дистиллированной воды добавляют 15 г агар-агара, 10 г пептона, 5 г х. ч. хлорида натрия и 165 мл мясной воды. Все ингредиенты вводят в сосуд и подвергают обработке текучим паром в течение часа. Устанавливают рН 7,8. Затем сосуд ставят в автоклав, при 2 атм, температуре 120° С выпадают фосфаты. Среду фильтрют через бумажные фильтры, устанавливают рН 7,4, разливают в мерную посуду и стерилизуют при температуре 116° С в течение 15 мин. Заготовленный таким образом агар по мере надобности расплавляют на водяной бане и охлаждают до 50° С. Затем к нему добавляют нормальную инактивированную (при 56° С 30 мин) лошадиную или бычью сыворотку и раствор декстрозы, простерилизованный путем фильтрации через фильтр Зейтца. Окончательная концентрация сыворотки должна быть 5% и декстразы — 1%.

Среда «Д»: а) бульон «Д» — к 100 мл холодной дистиллированной воды добавляют 2,5 г порошка стандартного бульона «Д», прогревают и тщательно размешивают до полного его растворения; затем бульон фильтруют, разливают в необходимую посуду и стерилизуют при 120° С в течение 20 мин (рН среды 7,1-7,2); б) агар «Д» — к 100 мл холодной дистиллированной воды добавляют 20 г порошка стандартного агара «Д», прогревают при помешивании до полного растворения порошка, не допуская его подгорания, затем фильтруют, разливают в необходимую посуду и стерилизуют при 120° С в течение 20 мин (рН среды 7,2). Среды готовит Институт эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалея АМН СССР.

источник

НОВОСТИ БИБЛИОТЕКА КАРТА САЙТА ССЫЛКИ О САЙТЕ

Культивирование. Бруцеллы — аэробы. Прихотливы к питательным средам. Характеризуются замедленным ростом (2-3 нед). Выращивают их на специальных питательных средах: сывороточно-декстрозном агаре, на агаре из картофельного настоя с сывороткой и кровяным агаром (5% овечьей крови), среде «Д», печеночном агаре МПА и МПБ. Растут они при температуре 37° С и рН 6,8-7,2. Некоторые штаммы требуют для роста 5-10% СО2, особенно при первоначальном выделении. На плотных питательных средах вырастают нежные, мелкие, бесцветные, выпуклые с перламутровым блеском колонии в S-форме. Под влиянием некоторых факторов они могут диссоциировать в R-форму. Под действием антибиотиков у них возникают L-формы. В жидких питательных средах бруцеллы дают равномерную муть. Бруцеллы можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриона.

Таблица 44. Биологические свойства бруцелл

Пути передачи. Пищевой, контактно-бытовой, воздушно-капельный.

Аэрогенным путем бруцеллы проникают в кожу и неповрежденные слизистые оболочки.

1. Какие Вы знаете виды бруцелл и какой из них патогенен для человека?

2. На каких средах культивируют бруцеллы и чем характеризуется их рост на средах?

3. С чем связано патогенное действие бруцелл?

Цель исследования: выявление возбудителя бруцеллеза.

Работу с бруцеллами проводят в строго режимных условиях.

Материал для исследования

2. Спинномозговая жидкость.

Способы сбора материала

Основные методы исследования

Ход исследования

1. В каких условиях проводят работу с материалом, полученным от больного бруцеллезом?

2. Какой материал служит для диагностического исследования?

3. Перечислите основные методы исследования.

4. На каких животных ставят биологическую пробу?

Возбудители бруцеллеза B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.canis, B.ovis относятся к отделу Gracilicutes, роду Brucella. Род объединяет мелкие неподвижные палочки или коккобациллы, обладающие значительным полиморфизмом. Аэробы, оптимум температуры около +37С, рН — 6,6- 7,4. Факультативные внутриклеточные паразиты, хорошо окрашиваемые анилиновыми красителями.
Патогенные для человека четыре вида — B.melitensis (распространена преимущественно среди мелкого рогатого скота, вызывает наиболее тяжелые поражения у человека), B.abortus (связана с крупным рогатым скотом), B.suis, B.canis. Основным хозяином B.suis 4 биовара являются северные олени, этот возбудитель часто называют B.rangiferis. От грызунов выделены бруцеллы вида B.neotomae, от овец — B.ovis. B.melitensis разделена на 3 биовара, B.abortus — на 9, B.suis — на 5 биоваров. Бруцеллы — возбудители зоонозной инфекции человека и животных — бруцеллеза. Возбудитель легко диссоциирует, переходя из S- в R- форму.

Морфологические и тинкториальные свойства: Мелкие, грамотрицательные палочки овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, иногда образуют микрокапсулу.

Культуральные свойства: облигатные аэробы. B.abortus для своего роста нуждается в присутствии 5—10 % углекислого газа. Оптимальными для роста являются температура 37С. Требовательны к питательным средам и растут на специальных средах (печеночных, кровяной агар). Их особенностью является медленный (в течение 2 нед) рост. В жидких средах – равномерное помутнение с небольшим осадком.

На плотных – мелкие, круглые гладкие голубые колонии.

Лучше растут на обогащенных средах сложного состава с добавлением крови или сыворотки крови, глюкозы, глицерина. Используют печеночный агар Хеддльсона, кровяной агар, мясо — пептонный бульон. Колонии возбудителя в S- форме мелкие, выпуклые, гладкие, с перламутровым оттенком, при диссоциации образуют широховатые R- формы колоний. Характерен медленный рост бруцелл в первых генерациях — колонии образуются через 2-4 недели. Рост бруцелл на жидких средах сопровождается равномерным помутнением сред.

Биохимическая активность: очень низкая; содержат каталазу и оксидазу, нитраты редуцируют в нитриты, цитраты не утилизируют, продуцируют Н2S. Бруцеллы ферментируют углеводы, однако при дифференциации на виды и биотипы используют ряд дополнительных признаков, в т.ч. способность расти на средах в присутствии обладающих бактериостатическим действием на отдельные виды бруцелл красителей (основной фуксин, тионин, сафранин), выделять сероводород, образовывать ферменты (уреазу, фосфатазу, каталазу), окислять различные аминокислоты.

Бурцеллы

Бруцеллы имеют общий соматический родоспецифический антиген, поэтому бруцеллы разных видов дают перекрестную агглютинацию. Два главных поверхностных антигена — А (преобладает у B.abortus) и М (преобладает у B.melitensis) встречаются в различных количественных соотношениях у различных видов бруцелл. Для их идентификации используют соответствующие антисыворотки.
Бруцеллы имеют поверхностный L- антиген (сходен с Vi- антигенами сальмонелл). Шероховатые формы содержат специфический R- антиген, для его идентификации используют специфические антисыворотки, применяемые при серотипировании. Колонии B.canis, B.ovis и B.suis 5 биотипа всегда имеют R- форму. Многие антигенные фракции бруцелл обладают выраженным аллергизирующим действием. У бруцелл имеются перекрестнореагирующие антигены с возбудителем туляремии, Bordetella bronchiseptica и Y.enterocolitica серотипа 09.

Факторы патогенности: Образуют эндотоксин, обладающий высокой инвазивной активностью. Продуцируют один из ферментов агрессии — гиалу-ронидазу. Их адгезивные свойства связаны с белками наружной мембраны.

Быстро погибают при кипячении, при действии дезинфицирующих веществ, устойчивы к низкой температуре: в замороженном мясе они сохраняются до 5 мес, в молочных продуктах — до 1,5 мес.

Зоонозная инфекция. Источник — крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, овцы, выделяющие B.melitensis. Люди более восприимчивы к этому виду возбудителя. Реже заражение происходит от коров (B.abortus) и свиней (B.suis). Больные люди не являются источником заболевания.

Бруцеллез — зооноз преимущественно сельскохозяйственных и домашних животных. Человек инфицируется от животных или при контакте с инфицированным сырьем животного происхождения. Бруцеллез может носить профессиональный характер (уход за инфицированными животными) или быть связан с употреблением недостаточно термически обработанных молочных или мясных продуктов. Возбудитель может внедряться в организм человека через поврежденную кожу, слизистые дыхательных путей (аэрогенно) и желудочно — кишечного тракта (алиментарным путем), при заносе возбудителя на конъюнктиву глаза. Пути заражения — контактный, алиментарный и аспирационный. Бруцеллы обладают относительно высокой устойчивостью во внешней среде.

Проникают в организм через слизистые оболочки или поврежденную кожу, попадают сначала в регионарные лимфатические узлы, затем в кровь, разносятся по всему организму и внедряются в органы ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенку, костный мозг). Там они могут длительное время сохраняться и вновь попадать в кровь. При гибели освобождается эндотоксин, вызывающий интоксикацию.

Патогенность бруцелл связана с наличием эндотоксина, гиалуронидазы и других ферментов, наличием низкомолекулярных продуктов, способствующих подавлению фагоцитоза и окислительного взрыва в макрофагах, наличием аллергизирующих субстанций.
По лимфатическим путям бруцеллы попадают в регионарные лимфоузлы, где размножаются в макрофагах, частично подвергаются внутриклеточному уничтожению. Продукты жизнедеятельности бруцелл ингибируют фагосомо — лизосомальное слияние. Морфологически в лимфоузлах формируется “первичный бруцеллезный комплекс” с формированием гранулем Новицкого с преобладанием крупных эпителиоидных клеток. Из разрушенных макрофагов в лимфоузлах бруцеллы попадают в кровь, распространяются по организму и поражают лимфатическую систему, печень, селезенку, нарушаются функции опорно — двигательного аппарата, нервной и половой систем.
Болезнь может иметь длительное хроническое течение (по сути — хрониосепсис). В патогенезе бруцеллеза имеет значение цикличность процессов, связанных с повторными проникновениями бруцелл в кровь из очагов с развитием местной воспалительной и общей реакций, на формирование которых существенное влияние оказывает специфическая сенсибилизация (реакция ГЗТ). Существенное значение в патогенезе, кроме аллергической перестройки и интоксикации, имеет преимущественное вовлечение в инфекционный процесс тех или иных органов и тканей.

Клиника: Инкубационный период составляет обычно 1—3 нед. Длительная лихорадка, озноб, потливость, боли в суставах, радикулиты.

Иммунитет: После перенесенного заболевания формируется непрочный иммунитет. Клеточно-гуморальный, нестерильный, относительный.

Микробиологическая диагностика обычно проводится путем серологических исследований (реакция Райта и Хеддлсона).

Для получения гемокультуры кровь засевают в два флакона печеночного бульона. Один из них (для выделения культуры В. melitensis) инкубируют в обычных аэробных условиях, другой (для выделения первичной культуры В. abortus) — с СО2. В первых генерациях бруцеллы растут очень медленно. На агаре бруцеллы образуют бесцветные колонии, в бульоне — помутнение и слизистый осадок. В мазках, окрашенных по Граму, обнаруживаются мелкие грамотрицательные формы. Они неподвижны, спор не образуют, в определенных условиях появляется видимая капсула.

Для быстрой идентификации бруцелл ставят реакцию агглютинации со специфическими агглютинирующими сыворотками на стекле и определяют чувствительность к специфическому фагу. Все виды бруцелл не ферментируют углеводы. Их дифференцируют по образованию H2S, чувствительности к СО2, действию анилиновых красителей (основной фуксин).

Материалом для бактериологических исследований служат кровь, костный мозг, грудное молоко (у кормящих), моча, околосуставная жидкость. Чаще выделяют гемо- и миелокультуры. Чистые культуры изучают по биохимическим свойствам, определяют их способность расти на средах с добавлением бактериостатических красителей, типируют в РА.
На практике чаще используют различные серологические методы диагностики:

— развернутую реакцию агглютинации Райта — основной метод и ускоренные микрометоды на стекле — агглютинации (Хеддельсона), роз- бенгал, латекс — агглютинации;
— реакцию Кумбса — для выявления неполных антител с применением антиглобулиновой сыворотки;
— РНИФ, РПГА с антигенным эритроцитарным диагностикумом, ИФА.

При отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований применяют аллергическую кожную пробу с бруцеллином (пробу Бюрне).
Для выделения бруцелл из объектов внешней среды и от животных широко используют биопробу, для серодиагностики у животных — РСК, для исследования молока — кольцевую пробу.

Реакция агглютинации Райта с бруцеллезным диагностикумом. Положительные результаты отмечаются спустя 1 нед. после начала заболевания и сохраняются у переболевших многие годы. Диагностический титр реакции 1:200. Для ускоренной серодиагностики применяется реакция агглютинации Хеддлсона, которая ставится с неразведенной сывороткой больного и концентрированным антигеном — диагностикумом, окрашенным метиленовым синим. При положительной реакции появляются хлопья синего цвета. Реакция положительна при наличии агглютинации на «++».

Для серодиагностики используют РПГА, РИФ, РСК, метод определения неполных антител. В поздние периоды заболевания процент положительных серологических реакций (агглютинации, РПГА и РСК) начинает снижаться и большее диагностическое значение приобретают кожно-аллергическая проба и реакция Кумбса.

Применяется для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Исследуемый материал вводят морским свинкам подкожно в паховую область. Кусочки органов и лимфатических узлов засевают на питательные среды для получения чистой культуры и ее идентификации.

Кожно-аллергическая проба (реакция Бюрне)

На предплечье внутрикожно вводят 0,1 мл бруцеллина. При наличии аллергии уже через 6 ч. могут появиться гиперемия кожи и болезненная отечность. Учет реакции производят через 24 ч. Реакция обладает высокой чувствительностью.

Лечение: Антибиотики широкого спектра действия. Специфическая иммунотерапия убитой лечебной бруцеллезной вакциной или бруцеллина (фильтрат бульонных культур В. melitensis, B.abortus, В.suis, убитых нагреванием . При острых формах – бруцеллезный иммуноглобулин.

Профилактика: Живая бруцеллезная вакцина получена штамма ВА-19А, полученную из В. abortus, создает перекрестный иммунитет против других видов бруцелл.

Бруцеллезный единый диагностикум. Взвесь убитых бруцелл, окрашенных метиленовым синим, применяется при серологической диагностике бруцеллеза постановкой реакции агглютинации Райта и Хеддлсона.

Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вакцина. Взвесь вакцинного штамма. В. abortus применяется для профилактики бруцеллеза.

Описание:
Род:Brucella
Вид:abortus
Chromosome I
Biovar I
Таксономия:262698
Штамм:9-941
Номер генома:AE017224
Brucella abortus S19

Brucella abortus является причиной бруцеллеза (самопроизвольный отел у скота и бруцеллез у людей) Brucella spp грамм-отрицательные факультативные внутриклеточные патогенные коккобактерии,cпособные заражать большое разнообразие млекопитающих хозяев.Свободноживущие формы не найдены ,они не комменсальные организмы.Предпочитаемая экологическая ниша для brucellae в пределах фагосомального отдела макрофагов.Cпособности этого организма создавать и сохранять хронические инфекции зависят от способности выживать и реплицироваться в пределах этих фагоцитических клеток.
Brucella abortus это этиологический переносчик коровьего бруцеллеза,инфекция вызывает спонтанное преждевременное прекращение беременностиe у людей и преждевременный отел у скота.

Бруцеллез был зарегистрирован как болезнь в 1979 году,когда в Великобритании от него погибла большая часть крупного рогатого скота.

Бруцеллез развивается и у людей,при выпивании зараженного непастерилизованного молока или контакта с переносчиками (крупным рогатым скотом).Возбудители проникают в организм через кожу и слизистые оболочки, распространяются по лимфатическим путям, и оседают в регионарных лимфатических узлах, где вызывают воспаление. Затем с током крови и лимфы распространяются по всему организму и оседают в печени, селезёнке, костном мозге, лимфатических узлах, где размножаются внутри клеток ретикуло-эндотелиальной системы ( макрофагах) и из которых периодически поступают в кровь. В результате внутриклеточной гибели бруцелл освобождаются токсины, которые вызывают различные симптомы болезни. У brucella 7 видов,4 из них патогенных для человека (Brucella melitensis,Brucella Abortus,Brucella canis and Brucella suis).

источник

Бруцеллез окраска по граму

Описание: Род:Brucella Вид:abortus Chromosome I Biovar I Таксономия:262698 Штамм:9-941 Номер генома:AE017224 Brucella abortus S19

Бруцеллез был зарегистрирован как болезнь в 1979 году,когда в Великобритании от него погибла большая часть крупного рогатого скота.

Описание:
Род:Brucella
Вид:abortus
Chromosome I
Biovar I
Таксономия:262698
Штамм:9-941
Номер генома:AE017224
Brucella abortus S19