Биохимические свойства возбудителей бруцеллеза

В 1886 г. Д. Брюс в селезенке больного, погибшего от мальтийской лихорадки, обнаружил маленькую коккобактерию, которую выделил в чистой культуре и назвал Micrococcus.

В 1896 г. Б. Банг из околоплодной жидкости при аборте коров также выделил коккобактерии. В 1914 г. Ж. Траум выделил подобную палочку от больных свиней. А в 1916 г. Ивенс, изучив все выделенные микроорганизмы, определила их схожесть и в честь Брюса они были названы бруцеллами. В дальнейшем (1953, 1957, 1966) были открыты и другие виды бруцелл. Все они объединены в род Brucella.

В настоящее время бруцеллы подразделяют на виды по признаку их основного хозяина: В. melitensis — болеет мелкий рогатый скот (овцы, козы); В. abortus — болеет крупный рогатый скот; В. suis — болеют свиньи и т. д.

Каждый вид бруцелл подразделяют на биовары: В. melitensis включает 3 биовара; В. abortus — 9 биоваров; В. suis — 5 биоваров. Наиболее патогенным для человека является В. melitensis. B. abortus редко вызывают клиническое проявление заболевания у человека.

Морфология. Возбудители бруцеллеза мелкие 0,6-0,8 × 0,3-0,5 мкм бактерии палочковидной или овоидной формы. Неподвижны. Спор не имеют. Образуют нежную капсулу. Грамотрицательны. В мазке располагаются беспорядочно.

Культивирование. Бруцеллы — аэробы. Прихотливы к питательным средам. Характеризуются замедленным ростом (2-3 нед). Выращивают их на специальных питательных средах: сывороточно-декстрозном агаре, на агаре из картофельного настоя с сывороткой и кровяным агаром (5% овечьей крови), среде «Д», печеночном агаре МПА и МПБ. Растут они при температуре 37° С и рН 6,8-7,2. Некоторые штаммы требуют для роста 5-10% СО₂, особенно при первоначальном выделении. На плотных питательных средах вырастают нежные, мелкие, бесцветные, выпуклые с перламутровым блеском колонии в S-форме. Под влиянием некоторых факторов они могут диссоциировать в R-форму. Под действием антибиотиков у них возникают L-формы. В жидких питательных средах бруцеллы дают равномерную муть. Бруцеллы можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриона.

Дифференцируют виды бруцелл на основании их способности образовывать сероводород и расти на средах с красителями — основным фуксином и тионином (табл. 44).

Таблица 44. Биологические свойства бруцелл

Ферментативные свойства. Бруцеллы расщепляют D-рибозу, D-галактозу, аланин, аспарагин. Некоторые штаммы гидролизуют аминокислоты с образованием аммиака.

Бруцеллы образуют гиалуронидазу, каталазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу и др. Бруцеллы обладают выраженными инвазивными и агрессивными свойствами.

Токсинообразование. Патогенное действие бруцелл определяется, по-видимому, наличием эндотоксина. Кроме того, они обладают аллергенными свойствами.

Антигенная структура. Бруцеллы содержат два соматических антигена А и М. Эти антигены являются видоспецифичными. Они всегда входят в состав микробной клетки, но в разных соотношениях. У В. melitensis преобладает антиген М, у В. abortus и В. suis — антиген А. Кроме того, у них выявлен термолабильный Vi-антиген.

Устойчивость к факторам окружающей среды. При 100° С бруцеллы погибают мгновенно. При температуре 80-85° С — через 5 мин, при 60° С — через 30 мин. К низким температурам они очень устойчивы. Прямые солнечные лучи действуют на них губительно. Во влажной среде бруцеллы сохраняются длительно — 3-4 мес. В молочных продуктах — до 40-45 дней, замороженном мясе — до 5 мес, почве и воде — до 3-5 мес.

Восприимчивость животных. Бруцеллезом болеют в основном сельскохозяйственные животные: мелкий и крупный рогатый скот, свиньи, олени и др. Каждый вид бруцелл поражает определенный вид животного. Но бруцеллы могут мигрировать, т. е. переходить от одного вида животного другому. Например, В. abortus могут поражать мелкий рогатый скот.

Основными признаками заболевания являются: у самок — аборты, у самцов — орхиты. Кроме того, у них бывает поражение суставов, похудание, выпадение шерсти и т. д. Но бруцеллез у животных может протекать в скрытой форме, что способствует распространению инфекции.

Из экспериментальных животных к бруцеллам чувствительны белые мыши и морские свинки. После заражения они абортируют, резко худеют, у них выпадает шерсть. У мышей иногда развивается септицемия.

Источники инфекции. Основным источником заболевания бруцеллезом людей являются мелкий и крупный рогатый скот. Роль человека в передаче бруцеллезной инфекции эпидемиологического значения не имеет.

Пути передачи. Пищевой, контактно-бытовой, воздушно-капельный.

Контактный путь — при работе с животными: в процессе ухода за животными, на предприятиях, перерабатывающих сырье и продукты животного происхождения; при соприкосновении с выделениями больных животных, плодом, в процессе убоя, разделки туши и т. д.

Аэрогенным путем бруцеллы проникают в кожу и неповрежденные слизистые оболочки.

Пищевой путь — употребление зараженных пищевых продуктов. Наиболее опасны молочные продукты — молоко, брынза и т. д.

Патогенез. Попав в организм, бруцеллы по лимфатическим путям проникают в лимфатические узлы, кровь, костный мозг, паренхиматозные органы и локализуются внутри клеток. При обострении процесса бруцеллы из клеток вновь попадают в кровь и возникает рецидив. Заболевание характеризуется воспалением суставов, невралгией и естественными абортами.

Иммунитет — обусловливается клеточными (фагоцитоз) и гуморальными факторами — агглютининами, комплементсвязывающими антителами и др. Иммунитет сочетается с состоянием аллергии. В опытах на морских свинках было показано, что устойчивость к повторному заражению у них сочеталась с положительной реакцией к бруцеллину.

Профилактика. Плановые обследования в животноводческих хозяйствах, на пастбищах, в убойных пунктах, на мясных и молочных комбинатах.

Специфическая профилактика. Вакцинация живой вакциной В. abortus (штамм 19-ВА). Прививки проводят накожным методом однократно, ревакцинируют через 8-12 мес.

Лечение. Антибиотики: левомицетин, эритромицин. Для предупреждения рецидивов используют также бруцеллезный иммуноглобулин.

1. Какие Вы знаете виды бруцелл и какой из них патогенен для человека?

2. На каких средах культивируют бруцеллы и чем характеризуется их рост на средах?

3. С чем связано патогенное действие бруцелл?

Цель исследования: выявление возбудителя бруцеллеза.

Работу с бруцеллами проводят в строго режимных условиях.

2. Спинномозговая жидкость.

Способы сбора материала

Ход исследования

Ход исследования

1. В каких условиях проводят работу с материалом, полученным от больного бруцеллезом?

2. Какой материал служит для диагностического исследования?

3. Перечислите основные методы исследования.

4. На каких животных ставят биологическую пробу?

Сывороточно-декстрозный агар. Основой этой среды является питательный агар, который готовят следующим образом: к 835 мл дистиллированной воды добавляют 15 г агар-агара, 10 г пептона, 5 г х. ч. хлорида натрия и 165 мл мясной воды. Все ингредиенты вводят в сосуд и подвергают обработке текучим паром в течение часа. Устанавливают рН 7,8. Затем сосуд ставят в автоклав, при 2 атм, температуре 120° С выпадают фосфаты. Среду фильтрют через бумажные фильтры, устанавливают рН 7,4, разливают в мерную посуду и стерилизуют при температуре 116° С в течение 15 мин. Заготовленный таким образом агар по мере надобности расплавляют на водяной бане и охлаждают до 50° С. Затем к нему добавляют нормальную инактивированную (при 56° С 30 мин) лошадиную или бычью сыворотку и раствор декстрозы, простерилизованный путем фильтрации через фильтр Зейтца. Окончательная концентрация сыворотки должна быть 5% и декстразы — 1%.

Среда «Д»: а) бульон «Д» — к 100 мл холодной дистиллированной воды добавляют 2,5 г порошка стандартного бульона «Д», прогревают и тщательно размешивают до полного его растворения; затем бульон фильтруют, разливают в необходимую посуду и стерилизуют при 120° С в течение 20 мин (рН среды 7,1-7,2); б) агар «Д» — к 100 мл холодной дистиллированной воды добавляют 20 г порошка стандартного агара «Д», прогревают при помешивании до полного растворения порошка, не допуская его подгорания, затем фильтруют, разливают в необходимую посуду и стерилизуют при 120° С в течение 20 мин (рН среды 7,2). Среды готовит Институт эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалея АМН СССР.

источник

Бруцеллы – мелкие кокковидные или палочковидные грамотрицательные бактерии. Входят в секцию 4 (грамотрицательные аэробные палочки и кокки), род Brucella, который включает в себя шесть видов: В. abortus – возбудитель бруцеллеза крупного рогатого скота; В. melitensis – овец и коз; В. suis – свиней; В. canis – собак; В. neotomae – кустарниковых крыс; В. ovis – инфекционного эпидидимита баранов. По антигенным и биохимическим свойствам подразделяют В. abortus на девять биоваров, В. melitensis – на три и В. suis – на пять биоваров.

Бруцеллы обнаружил в 1886 г. Д. Брюс, микроскопируя мазки из селезенки солдата, умершего от мальтийской лихорадки, а в 1887 г. он выделил чистую культуру и возбудителя назвал Micrococcus melitensis. Банг и Стрибольт (1897) из околоплодной жидкости коровы выделили второй вид – В. abortus bovis; Траум (1914) от абортировавшей свиньи – третий вид – В. abortus suis. В 1920 г. Майер и Фезье объединили эти три микроба в одну группу и назвали бруцеллами в честь открывшего их Брюса.

Бруцеллы являются возбудителями бруцеллеза – хронической инфекционной болезни животных и человека, проявляющейся абортами, эндометритами, задержанием последа, орхитами, рецидивирующей лихорадкой, у лошадей – преимущественно бурситами в области холки и воспалением связок затылочного сустава. В. ovis вызывает эпидидимит у баранов, яловость, аборты и рождение нежизнеспособных ягнят.

Морфология. Бруцеллы – мелкие коккобактерии (0,3-0,6 мкм) или палочки (0,6-2,5 мкм), в окрашенных препаратах располагаются одиночно, парами и небольшими группами. Неподвижны, спор не образуют. Мукоидные и гладкие варианты синтезируют нежную капсулу. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, грамотрицательны. При окраске по Козловскому бруцеллы красные, другие микроорганизмы и фон препарата зеленого цвета.

Культивирование. Бруцеллы могут расти на обычных питательных средах при 36-38 0 С и рН 6,8-7,2, однако для их культивирования используют специальные среды: мясопептонный печеночный бульон (МППБ), мясопептонный печеночно-глюкозно-глицериновый агар (МППГТА), печеночно-глюкозно-глицериновый бульон и агар (ПГГБ, ПГГА) с 1 % глюкозы и 2-3 % глицерина, картофельный агар, сывороточно-декстрозный агар и др.

Бруцеллы В. abortus и В. ovis – микро-аэрофилы, первые их генерации выращивают в условиях при содержании 10-15 % С0₂. Выделяемые из первичного материала бруцеллы растут очень медленно, в среднем 15-30 суток, старые лабораторные культуры вырастают уже через 24-48 ч.

Вирулентные типичные штаммы (S-форма) на поверхности агара образуют мелкие, 2-3 мм в диаметре, круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью и ровными краями, прозрачные с голубоватым оттенком колонии; в бульоне – слабое равномерное помутнение и пристеночное кольцо, в дальнейшем – небольшой осадок.

Авирулентные варианты (R-форма) на агаре образуют шероховатые колонии, в бульоне – неравномерное помутнение с просветлением и крошковатым осадком. На агаре с кровью бруцеллы гемолиза не дают, пигмент не синтезируют.

Биохимические свойства. Сахаролитическая активность у бруцелл выражена слабо. Они утилизируют углеводы, но не образуют кислоту и газ в количествах, достаточных для их идентификации. Нитраты редуцируют в нитриты. Молоко не свертывают, желатин не разжижают. Некоторые виды гидролизуют аминокислоты с образованием аммиака.

В. abortus и особенно В. suis при росте выделяют сероводород; В. melitensis образует его в незначительном количестве на средах с серосодержащими аминокислотами. Могут продуцировать каталазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу.

Антигенная структура. Бруцеллы в S-форме трех основных видов обладают двумя соматическими антигенами: М (В. melitensis) и А (В. abortus). М-антигена у В. melitensis в 20 раз больше, чем у других видов, в небольшом количестве также имеется А-антиген; соотношение антигенов А и М у В. abortus составляет 20:1. В. suis содержит больше М-антигена, чем В. abortus. Предполагают, что эти антигены представлены сложным глюцидолипидополипептидным комплексом. Они активно индуцируют синтез антител, выявляемых в реакциях преципитации, агглютинации, РСК и других. Особенности антигенной структуры бруцелл позволяют получить моноспецифические А- и М-антисыворотки. Кроме того, был обнаружен поверхностный L-антиген, сходный с Vj-антигеном сальмонелл.

Устойчивость. Бруцеллы малоустойчивы к действию различных физических и химических факторов. Агаровые культуры в запарафинированных пробирках сохраняются несколько недель, лиофильно высушенные – годами. Прямые солнечные лучи убивают их за 4,5 ч. В воде бруцеллы выживают и более 5 месяцев, в поверхностном слое почвы – 40 суток, на глубине 5-8 см – до 3 месяцев, в навозе при медленном высушивании – до 120 суток, в моче коров – до 4 суток, в почве зимой – 4-5 суток, в высушенных плодных оболочках – до 120 суток. В охлажденном молоке сохраняются 6-8 суток, в кислом молоке – 1-4, в масле – 40-60, в сырах – более 42, в брынзе (5-11 % раствор поваренной соли) – 45-60, в замороженном мясе – свыше 320 суток, в засоленных шкурах – 2 месяца, в шерсти – до 3–4 месяцев.

При температуре 60 0 С бруцеллы погибают через 30 минут, при 80-85 0 С – через 5 минут, при 100 0 С – мгновенно. Пастеризацию молока проводят при 85-90 0 С 30 минут Дезинфицирующие растворы – 2 % фенол, 1 % креолин, 0,5 % лизол, 1-2 % формалин, 0,5-1 % хлорамин, 1 % соляная кислота, 3 % гидроксид натрия, 5 % хлорная известь убивают бруцелл в течение нескольких минут.

Патогенность. Патогенное действие связано с образованием эндотоксинов, а также гиалуронидазы, каталазы, уреазы. Бруцеллы высокоинвазивны, могут проникать через неповрежденные слизистые покровы пищеварительного тракта, легких, глаз и кожу. Восприимчивы овцы, козы, крупный рогатый скот, буйволы, свиньи, лошади, мулы, верблюды, северные олени, собаки, кошки, многие дикие животные (лоси, косули, сайгаки и др.). Молодняк до половой зрелости более устойчив. Каждый вид бруцелл поражает животных определенного вида. Но бруцеллы могут мигрировать, заражая животных других видов, например, В. melitensis – крупный рогатый скот, свиней и лошадей, В. abortus – коз, овец, лошадей и свиней, В. suis – крупный и мелкий рогатый скот, лошадей. Для человека наиболее опасна В. melitensis.

Больные животные выделяют возбудителя с молоком, абортированным плодом, околоплодной жидкостью, влагалищной слизью, мочой, калом.

Из экспериментальных животных к бруцеллезу чувствительны белые мыши и морские свинки. У мышей после заражения иногда развивается септицемия, свинки абортируют, худеют, у них выпадают волосы, возникает генерализованная инфекция.

У многих животных через 1-2 года наступает самовыздоровление.

Патогенез. Независимо от места внедрения в организм бруцеллы распространяются по лимфатическим путям и задерживаются в реги­онарных лимфатических узлах, где размножаются, затем проникают в кровяное русло и попадают в паренхиматозные органы. Бруцеллы – внутриклеточные паразиты, обитающие в клетках лимфоидно-макрофагальной системы. В местах их размножения образуются специфические гранулемы. При обострении процесса бруцеллы из клеток вновь проникают в кровь, вызывая различной интенсивности бактериемию и рецидив. В результате гибели бруцелл происходит освобождение эндотоксина, который обусловливает соответствующую симптоматику острого и хронического бруцеллеза.

Плодные оболочки многих животных содержат эритриол – фактор роста для бруцелл. Этим можно объяснить особенно высокую восприимчивость к инфекции беременных животных.

В патогенезе бруцеллеза определенное значение имеют L-формы бруцелл, которые длительное время персистируют в организме. При хроническом процессе от животных выделяли культуры бруцелл стабильных L-форм.

Эпизоотологические данные. Бруцеллез распространен во многих странах мира, является хронической инфекционной болезнью животных и человека и в связи с социальной опасностью включен в список карантинных болезней. К бруцеллезу восприимчив крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, лошади, олени, верблюды, пушные звери, собаки, грызуны. Птицы устойчивы к бруцеллезу даже при экспериментальном заражении.

Более 20 видов диких животных являются носителями бруцелл. Источник возбудителя – больные животные (они особенно опасны при клиническом проявлении болезни), бруцеллоносители, выделяющие возбудителя при аборте, во время родов, с калом, мочой, молоком. Основные пути заражения – алиментарный, через неповрежденную слизистую оболочку, при случке, через кожу (поврежденную и неповрежденную). Молодняк может заразиться как от больной матери, так и при искусственном кормлении его необезвреженным молоком.

Ведущими факторами передачи возбудителя бруцеллеза являются: сырье животного происхождения, продукты, контаминированные бруцеллами, предметы ухода, корма, подстилка, вода, почва, одежда обслуживающего персонала. Возникновению болезни способствуют снижение резистентности животных при неудовлетворительных ветеринарно-санитарных условиях содержания поголовья, несвоевременная уборка последов и абортированных плодов, некачественная дезинфекция.

Бруцеллез в хозяйстве может возникнуть после ввода в стадо животных, закупаемых из неблагополучных ферм или у населения при несоблюдении правил карантинирования или при совместном выпасе здорового и больного скота. Кроме того, распространению эпизоотии способствуют собаки и крысы, поедающие последы и абортированные плоды.

Бруцеллез распространяется в основном в стаде в период стойлового содержания. Эпизоотический процесс активизируется при поступлении в стадо новой партии животных. Перегруппировка животных в неблагополучном хозяйстве способствует появлению вспышек бруцеллеза.

Предубойная диагностика. Характерных признаков бруцеллеза у убойных животных чаще нет, так как болезнь протекает бессимптомно (латентная форма), поэтому согласно Инструкции по борьбе с бруцеллезом животных введены обязательные серологические или аллергические методы исследования. Серологически исследуют в реакции агглютиниации в пробирках, реакции связывания комплемента, роз бенгал проба, кольцевая проба с молоком, реакции иммунодиффузии с О-ПС антигеном. Однако в ряде случаев отдельные признаки могут давать повод к подозрению на бруцеллезную инфекцию: у коров и овец – задержание последа с развитием слизисто-гнойного, а также гнойно-фибринозного эндометрита, маститы, аборты во второй половине беременности. При тяжело протекающих воспалительных процессах повышается температура тела.

Заболевание бруцеллезом может также сопровождаться серозными бурситами, гагромами, артритами, тендовагинитами, абсцессами, а у быков, баранов и хряков – орхитами и эпидидимитами.

У лошадей бруцеллез протекает преимущественно латентно, но иногда сопровождается гнойными артритами и бурситами в области холки. В ряде случаев отмечаются тендениты, тендовагиниты.

В странах СНГ предубойная диагностика бруцеллеза у убойных животных облегчается документацией (ветсанитарное свидетельство, справка), где указывается результат исследования на бруцеллез.

Послеубойная диагностика. Патологоанатомические изменения весьма многообразны, при этом очень часто отсутствуют специфические изменения. В печени, почках, селезенке и других органах нередко обнаруживают различной величины абсцессы. В печени порой находят множественные гранулы с некрозом в центре. При хроническом генерализованном процессе кроме половых органов поражаются лимфатические узлы (они увеличены). На тушах в подкожной клетчатке отмечаются абсцессы.

У больных бруцеллезом свиней находят изменения, свойственные катарально-гнойному эндометриту; у хряков (реже баранов и быков) – гнойно-некротические орхиты, эпидидимиты с образованием в семенниках и придатках абсцессов и некротических очагов. В вымени развивается гнойный и фибриозный мастит. Регионарные лимфатичсекие узлы опухшие, иногда в них встречаются очаговые некрозы и гнойники.

Лабораторная диагностика. Для диагностики бруцеллеза используют бактериологический, биологический, серологический и аллергический методы. В лабораторию направляют абортированный плод с плодными оболочками или желудок плода с содержимым, кусочки печени селезенки, содержимое гигром, абсцессов, молоко; от убитых животных – лимфоузлы, кусочки паренхиматозных органов, костный мозг, матку, яичники, семенники, вымя; от баранов – семенники с придатками. Для серологическоого исследования направляют кровь или сыворотку крови и молоко.

Бактериологическое исследование. Патологический материал высевают на ПГГБ, ПГГА, МППБ, МППГГА или сывороточный декстразный агар. С целью подавления посторонней микрофлофы в среды можно добавлять генцианвиолет (1:200000) или кристаллвиолет (1:100000). При исследовании материала от крупного рогатого скота одну часть посевов инкубируют в атмосфере с содержанием 10-15 % С0₂, другую – в обычных условиях. Для выделения культур В. ovis и В. abortus использу­ют плотные или полужидкие печеночно-сывороточный или печеночно-аминопептидный агар при содержании 10-15 % С0₂. В. melitensis растет в обычных атмосферных условиях. Посевы инкубируют при 37-38 0 С в течение 30 суток.

Культуры бактерий, обладающие типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами, дающие положительную РА с позитивной бруцеллезной сывороткой, относят к бруцеллам.

Виды бруцелл дифференцируют по способности роста в отсутствие повышенной концентрации С0₂, выделению HS2, чувствительности к фагу Тб, бактериостатическому действию анилиновых красителей и агглютинации моноспецифическими сыворотками (табл. 2).

источник

Бруцеллы обнаружил в 1886 г. Д. Брюс, микроскопируя мазки из селезёнки солдата, умершего от мальтийской лихорадки, а в 1887 г. он выделил чистую культуру и возбудителя назвал Micrococcus melitensis. Банг и Стрибольт (1897) из околоплодной жидкости коровы выделили второй вид – B.abortus bovis; Траум (1914) от абортировавшей свиньи — третий вид-B.abortus suis. В 1920 г. Майер и Фезье объединили эти три микроба в одну группу и предложили отнести эти микроорганизмы к роду Brucella и назвали их бруцеллами в честь открывшего их Брюса. [9]

1953 г. Бадл изучая аболевание инфекционного эпидидимита баранов, выделил B. ovis. 1957 г. Стоеннерг и лакман в лесах их трупов древесных крыс выделил микроорганизмы идентичные бруцеллам, назвал B. neotomae . В 1966 г. К. Майкл выделил возбудитель бруцеллёза собак — B.canis .

Бруцеллы – мелкие кокковидные или палочковидные бактерии. Входят в секцию 4 (грамотрицательные аэробные палочки и кокки), род Brucella, который включает в себя шесть видов: B.abortus — возбудитель бруцеллёза крупного рогатого скота; B.melitensis — ов[ец и коз; B.Suis — свиней; B.canis — собак; B. neotomae — кустарниковых крыс; B.ovis — инфекционного эпидимита баранов. По антигенным и биохимическим свойствам подразделяют B. abortus на девять биоваров, B. melitensis—на три и B.suis— на пять биоваров. Наибольшее значение в патологии бруцеллёза имеют бруцеллы первых трёх видов. [5]

a) морфологические свойства.

Бруцеллы –относят к самым мелким коккобактериям (длина палочек приближается к толщине). Размеры, толщина — 0,3…0,6мкм, длина — 0,6…1,5мкм. В окрашенных препаратах располагаются одиночно, парами или небольшими группами. Неподвижны, спор не образуют. Мукойдные и гладкие варианты синтезируют нежную капсулу, грамотрицательные. Окраска по грамму не является определяющей, связано с размерами бруцелл, используют дифференциальные методы окраски бруцелл — окраске по Козловскому, окраска по Стампу. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. При окраске по Козловскому бруцеллы красные, другие микроорганизмы и фон препарата синего цвета. [5]

Возбудитель бруцеллёза является факультативным анаэробом. Бруцеллы В.abortus и B.ovis – микроаэрофилы, первые их генерации выращивают в условиях при содержании 10…15% СО2 . Выделяемые из первичного материала бруцеллы растут очень медленно, в среднем 15…30 суток, старые лабораторные культуры вырастают уже через 24…48 часов.

Бруцеллы могут расти на обычных питательных средах при 36°…38°С и ph 6,8…7,2, однако для их культивирования используют специальные среды: мясопептонный печёночный бульон (МППБ), мясопептонный печёночно – глюкозный – глицериновый агар (МППГГА), печёночно – глюкозно – глицериновый бульон агар (ПГГП, ПГГА) с 1% глюкозы и 2…3% глицерина, картофельный агар и др.

Типичные вирулентные штаммы (S-форма) на поверхности агара образуют мелкие, 2…3мм в диаметре, круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью и ровными краями, прозрачные с голубоватым оттенком колонии с возрастом цвет ржавчины; в бульоне – слабое равномерное помутнение, и пристеночное кольцо, в дальнейшем – небольшой осадок.

Авирулентные варианты (R-форма) на агаре образуют шероховатые колонии, в бульоне – неравномерное помутнение с просветлением и крошковатым осадком. На агаре с кровью бруцеллы гемолиза не дают, пигмент не синтезируют. [8]

Биохимическая активность у бруцелл выражена слабо. Не изменяют сахара короткого пёстрого ряда. Они утилизируют углеводы, но не образуют кислоту и газ в количествах, достаточных для их идентификации. Нитраты редуцируют в нитриты. Молоко не свёртывают, желатин и свёрнутую сыворотку не разжижают. Индол не образует. Некоторые виды гидролизуют аминокислоты с образованием аммиака. Ферментируют глюкозу, арабинозу, декстрозу, левулезу и др. с образованием кислоты. [9]

B.abortus и особенно B.suis при росте выделяют сероводород; B. melitensis образует его в незначительном количестве на средах серосодержащими аминокислотами. Могут продуцировать каталазу, пероксидазу, липазу, фосфотазу.

Патогенное действие связано с образованием эндотоксинов, а также гиалуронидазы, каталазы, уреазы. Бруцеллы высокоинвазивны, могут проникать через не поврежденные слизистые покровы пищеварительного тракта, лёгких, глаз и кожу. Восприимчивы овцы, козы, крупный рогатый скот, буйволы, свиньи, лошади, мулы, верблюды, северные олени, собаки, кошки и многие дикие животные (лоси, косули, сайгаки и др.). Молодняк до половой зрелости более устойчив. Каждый вид бруцелл поражает определённый вид животного. Но бруцеллы могут мигрировать, заражая животных других видов, например, B.melitensis – крупный рогатый скот, свиней и лошадей, B. abortus – коз, овец, лошадей и свиней, B.suis – крупный и мелкий рогатый скот, лошадей. Для человека наиболее опасна B.melitensis. [9]

Больные животные выделяют возбудителя с молоком, абортированным плодом, околоплодной жидкостью, влагалищной слизью, мочой, калом.

Из экспериментальных животных к бруцеллёзу чувствительны морские свинки и белые мыши. У мышей после заражения иногда развивается септицемия, морские свинки абортируют, худеют, у них выпадают волосы, возникает генерализованная инфекция.

У многих животных через 1…2 года наступает самовыздоровление. [5]

В структуру клетки бруцеллы входит S-антиген – липидный комплекс; и О-антиген – белковый комплекс. S-антиген трёх основных видов обладает двумя соматическими антигенами: М (melitensis) и А (B.abortus). М – антигена у B.melitensis в 20 раз больше, чем у других видов, в не большом количестве также имеется А – антиген; соотношение антигенов А и М у B.abortus составляет 20:1.B.suis содержит больше М – антигена, чем B.abortus. Предполагают, что эти антигены представлены сложными глюцидо – липидополипептидным комплексом. Они активно индуцируют синтез антител, выявляемых в реакциях преципитации, агглютинации, РСК и других. Особенности антигенной структуры бруцелл позволяют получить моноспецифические А — и М — антисыворотки. Кроме того, был обнаружен поверхностный L-антиген, сходный с Vi – антигеном сальмонелл. [5]

источник

Возбудитель бруцеллеза относится к роду Brucella, который входит в группу грамотрицательных, аэробных/микроаэрофильных палочек и кок­ков к альфа 2 подгруппе класса Proteobacteria. Бруцеллы являются грамотрицательными, факультативными внутриклеточными патогенами, вызывающими заболевание у большого числа животных и человека. Род Brucella состоит из 7 самостоятельных видов, различающихся по биохими­ческим, метаболическим, антигенным и вирулентным характеристикам: Brucella melitensis (преимущественно поражает коз и овец), Brucella abortus (преимущественно вызывает заболевание у крупного рогатого скота), Bru­cella suis (преимущественно инфицирует свиней), Brucella neotomae (вызы­вает поражение кустарниковый крыс), Brucella ovis (вызывает эпидидимиты у баранов), Brucella canis (инфицирует собак) и недавно выделенный вид — Brucella maris (поражает морских млекопитающих). Некоторые виды бруцелл подразделяют на биовары. Для В. melitensis известны 3 биовара, для В. suis — 5 биоваров, и 7 биоваров для В. abortus. В. maris подразделяют на 2 биовара — cetaceae (выделяют от китообразных) и pinnipediae (выделяют от ластоногих).

Морфологически все виды и биовары бруцелл не отличаются друг от друга. Они имеют вид мелких нежных палочек, овоидной или слегка удлиненной формы. При сравнительном изучении морфологии бруцелл в электрон­ном микроскопе клетки В. melitensis преимущественно имеют кокковидную форму, В. abortus и В. suis — палочковидную. Размер бруцелл кокковидных форм 0,3-0,6 мкм, палочко­видных — 0,6-1,5 мкм.

Расположение бруцелл в мазках чаще всего беспорядоч­ное, отмечается более или менее выраженный полиморфизм. Бруцеллы неподвижны, спор не образуют, при определенных условиях (воздействие специфическим бактериофагом, выращи­вание на средах с добавлением 10 % иммунной сыворотки и др. формируют капсулу. Они грамм-отрицательны, при окраске по методу Козловского — розового цвета. Оптимальной темпе­ратурой культивирования бруцелл является 37 °С, максимальный рост наблюдается при рН 6,8-7,2.

Отдельные биовары В. abortus и некоторые представители В. ovis в отличие от В. suis и В. melitensis в первых генерациях требуют для своего роста повышенного (5-10 %) содержания С0₂.

Культуры бруцелл, особенно первые генерации, характери­зуются замедленным темпом роста на питательных средах, поэто­му посевы инфицированного материала от человека и животных инкубируют при 37 °С в течение 10-30 суток. Лабораторные штаммы при пересевах развиваются быстрее, но и у них фаза в среднем составляет 18-30 часов. Бруцеллы хорошо растут на печеночных средах, агаре Мартена, Альбими, эритрит-агаре, сухом агаре «Д», на мясопептонном агаре с добавлением глюкозы и глицерина.

Молодые колонии бруцелл в S-форме на агаре выпуклые, круглые с ровными краями и гладкой поверхностью, при про­смотре в падающем свете — белесоватые, проходящем — янтарно-желтые. Величина колоний может в значительной степени колебаться. На 7-10 сутки выращивания колонии становятся крупными, сохраняют прозрачность, уплощаются. Под микроскопом коло­нии гомогенные с нежной зернистостью в центре.

Культуры бруцелл при посеве штрихом на скошенный агар образуют нежный, прозрачный, блестящий, влажный, постепен­но грубеющий налет маслянистой консистенции. При выращи­вании бруцелл в бульоне наблюдается равномерное помутнение среды. В старых бульонных культурах отмечается пристеночный кольцевидный рост.

Культуры бруцелл при длительном культивировании на плот­ных и, особенно, жидких питательных средах и при неблагоприят­ных условиях роста диссоциируют. Известны R-шероховаты, L- и промежуточные формы колоний. При диссоциации у культур изменяются агглютинабельные, биохимические свой­ства, вирулентность и антигенная структура (табл. 26).

Выделение культуры предварительно проверяют на наличие признаков диссоциации, изучая рост в бульоне, форму колоний, эмульгируемость в физиологическом растворе, прижизненную окраску колоний кристаллическим фиолетовым, термопреципи­тацию и пробу с трипафлавином.

Характеристика S- , R-, и L- форм бруцелл

С диссоциированными культурами проводят дополнительные исследования, подтверждающие их принадлежность к роду Brucella. К ним относят ориентировочную реакцию агглютинации с сывороткой анти-R или посев выделенной культуры на глюкозо-глицериновом агаре; с хлористым кальцием, на котором вокруг роста культуры бруцелл, независимо от состояния диссоциации, образуется белая зона.

Бруцеллы продуцируют каталазу, уреазу, гиалуронидазу, пероксидазу, амилазу, липазу, фосфатазу, цитохромоксидазу и некоторые другие ферменты.

При росте на питательных средах в процессе метаболизма бруцеллы образуют сероводород, интенсивность выделения ко­торого у отдельных видов и биоваров выражена по-разному.

Бруцеллы чувствительны к бактериостатическому действию некоторых красителей. Установлено, что красители вступают в связь с питательным субстратом среды, изменяют ее и среда становится неблагоприятной для роста культуры. Различные виды и биовары бруцелл обладают разной степенью чувстви­тельности к анилиновым краскам.

Известны несколько типов вирулентных бруцеллезных бак­териофагов (Tb, Wb, Fi, BK₂), сходных по морфологии, сероло­гии и спектру литического действия.

Бруцеллы обладают выраженными антигенными свойствами. Установлено, что количество специфических антигенов А и М, присущих S-формам бруцелл, у каждого вида неодинаково. У В. melitensis количественное отношение А антигена к М 1:20, а у В. abortus — 20:1. Различие в антигенной структуре бруцелл удается выявить с помощью моноспецифических сывороток антимелитензис и антиабортус (табл. 27). На основании изучения биохимической активности и антигенной структуры бруцелл исследователи предлагают различные тесты как для идентифи­кации рода бруцелл, так и для дифференциации отдельных видов и биоваров (табл. 27).

Бруцеллы обладают устойчивостью к воздействию низких температур и малоустойчивы к высокой температуре. В жидких культурах при 60 °С они погибают через 30 минут, при 80-85 °С — через 5 минут, при кипячении — моментально. На бруцеллы губительно действует прямой солнечный свет. Различные дезинфицирующие вещества – 2 % раствор карбо­ловой кислоты, 3 % раствор лизола, 0,2 % раствор хлорной извести, 0,01 % раствор хлорамина, 0,1 % раствор сулемы — убивают их течение нескольких минут.

Дифференциальные свойства видов и биоваров рода Brucella

ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ

Работа со штаммами бруцелл является одной из наиболее опасных. С куль­турами этих микроорганизмов и материалом, содержащим их, следует обращаться с тщательной предосторожностью. Рекомендуется все манипуляции с живыми культурами бруцелл проводить только в боксах максимальной защиты или в по­мещениях с вытяжной защитной вентиляцией в полном противочумном костюме. Обеззараживание объектов, инфицированных возбудителем бруцеллеза, осу­ществлять автоклавированием. Петли, шпатели обеззараживать на огне. Защит­ные боксы дезинфицировать парами формальдегида или орошением 3 % раство­ром перекиси водорода.

Работу с вирулентными культурами, особенно с В. melitensis, следует свести до минимума, там, где возможно заменить авирулентными.

Изучение культурально-морфологических и агглютинабельных свойств В. abortus 19 ВА

Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; Нарушение авторского права страницы

источник

Бруцеллез – зоонозное инфекционно-аллергическоезаболевание, склонное к хронизации и протекающее с преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, сердечно-сосудистой, нервной и половой систем.

История открытия возбудителей.

Бруцеллез как заболевание известен давно, со времен Гиппократа , но научное его изучение началось в 60-х годах Х1Х века. В то время оно получило название «средиземноморская, или мальтийская лихорадка» В 1886 г. Д.Брюс обнаружил возбудителя заболевания в мазках из селезенки погибшего от бруцеллеза больного ( впоследствии этот возбудитель был назван В.melitensis). В 1897 году датские ученые выделили сходные микроорганизмы при инфекционных абортах у коров. В 1914 г. Д Траум обнаружил аналогичных возбудителей у больных свиней и назвали их В.suis. В 1920 г эти бактерии были объединены в один род, названный в честь Д.Брюсса бруцеллами. Позднее были выделены другие виды бруцелл: в 1957 г — В.neotomae (от кустарниковых крыс); в 1970 – В. оvis (от барана); В.canis (от гончих собак). Серологические исследования при диагностике бруцеллеза были начаты в 1897 году А.Райтом и Д.Семплом. Большой вклад в изучение заболевания внесли русские ученые А.Ф.Билибин, Г.П.Руднев, А.А.Вершилова и другие.

У животных заболевание проявляется инфекеционнымиабортами.

виды: В. abortus , В.melitensis, В.suis, В.саnis, В ovis, В.neatomae. Наиболее патогенны для человека– первые 3 вида.

Возбудители представляют собой мелкие кокковидные палочки размерами 0,6—1,5 х О,5 – 0,7 мкм, грам (-), неподвижные, спор не образуют. Свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу. Бруцеллы отличаются выраженным полимофизмом; в мазках бактерии располагаются беспорядочно.

Культуральные свойства.

Бруцеллы – строгие аэробы. Они требова- тельны к питательным средам, для их роста необходимы тиамин, ниацин, биотин. Они хорошо растут на печеночном, сывороточном или кровяном агаре (с добавлением 0,5% эритроцитов барана). Особенностьюбруцеллбычьего типа является их потребность в повышенном содержании в атмосфере углекислого газа. На плотных питательных средах бруцеллы образуют выпуклые гладкие мутноватые колонии с перламутровым оттенком (S-формы). При длительном выращивании колонии приобретают желто-зеленый оттенок. Возможна диссоциация в R-формы. В жидких средах наблюдается рост в виде диффузного помутнения. Характерен медленный рост бруцелл, особенно — первых генераций: при посеве из органов появляются через 1-3 недели и более. При пересеве лабораторных культур рост наблюдается через 1-2 дня. Оптимальные условия культивирования: температура — 37 0 С, рН среды – 6,6-7,4.

Биохимическая активность

Выражена слабо: бруцеллы ферментируют глюкозу и арабинозу до кислоты, разлагают белки с образованием сероводорода, восстанавливают нитриты, индол не образуют.

Разделение на виды основано на биохимических различиях, в частнос-

ти, на способности расти на средах с фуксином и тионином, на лизабельно-

сти специфическими фагами, а также на агглютинабельности монороцеп-

торными сыворотками. Т Таблица1

Антигенная структура.

У бруцеллвыявлено до 15 антигенных фракций. Различают родовой и поверхностный антигены. М-антиген доминирует у В.melitensis ; A—антиген преобладает у В. abortus и В suis; R-антиген свойственен шероховатым формам. Третий, поверхностный антиген L, термолабильный, имеет сходство с Vi-антигеном сальмонелл. Имеются общие антигены с возбудителями туляремии и с холерными вибрионами.

Факторы патогенности.

Бруцеллы обладают эндотоксином, имеющим высокую инвазивную способность. Они продуцируют также ферменты патогенности: гиалуронидазу и нейраминидазу. Адгезивные свойства связаны с пилями-1 и белками наружной мембраны. Считают, что возбудитель, обладая высокой инвазивностью, может проникать в организм человека через неповрежденые кожные и слизистые покровы. Бруцеллы могут образовывать капсулу. Кроме того, бруцеллы обладают выраженными аллергогенными свойствами.

Резистентность

Возбудители довольно устойчивы во внешней среде: при температуре 10-13 0 С они могут сохраняться в воде и влажной почве до 5 месяцев, в молоке – 9 месяцев, в сыре – до 1 года. Они устойчивы к низким температурам, и в замороженном мясе выживают до 5 месяцев. Хуже они переносят высокую температуру: при 70 0 С погибают в течение 10 минут, при кипячении – мгновенно. Чувствительны к 3 % раствору хлорной извести. 1% хлорамину, 0,5% лизолу, 2% формалину, которые губят их за 5 минут

Эпидемиоогия.

Основной источник и резервуар инфекции — больныедомашниеживотные: овцы, козы, свиньи, крупный рогатый скот. В редких случаях источником инфекции могут быть лошади , верблюды и некоторые другие животные, которые выделяют возбудителя с молоком, мочой, калом, околоплодной жидкостью.

У человека наиболее часто заболевание вызывается В.melitensis, которые обусловливают наиболее тяжелые формы заболевания. Реже человек заражается В.abortus от крупного рогатого скота, однако клинически выраженные инфекции при этом регистрируются редко. Наиболее опасными в смысле заражения являются периоды отелов скота, так как в околоплодной жидкости содержится большое количество возбудителей. Больной человек не опасен для окружающих.

Механизмы заражения — разнообразны; наиболее частый –фекальноно-оральный. Большую опасность представляют сырое молоко и молочные продукты, не подвергающиеся в процессе приготовления тепловой обработке (брынза, сыр). Мясо представляет меньшую опасность – только в случаях его недостаточной тепловой обработки. Контактно-бытовой путь заражения возможен при попадании возбудителя на поврежденные кожные или слизистые покровы при уходе за больными животными; при оказании им родовспомогательной помощи или при разделке туш больных животных. Воздушно-капельный путь заражения описан при вдыхании воздушно-пылевой смеси, содержащей инфицированные частицы шерсти, навоза, земли во время уборки помещения. Известны также случаи лабораторного заражения медицинских работников.

Для бруцеллеза свойственен выраженный профессиональный характер заболевания

Патогене и клинические особенности..

Бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки или кожные покровы, не оставляя никаких изменений в области входных ворот. Лимфогенным путем возбудители заносятся в региональные лимфоузы и накапливаются в них. Они подвергаются фагоцитозу, но способны выживать внутри фагоцитов за счет выделения низкомо- лекулярных факторов, угнетающих слияние фагосом с лизосомами . Внутри фагоцитов бруцеллы могут формировать L-формы и длительно перси- стировать в организме. Обратный переход в исходные формы обуслов- ливает рецидив болезни. Из разрушенных макрофагов возбудители попадают в кровоток и диссиминируют в печень, селезенку, почки, костный

мозг, эндокард. В пораженных органах образуются очаги некроза, окруженные инфильтратами. Возбудители могут попасть в молочные железы человека и появляться в грудном молоке. Из-за метастатических очагов размножения бруцелл в органах в клинической картине заболевания появляются признаки очаговых поражений со стороны опорно-двигательного аппарата, нервной и других систем. С выходом возбудителей в кровеносное русло связаны явления бактеремии и эндотоксинемии. При хроническом процессе формируются аутоиммунные механизмы

Клинические особенности.Инкубационный период – 1-4 недели(он может длиться до 2-3 месяцев). Болезнь начинается с озноба, подъема температуры, нарастающей интоксикации, слабости, могут развиваться явления орхита, эпидидимита, артрита. Поражения нервной системы проявляются в виде плекситов и радикулитов. У женщин может развиться оофорит, эндометрит, нарушения менструального цикла.

При острой форме заболевания на 4-6 день формируется состояние замедленной гиперчувствительности., что выявляется кожной пробой Бюрне.

Постинфекционный иммунитетформируется нестойкий, гуморальный и клеточный, нестерильный. При этом образуются неполные антитела. Возможны повторные заболевания.

Профилактика

Неспецифическаяие мероприятия заключаются в соблюдении правил личной гигиены и режима обработки сельскохозяйственной продукции; в осуществлении профилактики заболеваемости среди животных.

Специфическая профилактика.В эндемичных очагах инфекции проводятвакцинацию живой вакциной, получаемой из аттенуированного штамма В. аbortus. Вакцинация – накожная, однократная. При отрицате-льной кожной пробе и отсутствии выработки антител проводится ревакцинация.

Терапия основана на применении антибиотиков широкого спектра действия. Препараты выбора: тетрациклины, аминогликозиды (стрептоми-

цин); в тяжелых случаях – рифампицин Для лечения хронических форм заболевания применяется убитая бруцеллезная вакцина.

Микробиологическая диагностика.

При бактериологическом методе исследуемым материалом является: кровь, пунктат костнго мозга, моча. Посев производится в 2 флакона, в одном из них создается повышенная концентрация углекислого газа. При появлении видимого роста делают пересев на плотную питательную среду для выделения чистой культуры и последующей идентификации бактерий в РА с видовыми сыворотками.

С целью идентификации выделенных возбудителей используется комплекс признаков, отличающих виды друг от друга: потребность в углекислом газе при культивировании; способность расти на питательных средах с красителями (основной фуксин, тионин); образование сероводо- рода; способность синтезировать уреазу; чувствительность кбактериофагам

Серодиагностика осуществляется в РА Хеддельсона и Райта, Кумбса, РТГА.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Да какие ж вы математики, если запаролиться нормально не можете. 8273 — | 7231 — или читать все.

193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Бруцеллез — своеобразное инфекционное заболевание людей и животных, вызываемое бактериями рода Brucella. В России ежегодно регистрируется около 500 первичных заболеваний людей бруцеллезом.

Человек заражается бруцеллезом главным образом от домашних животных (овцы, козы, коровы, свиньи, северные олени — главный резервуар возбудителя в природе). Бруцеллез существует давно и была описана под названиями, определяемыми ее географическим распространением (мальтийская, неаполитанская, гибралтарская, средиземноморская лихорадка).

Возбудитель открыт в 1886 г. Д. Брюсом, который обнаружил его в препарате из селезенки солдата, умершего от мальтийской лихорадки, и назвал мальтийским микрококком — Micrococcus melitensis. Было установлено, что основным носителем его являются козы и овцы, а заражение происходит при употреблении сырого молока от них. В 1897 г. Б. Банг и Б. Стрибольт обнаружили возбудителя инфекционного аборта коров — Bacterium abortus bovis, а в 1914 г. Дж. Траум открыл возбудителя инфекционного аборта свиней — Brucella abortus suis. Проведенное в 1916-1918 гг. А. Ивенс сравнительное изучение свойств Brucella melitensis и Brucella abortus bovis показало, что они почти не отличаются друг от друга по многим свойствам. В связи с этим было предложено объединить их в одну группу, названную в честь Брюса — Brucella. В 1929 г. И. Хеддльсон включил в эту группу Brucella abortus suis и предложил род Brucella разделить на 3 вида: Brucella melitensis (Micrococcus melitensis), Brucella abortus (Brucella abortus bovis) и Brucella suis (Brucella abortus suis).

Заболевание людей и животных, вызываемое бруцеллами, было решено называть бруцеллезом. В последующем род Brucella пополнился еще тремя видами: Brucella ovis выделен от баранов, страдающих эпидидимитами (1953), Brucella neotomae — от кустарниковых крыс (1957) и Brucella canis — от гончих собак (1966). По классификации Берджи (2001), бруцеллы относятся к классу Alphaproteobacteria.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9]

Бруцеллы обладают сходными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами. Они представляют собой грамотрицательные мелкие кокковидные клетки диаметром 0,5-0,7 мкм и длиной 0,6-1,5 мкм, располагаются беспорядочно, иногда парами, не имеют жгутиков, не образуют спор и капсул. Содержание Г + Ц в ДНК составляет 56-58 мол %.

Бруцеллы являются аэробами или микроаэрофилами, в анаэробных условиях не растут. Температурный оптимум для роста 36-37 °С; рН 7,0-7,2; хорошо растут на обычных питательных средах, но лучше — с добавлением сыворотки или крови. Рекомендуемые среды: питательный агар с добавлением сыворотки (5 %) и глюкозы; агар, приготовленный на картофельном настое, с добавлением 5 % сыворотки; кровяной агар; мясо-пептонный бульон. Особенностью Brucella abortus является потребность ее в повышенном содержании С02 (5- 10 %) в атмосфере роста. Очень характерен для бруцелл медленный рост, особенно в первых генерациях: при высеве от человека и животных рост иногда появляется через 2-4 нед. Колонии бруцелл бесцветны, выпуклые, круглые — S-формы, или шероховатые — R-формы, нежные и прозрачные вначале, с возрастом мутнеют.

Колонии Brucella canis, Brucella ovis и 5-го биотипа Brucella suis всегда имеют R-форму. Рост бруцелл в бульонных средах сопровождается равномерным помутнением. Для роста бруцелл необходимы тиамин, биотин, ниацин. Бруцеллы ферментируют глюкозу и арабинозу с образованием кислоты без газа, не образуют индола, восстанавливают нитраты в нитриты. Образование сероводорода наиболее сильно выражено у Brucella suis.

В общей сложности у бруцелл с помощью иммуноэлектрофореза экстрактов, приготовленных из разрушенных ультразвуком клеток, обнаружено 10-14 антигенных фракций. Бруцеллы имеют общий родоспецифический антиген, различные другие соматические антигены, в том числе видоспецифические М (преобладает у Brucella melitensis), А (преобладает у Brucella abortus) и R (у шероховатых форм). Антигены М и А обнаруживаются также и у других видов (биоваров) бруцелл, но в разных соотношениях, что необходимо учитывать при их идентификации. Обнаружены антигены, общие с Francisella tularensis, Bordetella bronchiseptica и Y. enterocolitica (серотип 09). В связи с тем, что некоторые признаки у бруцелл варьируют, вид Brucella melitensis подразделяют на 3 биовара, вид Brucella abortus — на 9 и В. suis — на 5 биоваров. Для их дифференциации на виды и биотипы и идентификации используют комgлекс признаков, включающий в себя, помимо морфологических и тинкториальных свойств, также потребность в С02 для роста, способность расти на средах в присутствии некоторых красителей (основной фуксин, тионин, сафранин), выделять H2S, образовывать уреазу, фосфатазу, каталазу (активность этих ферментов наиболее сильно выражена у Brucella suis, они же не растут на среде с сафранином), чувствительность к тбилисскому бактериофагу, агглютинация моноспецифическими сыворотками. В случае необходимости используют дополнительные метаболические тесты: способность окислять некоторые аминокислоты (аланин, аспарагин, глута-миновую кислоту, орнитин, цитруллин, аргинин, лизин) и углеводы (арабинозу, галактозу, рибозу, D-глюкозу, D-эритритол, D-ксилозу).

Четвертый биовар Brucella suis, поскольку его основным носителем являются не свиньи, а северные олени, и с учетом других его особенностей целесообразно выделять в качестве самостоятельного вида Brucella rangiferis.

К пятому биовару В. suis относят культуры, выделенные от абортировавших коров и овец и имеющие стойкую R-форму бруцелл.

Отношение бруцелл к тбилисскому фагу: в обычном рабочем разведении фаг лизирует только В. abortus. Однако в дозе, равной десяти рабочим, фаг лизирует, хотя и слабо, штаммы Brucella suis и Brucella neotomae.

[10], [11], [12], [13], [14], [15], [16]

источник

Возбудителем бруцеллеза является короткая палочка Бруцелла, которая была названа в честь ученного, открывшего ее в 1886 году.

Возбудителем бруцеллеза выступают мелкие бактерии рода Brucella, относящиеся к различным видам. Род Brucella представляет собой компактную, достаточно обособленную генетическую группу.

Род Brucella по систематике Берги относится к родам с неясным систематическим положением. Род включает шесть видов: Brmelitensis, Br.abortus, Br.suis, Br.ovis, Br.neotomae и Br.canis, которые различаются, в основном, по культуралышм и биохимическим свойствам.

Морфология, тинкториальные и культуральные свойства бруцелл.

По морфологическим признакам различные виды и биотипы бруцелл неотличимы друг от друга. Это очень мелкие микроорганизмы со свойственным им полиморфизмом. В микроскопических препаратах они могут встречаться одновременно в шаровидной, овоидной и палочковидной формах.Н. Н. Островская (1961г.) отмечает, что у бактерий Вr. abortus и Вr. suis преобладают удлиненные, а у Вr. тelitensis — кокковидная формы. Чаще всего в препарате наблюдается беспорядочное расположение одиночных бактерий, но иногда они располагаются в виде цепочки или попарно. Размер клеток колеблется от 0,3 до 0,6 мк для кокковых и от 0,6 до 1,5 мк для удлиненных форм.

Бруцеллы не обладают подвижностью, не образуют спор. При некоторых условиях у них может появляться капсула (Нuddleson, 1943г.; Н.Д. Анина-Радченко, 1954г.; Н.Н. Островская и Э.Н. Князева, 1957г.). Бруцеллы сходны между собой по субмикроскопическому строению клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, цитоплазмы и нуклеоида и не имеют принципиальных отличий в этом отношении от других грамотрицательных бактерий (Н.Н. Островская, 1972г.).

Бруцеллы окрашиваются всеми анилиновыми красителями: при окраске по Романовскому приобретают нежно-фиолетовый цвет; по Граму не красятся. Предложены дифференциальные способы окраски бруцелл, которые основаны на свойстве этих бактерий сохранять первичную окраску при переокрашивании препарата другими контрастными красителями. Большое распространение получил простой способ дифференциальной окраски по Е.В. Козловскому (1936г.).

Техника окраски по этому способу сводится к следующему. Высушенные на воздухе препараты фиксируют на пламени и окрашивают 2-процентным водным раствором сафранина с подогреванием до появления пузырьков; затем препарат промывают водой и дополнительно окрашивают 0,75-1-процентным водным раствором малахитовой зелени в течение 0,5-1 мин. Бруцеллы сохраняют красный цвет, а другие бактерии и тканевые клетки окрашиваются в зеленый цвет.

Выращивание культуры бруцелл удается на обычных, применяемых для культивирования бактерий питательных средах, имеющих нейтральную или слабощелочную реакцию (рН 6,8-7,2). Рост получают в аэробных условиях при температуре 37°. Некоторые виды и биотипы бруцелл для своего роста, особенно в первых генерациях при выделении от естественно больных животных, требуют повышенной концентрации (5-10%) СО2 в атмосферном воздухе.

По сравнению с другими гетеротрофными бактериями бруцеллы более требовательны к питательным средам. Поэтому для первичного выделения и дальнейшего культивирования этих бактерий рекомендованы специальные питательные среды. С этой целью успешно используются печеночные и мясо-печеночные среды, особенно с добавлением глицерина (2%) и глюкозы (1%). С несомненным успехом применяется разработанная Н.В. Плоскиревым сухая среда «Д», основу которой составляют рыбный и дрожжевой гидролизаты. По данным автора и других исследователей (Н.Н. Островская и А.А. Голубева, 1958г.), среда «Д» имеет некоторые преимущества перед печеночной средой. Хорошие результаты получали при культивировании бруцелл на картофельной среде (Нuddleson, 1943г.; В.Е. Корнеева, 1949 г.и другие) и на среде Альбими.

Объединенный Комитет экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу (1970г.) для первичного выделения и для дальнейших пересевов культур бруцелл рекомендует такие основные среды: сывороточно-декстрозный агар; картофельный агар плюс сыворотка; триптикозно-соевый и триптозный агар; кровяной агар (5% овечьей крови в агаре основной среды).

Для выделения культур бруцелл из загрязненных посторонней микрофлорой материалов рекомендуется пользоваться этими же средами после добавления к ним не мешающих росту бруцелл антибиотиков: полимиксина, бацитрацина, циклогексамида, актидиона.

Изготовленная питательная среда может быть признана пригодной только в том случае, если на ней наблюдается рост большинства штаммов бруцелл при малом (5-10 микробных клеток) инокуляте.

Некоторые исследователи изучали потребность бруцелл в источнике азота и дополнительных факторах роста. О.В. Кондратьева и В.М. Степанов (1968, 1969г.) сделали вывод, что рост бруцелл обеспечивается при наличии в среде только 6 аминокислот: глютаминовой, L-аланина, лизина, метионина, гистидина, цистеина. Важнейшим источником азота, по их мнению, являются глютаминовая кислота и цистеин. Подчеркивается также потребность бруцелл в комплексе витаминов группы В (В1 В2, В6) и в никотиновой кислоте. Витамин А необходим для роста только некоторых штаммов бруцелл.

Для бруцелл характерен замедленный рост, особенно первых генераций культуры. Поэтому посевы материалов, взятых от естественно зараженных животных, следует выдерживать в термостате до 4-5 недель, если не получен рост в более ранние сроки. На хорошо подобранной среде лабораторные штаммы бруцелл дают обильный рост через 24-48 часов.

При посеве бруцелл из густой взвеси бактерий на скошенный агар образуется нежный с маслянистым блеском прозрачный слой, который постепенно грубеет, мутнеет, становится менее прозрачным и приобретает серый с голубоватым оттенком цвет. Почти такие же изменения наблюдаются при посеве бруцелл штрихом.

В посевах на бульон наблюдается постепенное равномерное помутнение среды. При длительном пребывании бульонной культуры в термостате на дне сосуда образуется рыхлый осадок, а на поверхности среды медленно образуется пристеночное кольцо или кольцо и пленка.При разреженном посеве на агаровые пластинки в чашках Петри бруцеллы обычно растут в виде круглых, выпуклых, слегка прозрачных колоний с ровным краем. Поверхность колоний гладкая, с маслянистым блеском. При удлинении периода роста колонии становятся менее прозрачными.

Неnrу (1933г.), Нuddleson (1952г.), Раrnas и Сhodkowski (1959г.), П.Н. Жованик (1972г.) изучали колонии бруцелл под микроскопом при боковом освещении (техника этого исследования приводится в главе «Изменчивость бруцелл»). При этом освещении удалось обнаружить, что культуры бруцелл нередко бывают неоднородными (гетерогенными) по составу клеток. Клетки S-формы образуют круглые выпуклые колонии с ровными краями. При боковом освещении они имеют гладкую или нежно-зернистую поверхность и серо-голубое с зеленым оттенком свечение. На этом фоне выделяется небольшой красновато-желтый центр колонии. Спонтанно возникающие в процессе популяционной изменчивости клетки R-, М — или иной формы образуют колонии, которые резко отличаются от колоний S-формы, особенно по характеру свечения.

Культуры бруцелл хорошо сохраняются на твердых питательных средах при пересеве их через каждые 30-45 дней. Лучше хранить эти культуры в высушенном виде. При высушивании используют среду, содержащую 1,5% желатины и 10% сахарозы, растворенных в дистиллированной воде. Хранят высушенную культуру в хорошо запаянных ампулах без доступа воздуха при температуре 7°.

Патогенность и вирулентность бруцелл.

В организме зараженных животных бруцеллы живут и размножаются главным образом внутри клеток ретикуло-эндотелиальной системы. Это дает основание относить их к числу внутриклеточных паразитов, хотя иногда они могут находиться и внеклеточно. Проникнув в организм животного, бруцеллы обычно задерживаются в лимфоидных тканях и обуславливают развитие патоморфологических изменений в виде ретикуло-эндотелиальных пролифератов и некробиотических очагов. Эти патологические изменения зависят от степени вирулентности данной культуры.

Вирулентность каждого штамма культуры бруцелл является его индивидуальным свойством и в известной мере количественным выражением патогенности. Ее измеряют обычно величиной минимальной инфицирующей дозы (ИД), способной вызвать заражение всех или большинства опытных животных.

Как среди лабораторных, так и среди свежевыделенных культур бруцелл могут встречаться штаммы с весьма различной степенью вирулентности. В опытах на морских свинках высоковирулентные штаммы всех трех классических видов бруцелл вызывают развитие генерализованной инфекции уже в дозе 5-10 микробных тел (м. т.). По данным многих авторов и результатам наших собственных исследований, развитие генерализованной инфекции после такого заражения наступает обычно в течение 4-5 недель.

Для многих вирулентных штаммов бруцелл одна ИД составляет 25-50 м. т., а иногда и больше. Существуют слабовирулентные и авирулентные штаммы бруцелл. Культуры таких штаммов плохо приживаются в организме животных.

Исследователи определяли минимальную инфицирующую дозу бруцелл и в опытах на сельскохозяйственных животных. Нuddleson (1943г.) приводит результаты опытов Мак Ивена с соавторами и Хатчинга, в которых исследователи подвергли конъюнктивальному заражению осемененных телок разными дозами культуры Вr. abortus.

Хаддлсон подчеркивает, что для коров средней чувствительности минимальная инфицирующая доза культуры Вr. abortus составляла около 1 миллиона бактерий (м. т.) и что в опытах Хатчинга значительно меньшая доза и в более короткий срок вызывала появление первого доказательства инфекции в виде положительной реакции агглютинации. При подкожном заражении овец высоковирулентной культурой Вr. abortus доза 5-25 тыс. бруцелл вызывала лишь регионарную инфекцию (П.А. Вершилова, 1961г.). Развитие генерализованной инфекции регулярно получали после введения такой культуры в дозе 100 тыс. микробных клеток. При нанесении культуры на конъюнктиву или слизистую влагалища в дозе не менее 1-500 миллионов бруцелл наблюдали регулярное заражение овец.

У бруцелл нередко наблюдается спонтанное понижение вирулентности. Это может быть связано с популяционной изменчивостью культуры. Появляющиеся в культуре штамма измененные клетки вследствие свойственному им селективному преимуществу постепенно увеличиваются в количестве и начинают преобладать в популяции клеток, придавая культуре новые измененные свойства. Ослабленную вирулентность можно вновь повысить. Для этого, используя действие закона естественного отбора, культуры подвергают многократным пассажам через организм высокочувствительных к бруцеллезу морских свинок или каких-либо других чувствительных к бруцеллезной инфекции животных.

В сравнимых условиях опыта на морских свинках сопоставляли Вr. abortus и Вr. melitensis (П.Ф. Здродовский и П.В. Воскресенский, 1930), а также Br. Abortus и Вr. suis (Харди и др., 1931г.) с целью обнаружения различий в патогенности у разных видов бруцелл. Результаты исследований были противоречивы, поэтому выделить тот или иной вид бруцелл, как наиболее патогенный для морских свинок, не представилось возможным.

Делались попытки по оценке вирулентности бруцелл на основе их ферментативной активности и особенностей обмена веществ. Нuddleson (1943), изучив у всех трех классических видов бруцелл активность фермента каталазы, полагал, что высокой степени вирулентности соответствует более высокая каталазная активность штамма. Е.А. Драновская (1968г) отмечает, что слабовирулентные штаммы Br. abortus и Вr. melitensis отличались от вирулентных штаммов более высокой активностью некоторых дегидрогеназных систем, участвующих в энергетическом обмене.

Антигенная структура бруцелл. Естественное заражение бруцеллезом, как и искусственное введение культуры бруцелл, обычно сопровождается образованием в организме животного специфических антител. Это явление давно используется для диагностики болезни и серологической дифференциации различных видов и типов бруцелл.

Еще в 1932 г. Wilson и Miles установили, что клетки всех трех классических видов бруцелл, находящихся в обычной для них гладкой S-форме, содержат два серологически отличимых антигена А и М и что каждый из этих антигенов у различных видов бруцелл содержится в неодинаковом количестве. Несколько позже Мiles (1939г.) уточнил, что у Br. melitensis количественное соотношение между антигенами А и М может быть выражено примерно как отношение 1: 20, а у Вr. abortus и Вr. suis — как 20:

1. Это открытие дало основание для использования адсорбированных сывороток при отнесении исследуемой культуры бруцелл либо к виду Br. melitensis, либо в группу двух других видов. Клетки Br. suis имеют несколько большее количество антигена М, чем клетки Br. abortus. Но эта разница не столь значительна, чтобы ею можно было воспользоваться для серологической дифференциации этих видов бруцелл. Впоследствии накапливалось все больше фактов, которые свидетельствовали, что существенные количественные различия в содержании А и М антигенов наблюдается не только в культурах, принадлежащих к разным видам, но и у разных штаммов одного и того же вида. Все более частые случаи выявления серологических вариантов внутри того или иного вида бруцелл значительно затрудняли использование метода абсорбции агглютининов для целей межвидовой серологической дифференциации этих бактерий. Результат такой дифференциации был очень условным и относительным (П.Ф. Здродовский, 1953г.). В конце концов все это привело к признанию, что дифференциация бруцелл по РА с моноспецифической сывороткой имеет значение в основном только при идентификации биотипов внутри каждого из трех классических видов бруцелл.

Используя разные способы экстрагирования, из культуры бруцелл удается выделить липоидно-полисахаридно-белковый комплекс, который обладает специфическими антигенными и токсическими свойствами. При исследовании этого антигенного комплекса с помощью метода преципитации в геле установлено, что с гомологической сывороткой он дает до 6 линий преципитации. Иными словами, в экстрактах из бруцелл с помощью реакции преципитации в геле удается обнаружить до б различных антигенов. Метод иммуноэлектрофореза дает возможность выявить у бруцелл значительно большее количество антигенных компонентов.

С помощью метода преципитации в геле было показано также, что у бруцелл имеются поверхностные и глубинные антигены.

И.И. Дубровская (1950-1968г.) установила, что антигенные комплексы у бруцелл состоят из двух антигенов. Один из них — это антиген типа Буавена, содержащий полисахариды, липиды и белок, а другой, так называемый четвертый компонент, также содержит специфический полисахарид, но другой природы, белковое вещество и дезоксирибонуклеиновую кислоту. У разных видов бруцелл эти антигены содержатся в неодинаковом количестве. В отличие от всего антигенного комплекса четвертый его компонент, проявляя серо-логическую активность и аллергенные свойства, не обладает токсичностью.

Исследуя культуры бруцелл S — и R-формы, И.И. Дубровская обнаружила, что химический состав их антигенных комплексов был совершенно различным. Антигенные вещества из R-культур содержали мало белка и не имели ДНК содержащего компонента. Анти-генный комплекс из культуры бруцелл К-формы отличался от антигенов из S-культур и по качественному составу полисахаридов.

В реакции преципитации в геле антигены из R-формы, показали значительно меньшую активность, чем антигены S-формы, и давали с гомологичной сывороткой только одну линию преципитации.

Шероховатые формы всех видов бруцелл имеют общий для них К-антиген и не содержат специфических антигенов А и М. Серологическим методом их нельзя дифференцировать (Лембке и Кернлайн, 1950).

Выживаемость бруцелл во внешней среде и в продуктах животноводства.

Литературные данные о выживаемости бруцелл в различных объектах внешней среды неоднородны. В опытах 3.А. Кучеренко (1934г.) в поверхностных слоях почвы бруцеллы сохраняли жизнеспособность до 40 дней, на глубине 5-8 см — до 60, а в унавоженной почве — до 100 дней. По данным М.Е. Авакумова (1934г.), в почве и навозе при низкой температуре бруцеллы выживали до 4,5 месяца. П.А. Вершилова и А.А. Голубева (1972г.) указывают, что летом в почве бруцеллы сохраняют жизнеспособность в течение 3 месяцев, а зимой — до 4,5 месяца, в буртах навоза при температуре 50 — 67° — в течение 25 дней и более длительное время при температуре в буртах 37-42°.

В воде при интенсивном заражении бруцеллы могут сохраняться жизнеспособными от 45-90 до 150 дней (П.Ф. Здродовскии, 1953г.). В наших опытах при интенсивном заражении (10е м. т. в 1 мл воды) проб стерильной водопроводной воды (которую перед стерилизацией смешивали с садовой почвой) бруцеллы выживали значительно более продолжительное время. В опытах было использовано два штамма Вr. abortus, пробы хранили при комнатной температуре в шкафу. При периодических отсевах (через каждые 2 — 3 недели) на МППБ и МППА один штамм (2738) перестал давать рост через 7 месяцев, а другой (1410) — более чем через 15 месяцев.

О выживаемости бруцелл в продуктах животноводства П.А. Вершилова и А.А. Голубева (1972г.) приводят такие данные: в молоке бруцеллы выживали в течение 10-273 дней, в масле-‘ 10-142 дней, в сыре — от 25 дней до года, в брынзе — до 45 дней, в кислом молоке-2-30 дней, в кефире-до 11 дней, в замороженном мясе — более 320 дней, в соленом масле — 30-113 дней, в шерсти — 14-90 дней, в шкурках ягнят — до 2 месяцев.

В виде культуры на твердой питательной среде в хорошо закрытых или еще лучше в залитых парафином пробирках бруцеллы сохраняются жизнеспособными в течение многих недель, а в виде лиофильно высушенной культуры — годами.

Сравнительно высокую чувствительность бруцеллы проявляют к действию нагревания, солнечных лучей и различных средств химической дезинфекции, В жидкой культуре при температуре 60° бруцеллы погибают через 30 мин, при температуре 70° — через 10 мин, а при кипячении — почти мгновенно.

рямой солнечный свет в зависимости от интенсивности инсоляции убивает бруцелл в течение от нескольких минут до 3-4 часов (Е.С. Орлов, 1974г.), рассеянный свет убивает их через 7-8 дней. Действие употребляемых средств химической дезинфекции характеризуется такими данными: 2-процентный раствор фенола, 1-процентный креолин, 0,5-процентный лизол, 1-процентная хлорная известь, 1-2-процентный формалин, 0,01-процентный хлорамин, 1-процентный раствор НС1 в 8-процентном растворе NaС1 убивают бруцелл в течение нескольких минут (П.Ф. Здродовский).

Для дезинфекции животноводческих помещений наиболее часто применяются: осветленный раствор хлорной извести, содержащей 2% активного хлора, 2-процентный раствор едкого натра, 20-про-центная взвесь свежегашеной извести, 2-процентный раствор формальдегида, 4-процентная горячая эмульсия дезинфекционного креолина, 5-процентная эмульсия нафтализола, 5-процентный горячий раствор кальцинированной соды. Пастеризацию молока производят при температуре 70° в течение 30 мин или при температуре 85-90° в течение 20 секунд.

источник