Аллергические и серологические методы диагностики бруцеллеза

5.1. Метод аллергического исследования основан на выявлении у больных бруцеллезом

животных повышенной чувствительности замедленного типа к специфическому аллергену.

5.2. Аллергический метод применяют для исследования на бруцеллез крупного рогатого скота,

буйволов, овец, коз, свиней и северных оленей, не подвергавшихся прививке вакцинами против

бруцеллеза, в случаях, предусмотренных инструкцией о мероприятиях по профилактике и

ликвидации бруцеллеза животных.

Аллергическое исследование на бруцеллез животных разрешается проводить только

ветеринарным врачам или фельдшерам со средним специальным образованием под наблюдением

5.3. Для аллергической диагностики бруцеллеза у животных применяют бруцеллин ВИЭВ.

Бруцеллин — стерильный биологический препарат, представляет собой прозрачную жидкость

коричневато-желтого цвета без опалесценции, содержащую продукты жизнедеятельности и

специфические вещества, извлеченные из бруцелл.

Флаконы с бруцеллином должны быть плотно закрыты пробками и закатаны алюминиевыми

колпачками. При встряхивании и переворачивании флакона препарат не должен просачиваться через

пробку. На каждом флаконе должна быть этикетка (или надпись) с обозначением наименования

биопредприятия, изготовившего бруцеллин, наименования препарата и его количества, номера

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

серии, даты выпуска, срока годности, номера госконтроля, условий хранения, стандарта (ГОСТ) и

5.4. Бруцеллин используют только в день вскрытия флакона. Он пригоден для применения в

течение 18 месяцев со дня изготовления при условии хранения в темном сухом помещении при

5.5. Каждый флакон с бруцеллином перед применением просматривают. При обнаружении в

препарате каких-либо примесей, плесени, хлопьев, при нарушении целостности стекла или укупорки,

отсутствии надписи на флаконе, а также бруцеллин, подвергавшийся замораживанию и давший

осадок или помутнение, к применению не допускается.

5.6. Для введения животным бруцеллина используют короткие инъекционные иглы (N 0420 —

0813) или иглы для внутрикожных инъекций с двумя трубками (N 0706, ТУ 46-22-607-80) и шприцы,

снабженные бегунком, вместимостью 2 или 5 мл. При исследовании свиней можно применять

Шприцы и иглы перед и после их использования стерилизуют кипячением в течение 30 минут в

дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих средств. Безыгольные

инъекторы стерилизуют в соответствии с инструкцией по их использованию.

Во время исследования животных инъекционные иглы меняют перед каждым наполнением

шприца бруцеллином, а в промежутках между инъекциями препарата иглу держат в ватном тампоне,

5.7. Непосредственно перед применением бруцеллина алюминиевый колпачок флакона с

препаратом приоткрывают, резиновую пробку обрабатывают спиртом, прокалывают инъекционной

иглой и шприцем через нее набирают необходимое количество аллергена.

Бруцеллин вводят животным под кожу нижнего века на 1 см ниже края века со стороны

наружного угла глаза (пальпебральная проба): овцам, козам и оленям в дозе 0,5 мл, крупному

рогатому скоту и буйволам в дозе 1,0 мл.

Вводить бруцеллин под кожу века, имеющую травматические повреждения, уплотнения,

абсцессы и другие поражения, не разрешается. Животных с заболеванием глаз или с густым

шерстным покровом в области век метят и вводят им бруцеллин внутрикожно в центре одной из

подхвостовых складок в дозах: овцам и козам — 0,2 мл и крупному рогатому скоту и буйволам — 0,3 мл

Свиньям бруцеллин вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины, ближе к

основанию уха в дозе 0,2 мл. Правильность внутрикожной инъекции препарата контролируют по

образованию бугорка размером с горошину.

При инъекции препарата животным обязательно соблюдение правил асептики. Участок кожи

перед уколом протирают ватой, смоченной в спирте или 3-процентном растворе борной кислоты.

5.8. У животных, больных бруцеллезом, на месте введения бруцеллина наступает

воспалительная реакция в виде плотной или тестоватой припухлости, обычно хорошо видимой при

осмотре; у свиней, кроме того, может развиваться гиперемия, иногда кровоизлияние в виде темно-

красного пятна в центре отека. У здоровых животных местная реакция не возникает.

5.9. Реакцию на бруцеллин у овец, коз, оленей, крупного рогатого скота и буйволов учитывают

один раз через 48 часов, у свиней — два раза, через 24 и 48 часов после введения препарата, путем

осмотра, а при неясно выраженной реакции — пальпацией места инъекции.

При обнаружении на месте введения препарата припухлости реакцию оценивают как

В случае неясно выраженной реакции пальпируют место введения препарата и сравнивают с

кожей века другого глаза (или подхвостовой складки), а у свиней — с кожей основания другого уха.

Если обнаруживают хотя бы небольшую разницу, реакцию считают положительной. При отсутствии

указанных признаков реакции результат исследования считают отрицательным.

Реагирующих на бруцеллин животных метят и выделяют из отары (стада).

5.10. С животными, признанными при исследовании бруцеллина реагирующими

положительно, поступают согласно Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации

5.11. После применения бруцеллина у животных можно в любые сроки брать кровь для

исследования на бруцеллез серологическими методами.

5.12. Проведение аллергического исследования на бруцеллез животных оформляют актом с

приложением к нему описи реагировавших животных (указывают инвентарный номер, пол и возраст

животных, характер реакции на бруцеллин). Один экземпляр акта направляют главному ветврачу

района, другой хранят в хозяйстве.

С выходом настоящих Методических указаний утрачивают силу:

«Наставление по лабораторной диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных» от 17

«Наставление по диагностике бруцеллеза у коров методом кольцевой реакции (КР) с молоком»

«Наставление по применению бруцеллина ВИЭВ для аллергической диагностики бруцеллеза у

мелкого рогатого скота и свиней» от 24 декабря 1969 г.;

«Временное наставление по клинической и лабораторной диагностике инфекционного

заболевания овец, вызываемого бруцеллой овис (инфекционный эпидидимит баранов)» (приложение

к циркулярному письму Главного управления ветеринарии МСХ СССР от 10 марта 1970 г. N 116-9);

«Наставление по постановке и учету реакции агглютинации при диагностике бруцеллеза

сельскохозяйственных животных» от 19 мая 1964 г. с изменениями и дополнениями, внесенными 11

«Наставление по постановке и учету реакции связывания комплемента (РСК) и реакции

длительного связывания комплемента (РДСК) при диагностике бруцеллеза у животных» от 27 мая

«Наставление по постановке и учету пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал

антигеном (роз бенгал проба или РБП) при диагностике бруцеллеза у животных» от 12 декабря 1978 г.

Указания по диагностике бруцеллеза животных разработаны Всесоюзным Ордена Ленина

научно-исследовательским институтом экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко

(проф. П.С. Уласевич, кандидаты вет. наук А.Н. Касьянов и В.А. Ромахов), Всесоюзным

государственным ордена Трудового Красного Знамени научно-контрольным институтом

ветеринарных препаратов МСХ СССР (канд. вет. наук К.В. Шумилов), Главным управлением

ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР (Э.С. Плотников) и Центральной

ветеринарной лабораторией (Б.И. Антонов, Т.А. Сысоева, В.В. Борисова).

источник

Серологические реакции и аллергическая проба являются общедоступными методами и применяются для диагностики бруцеллеза наряду с бактериологическим и биологическим методами.

В случае малой обсемененности пробы и отрицательных результатов, полученных при посеве исследуемого материала на питательные среды и заражении лабораторных животных, серологический метод может быть единственным, позволяющим диагностировать бруцеллез. В зависимости от целей исследования используют те или иные серологические методы.

При проведении эпидемиологического исследования бруцеллеза в очагах применяют 1.реакцию агглютинации пластинчатую (Хеддльсона) и 2.Объемную (Райта), а так же реакции Кумбса, РСК, РДСК, РПГА, кожную аллергическую пробу, иммуноферментный анализ (ИФА). Перед профилактической вакцинацией населения можно ограничиться постановкой пластинчатой реакции агглютинации (Хеддльсона) и кожной аллергической пробы.\

Реакция Райта (Реакция агглютинации с бруцеллезным антигеном в пробирках )

Реакция Райта проводится в пробирках в объеме 1 мл с разведениями сыворотки 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800 и единым бруцеллезным диагностикумом. Последний представляет собой взвесь убитых нагреванием и фенолом бруцелл. Для пробирочной реакции диагностикум разводят в 10 раз карболизированным (0,5%) физраствором. Методика разведения сыворотки обычна для пробирочной реакции агглютинации. Пробирки встряхивают, ставят в термостат при температуре 37° до следующего дня. Учет реакции проводят обычным способом или по 50% агглютинации (2+) в сравнении со стандартом мутности. Серийные титры 50% агглютинации 1:50, 1:100, 1:200, 1:400,1:800 свидетельствуют о том, что в 1 мл исследуемой сыворотки содержится соответственно 50, 100, 200, 400, 800 МЕ антител. Выраженность реакции больного оценивают по следующей схеме: титр 1:50 оценивается как сомнительный, 1:100 – слабо положительный, 1:200 и 1:400 – положительный, 1:800 – резко положительный.

При остром бруцеллезе реакция Райта положительна у больных в титре 1:200-1:800, тогда как при хроническом бруцеллезе – в титре 1:50-1:100. В то же время обострение хронического бруцеллеза сопровождается повышением титра 1:200-1:400.

Перечисленные показатели относятся к больным, заражение которых происходило в период их кратковременного пребывания в сельской местности, неблагополучной по бруцеллезу, или в результате систематического употребления некипяченого «фляжного» молока в городе.

Иногда резко выраженная реакция Райта наблюдается у больных со слабо выраженными клиническими проявлениями бруцеллеза.

Серологическая реакция агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона)

Реакция Хеддльсона (пластинчатая – применяют на стекле) чувствительна, но менее специфична, дает возможность выявлять агглютинины в первые дни болезни, быстро получить ответ. На большое (9х12см) хорошо обезжиренное сухое стекло на расстоянии 3-4 см друг от друга микропипеткой наносят исследуемую сыворотку в дозах 0,04, 0,02, 0,01 мл (опытные капли) и 0,02 мл (контрольная капля). К трем первым каплям сыворотки добавляют по 0,03 мл единого неразведенного диагностикумума, к последней – 0,03 мл физраствора. Максимальный срок наблюдения – 8 минут. Учет осуществляют невооруженным глазом по 4+ системе. При положительной реакции в опытных каплях появляются хлопья и жидкость становится более или менее прозрачной. Агглютинацию во всех трех дозах 4+ принимают за резко положительный результат, в первой и второй дозах – за положительный результат, только в первой дозе – сомнительный результат, отсутствие агглютинации во всех дозах – отрицательный результат.

Реакция Кумбса либо антиглобулиновый тест.

Его проводит для обнаружения антител, которые атакуют эритроциты.

Для обнаружения бруцеллеза используется прямая реакция. Эта реакция различает антитела, которые напрямую связаны с эритроцитами. Если антиглобулиновый тест показывает отрицательный результат – значит кровь чистая, и антител нет. Положительный результат означает появление антител, которые активно борются с эритроцитами.

ПЦР-диагностика основывается, на обнаружении ДНК-цепей бруцелл из биологического материла пациента. Для этого материал обеззараживают, прибавляя метиолят натрия концентрацией 0,01% с дальнейшим прогреванием в течение получаса. Когда завершится инкубирование в лизирующем растворе, который содержит, все необходимые реагенты для экстракции ДНК при поддерживании температуры в 66С на протяжении 10-15 минут биологическая ткань обезвреживается.

Этот анализ обладает положительной чертой в том плане, что можно использовать абсолютно любую биологическую ткань пациента.

источник

Разнообразные клинические проявления бруцеллеза приводят к необходимости широкого использования лабораторных методов исследования: бактериологического, биологического, серологического и аллергического. Комплекс лабораторных исследований с обязательным учетом клинических, эпидемиологических и эпизоотологических данных обеспечивает правильную диагностику заболевания.

Работа по выделению и дифференциации бруцелл из любого исследуемого материала должна проводиться в строгом соответствии с санитарными правилами СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».

Бактериологический метод.Для исследования на бруцеллез в лабораторию поступает патологический материал от больных людей (кровь, мокрота, гной, суставная жидкость, пунктат из селезенки, моча), сельскохозяйственных животных (абортированный плод, лимфатические узлы, паренхиматозные органы, кровь, моча, молоко, молочные продукты) и различные объекты окружающей среды (вода, навоз). Материал для исследования забирают в стерильную посуду.

Для выделения культур бруцелл всех видов используют печеночные и мясопептонные агары в различных модификациях, агар Альбими, сухие питательные среды — агар «Д» и эритрит агар. Посев материала производят на качественные, предварительно проверенные питательные среды, выращивают при 37 °С в аэробных условиях и с повышенным (5-10 %) содержанием углекислого газа.

Исследование крови необходимо проводить во время лихорадочного состояния больного до лечения антибиотиками, так как в этот период наблюдается наибольший процент выделения культур. Кровь в количестве не менее 10 мл стерильно берут из локтевой вены и засевают по 5 мл в два флакона среды Кастанеда. Начиная с четвертого дня, посевы ежедневно просматривают и, при отсутствии роста культуры, поверхность агара орошают бульоном путем осторожного покачивания флакона. При положительном результате на поверхности агара появляются колонии бруцелл. Если в течение месяца роста бруцелл не обнаруживают, то делают контрольный высев из бульона среды Кастанеда на твердую питательную среду.

При обследовании людей на бруцеллез для удобства доставки флаконов с кровью можно пользоваться транспортной жидкой средой, которую готовят заранее и хранят в лаборатории в течение полугода. Кровь доставляют в лабораторию в транспортной среде, засевают на среду Кастанеда и исследуют по общепринятой схеме.

Бруцеллы можно выделить из костного мозга, мочи, спинномозговой жидкости, грудного молока, желчи, мокроты, трупного материала и т. д. Исследуемый материал по 0,1 мл засевают на пластинки питательного агара и по 5-10 мл на жидкие питательные среды. Для задержки роста посторонней микрофлоры при исследовании загрязненного материала к среде добавляют генцианвиолет (1:200 000) или антибиотики (пенициллин 0,25 ед/мл и стрептомицин 0,05 ед/мл).

Особого внимания заслуживает получение культуры из молока сельскохозяйственных животных. Забор молока у овец, коров, верблюдов и коз рекомендуется проводить путем сдаивания его последних порций из каждого соска вымени по 10 мл в стерильную посуду. Если исследовать молоко в течение первых суток не удается, то его консервируют добавлением сухой борной кислоты 1 %, генцианвиолета 1:25 000. Для исследования молока из больших емкостей забирают 100 мл верхнего слоя, затем перемешивают и набирают еще 100 мл.

Лучшие результаты дает посев сливок, полученных центрифугированием молока при 2,5-3 тыс. об/мин в течение 3-5 мин или путем отстаивания в течение одних суток в холодильнике. Сливки в количестве 0,1-0,2 мл засевают на твердую питательную среду с подавителем посторонней микрофлоры (4-6 пробирок на 1 пробу).

Бактериологический метод считается самым достоверным, т. к. выделение бруцелл является неопровержимым доказательством бруцеллезной инфекции. Отрицательные результаты бактериологического исследования не дают права для заключения об отсутствии заболевания.

Биологический метод.Для выделения бруцелл из материала, загрязненного посторонней микрофлорой или содержащего малые концентрации возбудителя, в качестве биологической пробы используют морских свинок (весом 250-300 г) или белых мышей (весом 17-18 г). Исследуемый материал в объеме не более 0,5 мл вводят подкожно в паховую область белой мыши и 1 мл морской свинке.

Вскрытие белых мышей производят через 20-25 дней, а морских свинок — через 30-35 дней после введения материала. Перед вскрытием у свинок кровь из сердца исследуют в реакции агглютинации. Для посевов у морских свинок берут лимфатические узлы (паховый, подчелюстной, шейный, парааортальный), кусочки селезенки, печени, костный мозг, кровь, мочу; у белых мышей — лимфатические узлы (паховый, аксиллярный, парааортальный, подчелюстной), кусочки селезенки и печени. Лимфатические узлы, кусочки печени и селезенки помещают в стерильную чашку. Костный мозг извлекают пипеткой из рассеченной бедренной кости. Посевы крови из сердца, мочи и костного мозга производят стерильной пипеткой непосредственно на питательную среду (агар и бульон). Лимфатические узлы и органы перед посевом надсекают ножницами, берут стерильной деревянной палочкой, вносят первоначально в пробирку с агаром, раздавливают и тщательно втирают материал в поверхность питательной среды. Затем остатки посевного материала переносят в пробирку с бульоном. Палочка должна быть длиной 25-30 см, диаметром 4-5 мм, хорошо отструганная, с несколько заостренным концом. После использования ее погружают на 1 час в дезраствор.

Все посевы дублируют (часть помещают в условия повышенного содержания углекислоты), выдерживают при 37 °С до 30 дней. Для предотвращения высыхания питательных сред пробирки заливают парафином или закрывают резиновыми колпачками.

Посевы просматривают каждые 3-4 дня. Из помутневших бульонов делают высев в пробирки со скошенным агаром. Колонии бруцелл на пластинчатом агаре становятся видимыми на 5-7 сутки, иногда позднее. По истечении 30 дней наблюдение прекращают. Если за это время рост не появился, посевы уничтожают, а результаты бактериологического исследования считают отрицательными.

Результат оценивают положительно при выделении хотя бы одной колонии бруцелл. Идентификацию возбудителя бруцеллеза проводят по: по характеру роста культуры на плотных питательных средах; морфологии микроба в мазках, окрашенных по Граму, Козловскому; агглютинации со специфической бруцеллезной сывороткой на стекле и объемным методом; свечению на 3-4+ культур, обработанных бруцеллезной люминесцирующей сывороткой.

Культуры предварительно проверяют на наличие признаков диссоциации, одним из перечисленных выше методов.

Дифференциации (определение видов и биоваров) подлежат культуры в S-форме после идентификации.

Подкомитетом по таксономии бруцелл Международного комитета номенклатуры бактерий и Объединенным комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу в 1972 г. были определены единые тесты для проведения идентификации и дифференциации бруцелл для всех стран мира.

О видовой принадлежности культуры бруцелл и биоварах судят на основании результатов комплексного изучения отношения выделенных культур к условиям выращивания (при повышенном содержании углекислоты или в обычных аэробных условиях), чувствительности к анилиновым краскам (бактериостатическим методом), способности образовывать сероводород, чувствительности к бруцеллезному фагу «Тb», окислительно-метаболических тестов, агглютинабельных свойств культур с использованием монорецепторных сывороток (антиабортус и антимелитензис) и дополнительного исследования уреазной активности, вирулентности и других признаков. Дифференциацию бруцелл на виды и биовары проводят в параллельных опытах испытуемых штаммов с референтными всех трех видов бруцелл.

Серологические и аллергические методы исследования на бруцеллез.Серологические реакции и аллергическая проба являются общедоступными методами и применяются для диагностики бруцеллеза наряду с бактериологическим и биологическим методами.

При проведении эпидемиологического исследования в очагах применяют реакцию агглютинации пластинчатую (Хеддльсона) и объемную (Райта), реакцию Кумбса, РСК, РДСК, РПГА, кожную аллергическую пробу, иммуноферментный анализ (ИФА). Перед профилактической вакцинацией населения можно ограничиться постановкой пластинчатой реакции агглютинации (Хеддльсона) и кожной аллергической пробы.

Для диагностики острого и подострого бруцеллеза ставят реакцию Хеддльсона, Райта и РПГА. В случаях отрицательного результата используют реакцию Кумбса.

При диагностике хронического бруцеллеза и проведении диспансерного наблюдения за переболевшими рекомендуют наряду с реакциями Хеддльсона, Райта, РПГА, использовать реакцию Кумбса и аллергическую пробу (Бюрне).

Серологические реакции и аллергическая кожная проба по своему диагностическому значению в различные периоды заболевания не равноценны, вследствие чего не могут заменить друг друга. Это обусловливает необходимость применения комплексного серологического метода, являющегося наиболее надежным способом диагностики бруцеллеза.

В ранние сроки от начала заболевания (первые 6 месяцев) диагностическая ценность серологического метода выше, чем аллергического. Серологические реакции в этот период оказываются положительными почти в 95 % случаев. По мере удлинения срока заболевания процент положительных серологических реакций начинает снижаться. При проведении обследования необходимо учитывать, что высокие титры антител всегда указывают на наличие инфекции, антитела в низких титрах или их полное отсутствие не исключает возможности заболевания. В связи с этим рекомендуется проводить повторные исследования с интервалом 1-2 недели, особенно при подозрении на острую форму бруцеллеза.

Для постановки диагноза бруцеллеза у крупного рогатого скота применяют серологические и аллергические методы. Обследование начинают с постановки роз-бенгал пробы (РБП). Сыворотки, с которыми получена положительная РПБ, исследуют в РА Райта, РСК (РДСК), РПГА для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител. Исследование проводят двукратно с промежутком в 30 дней.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ

Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; Нарушение авторского права страницы

источник

Бруцеллы (род Brucella) – возбудители бруцеллеза человека и животных. В. melitensis, В. abortus и В. suis – вызывают заболевание у человека; B. ovis, B. canis, B. neotomae заболевания человека не вызывают.

Морфология, физиология. Мелкие Гр– коккобактерии размером 0,5-0,7х0,6-1,5 мкм. Также могут быть палочковидной формы; в мазках обычно расположены беспорядочно. Жгутиков не имеют. Спор не образуют. Свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу при культивировании на средах, содержащих 10% иммунной сыворотки барана или лошади, а также при выращивании на куриных эмбрионах.

Требовательны к питательным средам. Для выращивания обычно применяют триптозный, триптозо-казеиново-соевый и кровяной (5% овечьей крови) агары; оптимальная среда для культивирования — печёночный агар Хеддльсона. Выделяемые из организма больных они размножаются очень медленно, рост может быть обнаружен только через 1–3 недели после посева исходного материала. Многократное пересевание в лабораторных условиях делает культуры способными расти в течение 1–2 дней. На плотных питательных средах образуют мелкие, выпуклые, бесцветные с перламутровым блеском колонии S-формы (жемчужины), легко переходят в мукоидную и шероховатую. В жидких средах возникает равномерное помутнение. Под влиянием антибиотиков образуют L-формы.

Бруцеллы строгие аэробы, а В. abortus в первых поколениях требует увеличенной концентрации (5–10%) СО₂.

БХ: расщепляют глюкозу и некоторые другие углеводы, разлагать мочевину и аспарагин, гидролизовать белок, пептоны, аминокислоты, выделять каталазу, гиалуронидазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу и другие ферменты. Внутри видов бруцелл различают биовары. Их дифференциация основана как на биохимических различиях, так и на способности расти на средах с фуксином и тионином, лизабельности фагом Т6, агглютинабельности моноспецифическими сыворотками.

АГ. Содержат поверхностно расположенный Vi-АГ и соматические видоспецифические АГ А и М, количественное соотношение которых различно у разных видов. У В.melitensis преобладают М-АГы. у В. abortus и В. suis – А-АГ. Для идентификации бруцелл по антигенным свойствам используют реакцию адсорбции агглютининов или монорецепторные сыворотки.

Экология и распространение. Зоонозная инфекция. Возбудители разных видов циркулируют среди животных, от которых заражаются и люди. В.melitensis вызывает заболевания мелкого рогатого скота, В. abortus – КРС, В.suis – свиней. Непатогенные для человека

Бруцеллы устойчивы к действию факторов окружающей среды. Они длительно сохраняют жизнеспособность при низкой температуре. В почве, моче, испражнениях животных, больных бруцеллезом, в навозе, сенной трухе возбудители выживают 4–5 мес., в шерсти– 3– 4 мес., в пыли – 1 мес., в замороженном мясе – до 5 мес. К высокой температуре и дезинфицирующим веществам бруцеллы высокочувствительны: при 60°С погибают за 30 мин, при кипячении – мгновенно. Все дезинфектанты губят бруцелл в течение нескольких минут.

Патогенность и патогенез. Проникновение – алиментарным, контактным и воздушно-капельным путями. Алиментарный путь заражения связан с употреблением в пищу продуктов животноводства (масла, молока, мяса), полученных от больных животных. Контактным путем заражаются чаще ветеринары, зоотехники, работники мясокомбинатов при уходе за больными животными, обработке сырья. Заражение возможно при работе с инфицированной шерстью, ветошью, когда имеет место распыление, попадание бруцелл в воздух. Для человека наиболее патогенными являются В.melitensis – возбудитель болезни мелкого рогатого скота (овец, коз).

Выраженные инвазивные и агрессивные свойства бруцелл обусловливают способность возбудителя проникать в организм через неповрежденные слизистые оболочки. После проникновения в организм распространяются лимфогенным путем, попадают в кровь, а из крови – в селезенку, костный мозг, лимфоузлы, где, локализуясь внутриклеточно, могут длительно сохраняться.

Болезнетворность бруцелл определяется действием эндотоксина. Выделяющиеся ферменты (гиалуронидаза и др.) способствуют распространению микробов в тканях. В патогенезе бруцеллеза имеет значение способность возбудителя размножаться в клетках лимфоидно-макрофагальной системы.

С первых дней болезни возникает реакций ГЗТ, которая сохраняется в течение всей болезни и длительное время после выздоровления.

Иммунитет. В основе иммунитета при бруцеллезе лежит активность системы Т-лимфоцитов. Важную роль играет фагоцитоз и состояние аллергии. Обезвреживание бруцелл происходит при участии антител – опсонинов, агглютининов.

Лабораторная диагностика. Проводится бактериологическим и серологическим методами. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, испражнения и моча больных, иногда – спинномозговая жидкость. Выделением возбудителя занимается специальная режимная лаборатория.

Образцы инкубируют в МПБ или бульоне Мартена (можно использовать соевый бульон) при 37°С. При проведении исследования засевают 2 порции среды и в одной создают повышенную концентрацию СО. Через 4-5 сут наблюдают рост бруцелл, нередко в виде мелких колоний, вкрапленных в тяжи фибрина; среда остаётся слегка мутной или прозрачной. После пересева на твёрдые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отвивают чистые культуры с последующими идентификацией биохимических свойств, определением способности расти на средах с добавлением некоторых анилиновых красителей (бактериостатический метод Хеддльсона) и определением биотипа реакциями агглютинации.

Серологические исследования. Реакция агглютинации (реакция Райта) — один из основных методов диагностики бруцеллёза. Динамика реакции может быть различной, для неё характерно колебание титров в течение суток; положительная реакция с первого дня заболевания; наиболее высокие титры отмечают через 1-2 мес. Для получения адекватных результатов необходимо использовать негемолизированную сыворотку и Аг, приготовленный из S-форм бруцелл (применять Аг диссоциированных форм нельзя); в эндемичных очагах, вызванных Brucella melitensis, рекомендуют применять гомологичный Аг. Следует помнить, что для реакции Райта характерны проагглютинационные зоны, или прозоны (отсутствие агглютинации в первых разведениях и чёткое её проявление в более высоких разведениях сыворотки). Часто применяют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона). В острой фазе заболевания диагностическую ценность имеет иммуноферментный метод, выявляющий IgM в сыворотке больного. Выявление неполных AT (реакция Кумбса) с применением антиглобулиновой сыворотки. Для диагностики, особенно при отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований, используют аллергические кожные пробы (проба Бюрне), обычно положительные у 70-85% пациентов к концу 1 мес заболевания. В качестве Аг применяют бруцеллин (мелитин, абортин) — протеиновый экстракт культуры бруцелл. Пробу также применяют для проведения эпидемиологических обследований; бывает положительной после вакцинации.

Для выявления возбудителя в молоке широко применяется кольцевая проба Банга.

Профилактика и лечение. Общие и специфические мероприятия ветеринарной службы. Выявляют и ликвидируют бруцеллез среди сельскохозяйственных животных, обезвреживают продукты и сырье животного происхождения. Людей, подвергающихся опасности заражения, вакцинируют живой бруцеллезной вакциной. Лечение бруцеллёза затруднено внутриклеточным паразитизмом бруцелл, что защищает их от действия антимикробных препаратов и AT. Препаратами выбора считают тетрациклин и стрептомицин. В тяжёлых и упорных случаях можно назначить рифампин (рифамицин). Смертность без лечения может достигать 5-10%.

источник

Возбудители бруцеллеза (Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis и Brucella canis) высоко контагиозны и работа с ними проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций. Постановку серологических реакций и аллергических проб для диагностики бруцеллеза производят соответственно в обычных микробиологических лабораториях и больничных условиях.

Главным резервуаром бруцелл являются домашние сельскохозяйственные животные, а также другие виды животных, от которых человек заражается преимущественно контактным или контактно-бытовым, реже алиментарным путем. Клинические проявления бруцеллеза многообразны, поражаются лимфатическая, сосудистая, гепато-лиенальная системы и особенно опорно-двигательный аппарат Методы микробиологической диагностики бруцеллеза представлены в схеме 7.

Схема 7. Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Материал: кровь, костный мозг, моча, испражнения, грудное молоко у кормящих женщин

Серологический метод— постановка РА с сывороткой крови больного (реакция Райта, ставят в начале 2-й недели болезни, диагностический титр 1:200 и выше), ускоренной РА на стекле (реакция Хеддльсона), РСК и ИФА.

Диагностикумом в реакции Райта и Хеддльсона является взвесь убитых бруцелл с красителем генциановым фиолетовым или метиловым фиолетовым.

Реакцию агглютинации Хеддльсона ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят микропипеткой неразведенную исследуемую сыворотку в количествах 0,08; 0,04; 0,02; 0,01 и 0,02 мл, добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума, кроме последней дозы, в которую вносят 0,03 мл ФР (контроль сыворотки). Контролем диагностикума является смесь из 0,03 мл антигена и 0,03 мл ФР. Все капли перемешивают стеклянной палочкой или бактериологической петлей и после легкого покачивания стекла наблюдают за появлением мелкозернистого окрашенного агглютината. Отсутствие агглютинации во всех пробах сыворотки оценивается как отрицательная реакция, наличие агглютинации в 1-й пробе (0,08 мл сыворотки) — сомнительная, во 2-й (0,04 мл) — слабоположительная, в 3-й или 4-й пробах (0,02-0,01 мл) — положительная, во всех пробах — резко положительная реакция. Поскольку реакция агглютинации Хеддльсона иногда бывает положительной у здоровых людей за счет нормальных антител, она обязательно подтверждается реакцией Райта.

РИФ, РНГА, РСК и особенно ИФА более чувствительны, чем реакция агглютинации. Для ранней диагностики бруцеллеза особую ценность имеет ИФА, позволяющий выявить в сыворотке больных антибруцеллезные антитела класса IgM,которыев отличие от IgG появляются в ранние сроки болезни, свидетельствуя о свежем инфицировании.

Аллергический метод –постановка внутрикожной аллергической пробы Бюрне с 15-20 дня заболевания. Учет реакции проводится через 24-48 часов, положительной считается реакция в случае появления на месте введения аллергена (бруцеллина) болезненности, гиперемии и инфильтрации кожи диаметром 3 см и более. Положительная аллергическая реакция на бруцеллин сохраняется в течение длительного времени после перенесенного бруцеллеза, а также после прививки.

Бактериологический метод— посев крови для выделения гемокультуры в 2 флакона с 50 мл печеночного или асцитического бульона (рН 7,1-7,2) или МПБ с добавлением 1 % глюкозы, 2 % глицерина и антифаговой сыворотки (для инактивации бруцеллезного бактериофага) в первые дни болезни при наличии лихорадки. При отрицательных результатах исследование повторяют, т.к. бактериемия наблюдается в течение 1 года и более.

Один флакон выращивают в обычных аэробных условиях, другой — в герметично закрытом сосуде с 10 % углекислого газа (или СО₂-инкубаторе) при температуре 37 0 С до 1 месяца, делая пересевы на скошенный печеночный агар или эритрит-агар каждые 4-5 дней. На жидких средах бруцеллы растут с образованием легкого помутнения и небольшого слизистого осадка, на плотных средах в виде округлых, диаметром до 5 мм, серовато-белых, блестящих, прозрачных с янтарным оттенком в проходящем свете колоний. Типичные колонии пересевают на скошенный агар и идентифицируют выделенную культуру до уровня вида.

Выполняются также посевы исследуемого материала в желток свежего куриного яйца или в желточный мешок куриного эмбриона с последующей их инкубацией в течение 5 дней при 37 0 С и пересевом содержимого желточного мешка на плотные и жидкие питательные среды для выделения чистой культуры бруцелл.

Бруцеллы идентифицируют на основании изучения морфологических (рис. 13 — грамотрицательные коккобактерии), культуральных, биохимических (они не ферментируют уг-

Рис. 13. Возбудитель бруцеллеза (Brucella melitensis). Окраска по Граму. Мелкие грамотрицательные коккобактерии.

леводы, не свертывают молоко и не разжижают желатину, выделяют сероводород), антигенных свойств (постановка РА с моноспецифическими сыворотками против антигеновА, М, R), чувствительности к специфическому бактериофагу и бактериостатическому действию анилиновых красителей (табл. 8).

Таблица 8.Дифференциация основных видов бруцелл

Признак	Вид бруцелл
Br. melitensis	Br. abortus	Br. suis
Условия культивирования	аэробные	10% СО₂	аэробные
Рост на средах с красителями:
фуксином 1:50000	+	+	—
тионином 1:25000	+	—	+
пиронином 1:200000	+	+	—
Образование Н₂S	—	±	±
РА с монорецепторными сыворотками
А	±	±	+
М	±	±	±
Чувствительность к бруцеллезному фагу	—	+	±

. Обозначения: «-« — отрицательная; «+» — положительная; «±» — непостоянная реакции.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Только сон приблежает студента к концу лекции. А чужой храп его отдаляет. 8611 — | 7413 — или читать все.

193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

Задание 1.Классификация биопрепаратов, их назначение, применение, утилизация

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Перечислить биопрепараты, применяемые для лечения в хозяйстве, их назначение и применение

Биопрепараты — средства, полученные методом биотехнологии (биологического происхождения), предназначенные для диагностики, профилактики и лечения инфекционных болезней животных и людей, а также повышения продуктивности животных.

Все биопрепараты выпускают по единым нормативным документам (ОСТам и ТУ); к биопрепаратам обязательно прилагают наставления по их применению.

Биопрепараты выпускают несколько крупных федеральных унитарных биологических предприятий (биофабрики и биокомбинаты, научно-исследовательские институты), а также коммерческие фирмы. Биопрепараты классифицируют следующим образом:

профилактические: вакцины, сыворотки-глобулины, интерферон;

лечебные: сыворотки-глобулины, бактериофаги, антибиотики, пробиотики;

диагностические: сыворотки, антигены, аллергены, бактериофаги, моноклональные антитела;

стимулирующие: иммуностимуляторы, кормовые антибиотики, гормоны, витамины.

Лечебные биопрепараты.

Применяемые в хозяйстве-это-Сыворотки и глобулины — препараты, содержащие антитела к определенным возбудителям болезней, получаемые от гипериммунизированных или переболевших животных и предназначенные для пассивной иммунизации или лечения, а также диагностики инфекционных болезней.

Сыворотки выпускают нативными и консервированными, жидкими и сухими. Примерами биопрепаратов: антитоксические сыворотки против столбняка, ботулизма энтеротоксемии и других анаэробных инфекций; антибактериальные сыворотки — содержащие антитела, способствующие фагоцитозу и лизису бактерий; противовирусные — содержащие вируснейтрализующие антитела; иммуноглобулины — против сибирской язвы, бешенства, болезни Ауески, столбняка, а также неспецифические; сыворотки реконвалесцентов против ринотрахеита, аденовироза, хламидиоза.

2. Перечислить биопрепараты, применяемые для профилактики в хозяйстве, их назначение и применение

Иммунопрофилактика. Вакцины — специфические антигенные биопрепараты, полученные из микроорганизмов, их компонентов или продуктов жизнедеятельности и предназначенные для создания активного иммунитета к инфекционным болезням в организме животных.

Живые вакцины – наиболее эффективные биопрепараты: быстро формируется иммунитет, достаточно малых доз антигены и, как правило, однократной вакцинации.

Недостатки: достаточно высокие реактогенность, питрогенность, остаточная вирулентность. Живые вакцины изготавливают из авирулентных или слабовирулентных (аттенуированных) штаммов микроорганизмов, не способных возвращаться к первоначальным свойствам (реверсии), но сохранивших иммуногенность; дефектных мутантов; вирулентных (не ослабленных) микроорганизмов; гетерогенных возбудителей. К основным методам аттенуации относят следующие:

ослабление возбудителя многократными пассажами на невосприимчивых или слабовосприимчивых животных и адаптация к ним (вакцины Конева против рожи; антирабическая Пастера: АСВ из штамма К против чумы свиней; из штамма ЛТ против чумы КРС);
ослабление путем многократных пассажей на куриных эмбрионах (вирусные вакцины: сухая ВГНКИ против болезни Ауески, 668-КФ против чумы собак, многие вакцины против болезней птиц);
ослабление возбудителя путем культивирования на питательных средах с добавлением неблагоприятных веществ (БЦЖ против туберкулеза);
ослабление возбудителя посредством ультрафиолетового облучения — УФО (против ИРТ КРС-ВИЭВ, листериоза из штамма АУФ);
отбор авирулентных штаммов: естественных или полученных путем селекции в лабораториях (вакцины из штамма 55 ВНИИВВиМ против сибирской язвы; из штаммов 19 и 82 против бруцеллеза; ВР-2 против рожи).

Инактивированные вакцины, как правило вырабатывают менее напряженный иммунитет, чем живые. Особенности использования: необходимость значительно большего количества антигена, а также повторных вакцинаций (ревакцинаций) и депонирующих веществ (адъювантов) при введении — для усиления иммуногенности. Преимущества инактивированных вакцин: они более безопасны, так как не способны спровоцировать заболевание у животных, общие реакции слабее, чем при иммунизации живыми вакцинами. В то же время местная реактогенность при иммунизации депонированными вакцинами (особенно эмульгированными) может быть достаточно высокой.

Субъединичные и генно-инженерные вакцины распространены в ветеринарии недостаточно широко (наработки по сальмонеллёзу, эшерихиозу, бруцеллёзу, ящуру). Их иммуногенность уступает живым и инактивированным вакцинам, но они лишены их недостатков, поэтому могут применяться для иммунизации молодняка, беременных и ослабленных животных.

Вакцины выпускают в жидком или сухом (лиофилизированные) виде. Различают 3 вида иммунизации в зависимости от способа формирования иммунитета:

активная – применяют вакцины, при этом иммунитет вырабатывается самим организмом;
пассивная — применяют сыворотки или иммуноглобулины, при этом в организм вводят готовые антитела (полученные при иммунизации других животных — продуцентов);
смешанная (пассивно-активная) — при которой вначале вводят сыворотку или глобулин (пассивная вакцинация), а через некоторое время вакцину (активная вакцинация). При этом способе пассивные антитела в организме могут отрицательно влиять на формирование активного иммунитета.

простая вакцинация — применяют одну вакцину (но не против одной инфекционной болезни).
комплексная вакцинация — применяют нескольких вакцин (при этом их вводят раздельно или смешивают перед введением).

Методы введения вакцин могут быть парентеральными — подкожный, внутрикожный, внутримышечный, интраназальный, внутрицистернальный, накожный (скарификационный), аэрозольный (респираторный, ингаляционный), инсталляционный (введение по каплям в отверстия) и энтеральный.

В данное время в хозяйстве используют инактивированные вакцины в простой а так же комплексной вакцинации.

3. Описать способы и методы утилизации биопрепаратов.

Остатки вакцин в ампулах или флаконах, использованные одноразовые иглы, шприцы, скарификаторы, ватные тампоны, салфетки, перчатки после инъекции сбрасывают в контейнеры с дезинфицирующим раствором, приготовленным в соответствии с инструкцией по его применению.

После дезинфицирующей обработки медицинские отходы утилизируют в соответствии с санитарными правилами и нормами СанПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений».

Задание 2.Прием больных животных и оказание лечебно-профилактической помощи при инфекционных болезнях. Специфическая терапия, введение сывороток, иммуноглобулинов. Антибиотикотерапия в хозяйствах.

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Провести прием животного, данные занести в журнал приема форма №1-вет (приложение 8)

2. Записать какая проводилась специфическая терапия. Записать какая проводилась вакцинотерапия:

На 8-й день жизни телят прививали от диклококка, на 10-й от парагриппа, на 12-й против вирусной диареи. Ровно в месяц делали укол от трихофитии, а в два месяца от пастереллеза. На сроке 90-95 дней жизни прививали от эмкара и сибирсокй язвы, а на 120-130 сутки от бруцеллеза и ящура. Последняя прививка (против ящура) повторялась еще и на 10-й месяц жизни животного.

Взрослым коровам лептоспироз прививался дважды в год, через каждые шесть месяцев, точно по той же схеме делалась и прививка от пастереллеза, то есть два раза в году.

Прививка от колибактериоза делалась двукратно: в первый раз за 100 дней до отела и во второй — за 90 дней. Вакцинация от паратифа делалась за 80 дней до отела и затем повторная ревакцинация за 70 дней. Вакциной «Комбовак» прививали коров за 40 — 50 дней до отела в первый раз и за 14 — 21 день до отела во второй, телят, рождённых от вакцинированных коров, для предотвращения инфицирования возбудителей ОРВИ КРС так же вакцинировали вакциной «Комбовак» двухкратно в возрасте 30 дней и 44 дней в дозе 0,2 мл внутрикожно, далее в возрасте 3 месяца двухкратно интервалом в 14 дней прививали всех телят в дозе 0,4 мл внутрикожно и далее в 6 и 12 месяцев однократно в дозе 0,2 мл внутрикожно.

3. Записать какая проводилась серотерапия (применение специфических сывороток и гамма-глобулинов).

Лечение специфическими гипериммунными сыворотками занимает важное место в оздоровительной работе при инфекционных болезнях животных. Лечебное действие их связано с введением в организм специфических антител, обезвреживающих болезнетворные микроорганизмы или их токсины. С другой стороны, неспецифические компоненты сыворотки, ее белково-солевой комплекс, активизируя клетки и ткани, усиливают общую иммунореактивность макроорганизма и его защитные механизмы в борьбе с возбудителем инфекции. Лечебные сыворотки получают от гипериммунизированных животных и реконвалесцентов.

По механизму действия, зависящему от свойства антител, специфические сыворотки разделяют на антимикробные и антитоксические. Первые главным образом воздействуют на возбудителей болезней, подавляя их жизнедеятельность, вторые – обезвреживают ядовитые продукты метаболизма микробов. К антимикробным сывороткам относятся сыворотки против сибирской язвы, рожи свиней, пастереллеза, септицемии и др., а к антитоксическим – сыворотки против столбняка, анаэробной дизентерии ягнят, инфекционной энтеротоксемии овец и др.

Гамма-глобулин получают из сыворотки крови крупного рогатого скота (КРС) в возрасте 1,5 — 2 года массой 250 — 280 кг. Гипериммунизацию животных возбудителем болезни осуществляют в два цикла с интервалом в 30 дней. Во время первого цикла антиген вводят животным однократно в течение 3 дней в дозе по 4 мл, включающей 1 мл водной суспензии гриба (50 млн/мл), 1 мл физраствора и 2 мл 1%-ного раствора сапонина. Во время второго цикла антиген вводят животным также однократно в течение 2 дней в дозе по 8 мл, включающей 2 мл водной суспензии гриба, 2 мл раствора и 4 мл 1%-ного раствора сапонина. Через 5 дней после окончания второго цикла гипериммунизации животных подвергают обескровливанию. Из полученной крови отделяют гипериммунную сыворотку, pH которой устанавливают в пределах 6,9 — 7,2. В сыворотку добавляют 50%-ный водный раствор полиэтиленгликоля до конечной концентрации 20% и после двухчасовой экспозиции при 10 o C сыворотку подвергают центрифугированию при 2500 об/мин в течение 30 мин для выделения гамма-глобулина с последующей его лиофилизацией для обеспечения стабильности свойств препарата при хранении. Перед использованием сухой гамма-глобулин разводят в 10 мл физраствора.
В данном случае в хозяйстве давно не наблюдалось возникновения тяжёлых инфекций, поэтому и лечения их не требовалось.

4.Записать какая проводилась неспецифическая терапия.

Из неспецифической терапии применялась аутогемотерапия.

Аутогемотерапия является простым и доступным методом неспецифической стимулирующей терапии. Осуществляют ее следующим образом. Берут кровь из яремной вены больного животного шприцем Жанэ и сразу же инъецируют ее этому же животному внутримышечно или подкожно. Дозы крови крупному рогатому скоту составляют от 30 до 150 мл. Кровь вводят три раза с интервалом между инъекциями 2—4 сут. В первый раз вводят 30 мл крови, во второй — 50 мл, в третий — 75 мл.

Действие аутогемотерапии на организм животных аналогично действию аутопротеинотерапии, применяемой в комбинации с ауто-серотерапией и аутовакцинацией.

Задание 3.Принципы аллергической диагностики туберкулеза. Оформление документации

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Описать технику введения туберкулина различным видам сельскохозяйственных животных и птице.

Туберкулез (Tuberculosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь всех видов животных и человека, характеризующаяся образованием в различных органах специфических узелков, подвергающихся казеозному некрозу и обызвествлению.

При внутрикожном методе туберкулинизации туберкулин вводят крупному рогатому скота, буйволам, зебу видному скоту, оленям (маралам) в середину шеи, быкам-производителям — в под хвостовую складку, верблюдам -в область наружной поверхности уха в 2см от его основания, козам -в толщу нижнего века; собакам, обезьянам и пушным зверям (кроме норок) — в область внутренней поверхности бедра или локтевой складки; норкам — интрапальпебрально в верхнее веко; кошкам — в область внутренней поверхности уха курам — в бородку; индейкам -в подчелюстную сережку; гусям, уткам- в подчелюстную складку; фазанам –самцам -в кавернозные тела головы; павлинам, попугаям, голубям, журавлям, цаплям, аистам, фламинго- в область наружной стороны голени на 1. 2см выше голеностопного сустава. Перед введением туберкулина шерсть (волос) в месте инъекции выстригают (перья выщипывают), кожу обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом. Читку реакции на внутрикожное введение туберкулина проводят у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидного скота, верблюдов и оленей через 72ч; у коз, овец, свиней, собак, кошек, обезьян, пушных зверей через 48ч; у птицы через 30-36ч. В неблагополучных по туберкулезу пунктах крупному рогатому скоту и верблюдам допускается вводить туберкулин повторно через 72ч после первого введения в той же дозе и в то же место. Учет и оценку реакции на повторное введение проводят через 24ч. При учете внутрикожной реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения туберкулина, у норок визуально сравнивают веки левого и правого глаза. При обнаружении во время читки утолщения кожи на месте введения туберкулина у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидного скота, верблюдов, оленей берем кутиметр и измеряем толщину складки в миллиметрах и определяем величину ее утолщения, сравнивая ее с толщиной складки неизмененной кожи вблизи места введения туберкулина.

2. Описать основное оборудование и материалы для туберкулинизации животных и птицы. Методы стерилизации инструментов.

Следующие предметы должны быть подготовлены для того, чтобы провести туберкулинизацию:

2. шприц Hauptner Syntena II туберкулина для бычьего туберкулина

3. шприц Hauptner Syntena II туберкулин для птичего туберкулина

5. машинка для стрижки с запасным аккумулятором и запасной головкой для стрижки

6. флакон масла для смазывания ножей для стригательной машинки

7. из холодильника взятый туберкулин, либо уже установлены в шприцах, или ещё во флаконах, чтобы набрать локально (не входит в комплект)

8. лампочка для мест с неблагоприятными условиями освещения

9. маркировачный карандаш для документирования толщины кожи

Четкая маркировка каждого шприца для туберкулина (бычий и птичий) облегчает различие (у нас способом разными цветами отмечены кнопки) в условиях низкой освещенности чтобы не перепутать.

Список животных для проверки заранее выпечатать.

Инъекции птичево и бычьего туберкулина должны быть в направлении, параллельной линии от плеча. Инъекции бычьего туберкулина осуществляется около 12,5 см ниже, чем инъекция птичего. Как правило «Птица летит сверху».

Места инъекций должны быть выбритые и чистые!

На каждом выбритом месте необходимо сформировать складку кожи помощью большим и указательным пальцами и измерить их толщину с кутиметром и записать результаты. Документация должна осуществляться непосредственно с помошью помошника.

Короткой стерильную иглой, на градуированном шприце Хауптнер фиксируется, на искасок ввести в глубокие слоя кожи. Туберкулин вводят. Инъекции выполнены правильно, если можно найти небольшую горошину, как припухлость в каждом месте инъекции при проверке пальцами.

Через 72 часов (+/- 4 часа) после инъекции проводится контрольное измерение и также записывается.

Каждый флакон с туберкулином перед применением просматривают. При нарушении целостности стекла или укупорки, отсутствии надписей на флаконах их выбраковывают.

Для внутрикожного и пальпебрального введения туберкулина используют шприцы с бегунком вместимостью 1 — 2 см и иглы для внутрикожных инъекций или безыгольные инъекторы БИ-7. ИБВ-02 и другие.

Для нанесения туберкулина на конъюнктиву применяют глазные пипетки, для внутривенного введения — шприцы вместимостью 5 — 10 см3 и иглы для подкожных инъекций.

Туберкулин используют только в день вскрытия флакона, остатки туберкулина инактивируют кипячением в течение 10 минут.

Инструменты, используемые для туберкулинизации, не разрешается применять для введения животным других вешеств.

Шприцы, иглы и глазные пипетки до и после их использования стерилизуют кипячением в течение 10 мин в дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих вешеств. Безыгольные инъекторы стерилизуют в соответствии с наставлением по их применению.

Во время проведения внутрикожной, пальпебральной и внутривенной туберкулинизации для каждого животного используют отдельную стерильную иглу.

3. Описать методы оценки реакции.

Современная эпизоотология различает 2 группы неспецифической реакции на туберкулин: параллергические и псевдоаллергические. Параллергические реакции на туберкулин — это реакции, вызванные атипичными микобактериями, возбудителем паратуберкулезного энтерита и птичьим видом возбудителя туберкулеза, а также М. fortuituum и М. smegmatis. Псевдоаллергические реакции на туберкулин — реакции, вызванные факторами немикобактериальной природы. Сенсибилизация организма к туберкулину может проявляться: при актиномикозах, гельмитозах (фасциолез, дикроцеллиоз), гнойных абсцессах и флегонах. 1) Аллергический метод Запрещено исследовать при помощи аллергической пробы животных в течение трех недель после вакцинации их против инфекционных болезней, а также после применения ангельминтиков. Туберкулин вводят строго внутрикожно в дозе 0,2 мл: крупному рогатому скоту, буйволам, зебу, оленям, маралам в область средней трети шеи; быкам-производителям — в одну из подхвостовых складок; верблюдам — в кожу брюшной стенки в области паха на уровне горионтальной линии седалищного бугра; свиньям — в область средней части наружной поверхности уха в двух сантиметрах от его основания. В кожу одного уха вводят туберкулин для млекопитающих, в кожу другого — туберкулин для птиц. Свиньям в возрасте 2-3 месяцев туберкулин лучше вводить в кожу поясничной области, отступая 5-8 см от позвоночника (с одной стороны — туберкулин для млекопитающих, с другой для птиц), используя для этого только безыгольный инъектор. Козам и овцам вводят в нижнее веко под кожу, отступая от его края на 1,5-2 см; собакам, и хищникам — в область внутренней поверхности бедра или локтевой складки; обезьянам, пушным зверям, норкам — интрапальпебрально в верхнее веко; кошкам — в область внутренней поверхности уха; курам — в бородку; индейкам — в подчелюстную сережку; гусям, уткам — в подчелюстную складку; зоопарковой птице — в область наружной стороны голени на 1-2 см выше голеностопного сустава. Учет и оценку реакции на туберкулин у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, верблюдов и оленей проводят через 72 часа после введения препарата; у коз, овец, свиней, собак, кошек, обезьян, пушных зверей — спустя 48 часов; у птиц — через 30-36 часов. У зараженных животных в месте введения туберкулина образуется хорошо видимая припухлость тестоватой консистенции без четких границ с окружающей тканью. При учете туберкулиновой реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения препарата. Для удобства оценки реакции и нахождения места введения кожный покров выстригают в виде крестика и инъекцию проводят в центр скрещивания. При обнаружении изменений в месте введения туберкулина у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидных, верблюдов и оленей считают реагирующими на туберкулин при утолщении кожной складки на 3 мм и более; быков-производителей — независимо от характера реакции; у коз, овец, свиней, птиц, собак, кошек, обезьян и пушных зверей — при образовании припухлости в месте введения туберкулина. В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах (садах, фермах) животных, реагирующих на туберкулин, признают больными, в благополучных — их убивают для уточнения диагноза. Кроме внутрикожной туберкулиновой пробы, в практике используют глазную (офтальмопробу), которую применяют для диагностики туберкулеза лошадей и других представителей непарнокопытных. У крупного рогатого скота ее применяют только одновременно с внутрикожной туберкулиновой пробой в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах для дополнительного выявления зараженных животных. Глазную туберкулиновую пробу желательно проводить крупному рогатому скоту старше 6 лет. Ее проводят двукратно с интервалом 5-6 дней между введениями. Туберкулин в количестве 3-5 капель наносят шприцем с бегунком на поверхность роговицы при оттянутом нижнем веке. Учет реакции проводят через 6, 9, 12 и 24 часа после первого и через 3, 6, 9, 12 часов после повторного введения туберкулина. Образование характерного слизисто-гнойного или гнойного секрета, накопившегося в конъюктивальном мешке или вытекающего виде шнура из угла глаза или отеком конъюктивы. 2) Пальпебральный метод туберкулинизации крупного рогатого скота Этот метод применяют одновременно с внутрикожной туберкулиновой пробой для дифференциации специфических и параспецифических реакций при первичной постановке диагноза. Крупному рогатому скоту туберкулин вводят пальпебрально (в толщу века) в дозе 0,2 мл в нижнее веко, отступив от его края на 1,5-2 см. Учет и оценку реакции проводят через 72 часа после введения туберкулина. Животных считают реагирующими на туберкулин при образовании ощутимой припухлости в месте введения препарата. На пальпебральную пробу реагирует крупный рогатый скот, зараженный возбудителями бычьего и человеческого видов. Животные, инфицированные атипичными микобактериями, на пальпебральную пробу не реагируют. 3)Внутривенный метод туберкулинизации Этот метод применяют с целью отбора животных для диагностического убоя из числа реагирующих на туберкулин в благополучных по туберкулезу стадах. Внутривенную пробу разрешается проводить только у крупного рогатого скота старше 18 месяцев. Внутривенную пробу проводят 50 %-м раствором ППД- туберкулина для млекопитающих (флакон туберкулина разводят равным количеством физиологического раствора) и каждому животному внутривенно вводят по 1 мл препарата на 100 кг живой массы. Реакцию учитывают через 3, 6 и 9 часов после введения туберкулина путем измерения температуры тела животного. Реагирующими считают животных с повышенной на 0,9°С и более по сравнению со средней температурой тела животного. Внутривенное введение туберкулина у зараженных животных вызывает общую системную реакцию, клинически проявляющуюся повышением температуры тела, учащением пульса и дыхания, угнетением общего состояния животного. Эти явления достигают максимального развития через 6-8 часов. У некоторых животных, особенно с активным туберкулезным процессом, развивается шоковое состояние, которое может закончиться гибелью. При вскрытии у таких животных обнаруживают множественные кровоизлияния в брюшной и грудной полостях, кровонаполненность печени и селезенки, изменения в легких. При слабо выраженных реакциях простой визуальный осмотр может привести к неполному выявлению животных, больных туберкулезом. При проведении исследований животных, убитых с диагностической целью, нельзя ограничиваться только осмотром поверхности органов и лимфатических узлов. Необходимо сначала прощупать органы, а потом разрезать их в местах уплотнений, так как туберкулезные узелки по плотности отличаются от окружающей ткани. Необходимо прощупать и места разрезов, кусочки органов с уплотнениями, участками гиперплазии и кровоизлияниями отбирают для лабораторного исследования. После окончания аллергических исследований составляют акт с приложением описи исследованных животных, в котором указывают хозяйство, фермы, вид животных, количество исследованного поголовья, наименование, номер и срок годности, серии использованных препаратов, метод исследования. В опись записывают инвентарные номера, клички животных, отмечая величину кожной складки, если замечено утолщение. В акте на исследование скота частного сектора и фермерских хозяйств указывают наименование населенного пункта, фамилию владельца, пол, возраст исследованных животных и результаты исследования.

4. Оформить документы о проведении туберкулинизации. (Приложение 9)

Задание 4.Диагностическое исследование на бруцеллез.

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Описать технику введения бруцеллезных аллергенов различным видам сельскохозяйственных животных.

Для исследования на бруцеллез животных разных видов применяют следующие методы:

крупного рогатого скота, яков, зебу, буйволов

— серологический: реакция агглютинации в пробирках (РА),

реакция связывания комплемента (РСК) или реакция длительного

связывания комплемента (РДСК), пластинчатая реакция

агглютинации с Роз-Бен галантигеном — роз бенгал проба

(РБП), кольцевая реакция с молоком (КР), реакция

иммунодиффузии с О-ПС антигеном (РИД);

овец, коз, оленей, маралов, лошадей, верблюдов

— серологический: РА, РСК/РДСК, РБП;

— серологический: РСК/РДСК, РБП;

собак и животных других видов

Повторно животных исследуют на бруцеллез серологическими методами через 15-30 дней, а аллергическим — через 25-30 дней.

Коров (нетелей), буйволиц и верблюдиц исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок через 1-2 месяца после окота или опороса, молодняк животных всех видов — с 4-месячного возраста.

Крупный и мелкий рогатый скот, подвергавшийся иммунизации против бруцеллеза, исследуют на эту болезнь в порядке и в сроки, предусмотренные наставлением по применению вакцины, и дают оценку их состояния по бруцеллезу.

2. Описать основное оборудование и материалы для диагностического исследования на бруцеллез. Методы стерилизации инструментов.

Образцы инкубируют в МПБ или бульоне Мартена (можно использовать соевый бульон) при 37°С. При проведении исследования засевают 2 порции среды и в одной создают повышенную концентрацию СО. Через 4-5 сут наблюдают рост бруцелл, нередко в виде мелких колоний, вкрапленных в тяжи фибрина; среда остаётся слегка мутной или прозрачной. После пересева на твёрдые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отвивают чистые культуры с последующими идентификацией биохимических свойств, определением способности расти на средах с добавлением некоторых анилиновых красителей (бактериостатический метод Хеддльсона) и определением биотипа реакциями агглютинации.

Серологические исследования. Реакция агглютинации (реакция Райта) — один из основных методов диагностики бруцеллёза. Динамика реакции может быть различной, для неё характерно колебание титров в течение суток; положительная реакция с первого дня заболевания; наиболее высокие титры отмечают через 1-2 мес. Для получения адекватных результатов необходимо использовать негемолизированную сыворотку и Аг, приготовленный из S-форм бруцелл (применять Аг диссоциированных форм нельзя); в эндемичных очагах, вызванных Brucella melitensis, рекомендуют применять гомологичный Аг. Следует помнить, что для реакции Райта характерны проагглютинационные зоны, или прозоны (отсутствие агглютинации в первых разведениях и чёткое её проявление в более высоких разведениях сыворотки). Часто применяют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона). В острой фазе заболевания диагностическую ценность имеет иммуноферментный метод, выявляющий IgM в сыворотке больного. Выявление неполных AT (реакция Кумбса) с применением антиглобулиновой сыворотки. Для диагностики, особенно при отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований, используют аллергические кожные пробы (проба Бюрне), обычно положительные у 70-85% пациентов к концу 1 мес заболевания. В качестве Аг применяют бруцеллин (мелитин, абортин) — протеиновый экстракт культуры бруцелл. Пробу также применяют для проведения эпидемиологических обследований; бывает положительной после вакцинации.

Для выявления возбудителя в молоке широко применяется кольцевая проба Банга.

3. Описать методы оценки реакции.

Оценку реакции проводили по схеме: Положительная реакция — утолщение кожной складки против физиологической нормы на 10 мм и более; Сомнительная реакция — утолщение кожной складки против физиологической нормы от 4 мм и более; Отрицательная реакция — отсутствие каких-либо признаков на введение аллергена.

4. Описать технику разведения и применения бруцеллезной вакцины. Способы метки вакцинированных животных.

1. Прививки животных вакциной из штамма Рев-1 разрешается проводить ветеринарным врачам и ветеринарным фельдшерам под контролем ветврача. Главные ветеринарные врачи районов обязаны проводить обучение ветеринарных специалистов хозяйств и учреждений государственной ветеринарной сети правилам проведения прививок вакциной животных. 2. Сухая живая вакцина готовится из слабовирулентного штамма Рев-1 бруцелла мелитензис. Вакцина представляет собой мелкозернистую массу светло-коричневого или серовато-желтого цвета. Выпускается в ампулах, запаянных под вакуумом и уложенных в коробки. 3. На каждой ампуле с вакциной должна быть надпись с указанием наименования вакцины, номера серии, срока годности и количества доз препарата. Ампулы с вакциной, не имеющие указанной надписи, а также разбитые, с трещинами, содержащие посторонние примеси или плесень, утратившие вакуум, с истекшим сроком годности препарата, упакованные в коробки без этикеток, бракуют, вскрывают и обеззараживают кипячением в течение 30 мин. 4. На этикетках коробок с вакциной должны быть указаны: наименование вакцины, наименование и товарный знак биопредприятия, изготовившего вакцину, номер серии и номер госконтроля, дата изготовления, срок годности, количество ампул в коробке и количество доз в ампуле, условия хранения вакцины и обозначение ТУ. В каждую коробку должно быть вложено наставление по применению вакцины. 5. Вакцина в ампулах под вакуумом пригодна для применения в течение 12 мес. со дня ее изготовления при условии хранения в холодильных камерах или в темном сухом помещении при температуре 2 — 10 °С. При хранении сухой вакцины при температуре выше 10 °С качество (активность) ее не гарантируется и применение не разрешается. В жаркое время года вакцину доставляют к месту применения в термочемоданах или термосах со льдом. 6. Перед применением сухую вакцину разводят специальным растворителем для сухих живых вакцин против бруцеллеза. При отсутствии такого растворителя допускается использование физиологического раствора. Разведение готовят из расчета, чтобы одна прививочная доза для животных составляла 2 мл разведенной вакцины. Для этого шейку ампулы в верхней части протирают смоченной спиртом ватой и обламывают стекло. В ампулу шприцем с иглой вносят 4 мл растворителя, осторожно встряхивают до превращения массы в равномерную взвесь. Разведенную в ампуле вакцину шприцем с длинной иглой отсасывают и переносят во флакон емкостью 500 — 1000 мл с предварительно налитым в него растворителем. С учетом жидкости, использованной для растворения вакцины, во флаконе должно быть столько растворителя, сколько требуется для приготовления необходимого количества доз вакцины в разведенном виде для прививки животных. Растворитель (физраствор), флаконы, шприцы, иглы, используемые для приготовления вакцины к применению, должны быть стерильными. 7. Приготовленную для применения вакцину защищают от прямого солнечного света и используют через 30 мин. после разведения в течение не более 4 ч. Остатки разведенной вакцины уничтожают путем кипячения в течение 30 мин. Обеззараживанию кипячением подлежат также ампулы и флаконы из-под использованной вакцины, шприцы и иглы. 8. Вакцину животным вводят подкожно в бесшерстное место за локтевым суставом. Для прививки каждого животного используют отдельную, предварительно простерилизованную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Во время прививок допускается стерилизация игл путем протирания их спиртом. Место введения вакцины протирают 70-процентным этиловым спиртом или 0,5-процентным раствором фенола. 9. Иммунитет против бруцеллеза и инфекционного эпидидимита у животных наступает через 3 нед. и сохраняется в течение не менее 2 лет после первичной прививки их вакциной. 10. Запрещается проводить прививки вакциной мелкого рогатого скота в период вспышки в хозяйстве (на ферме) острой инфекционной болезни (сибирская язва, ящур, пастереллез и др.), а также племенных животных, отобранных в благополучных по бруцеллезу хозяйствах к продаже на племенные цели хозяйствам других областей, краев и республик. 11. При проведении прививок животных вакциной прекращают применение антибиотиков (в лечебных и профилактических целях) в сроки: непролонгированных препаратов: бензилпенициллина, эритромицина, олеамдомицина — за сутки; хлортетрациклина, окситетрациклина, тетрациклина, левомицетина, полимиксина — за 3 сут.; стрептомицина, канамицина, неомицина, мономицина — за 7 сут. до вакцинации; пролонгированных антибиотиков: бициллина — за 6 сут.; дитетрациклина — за 25 и дибиомицина — за 30 сут. до вакцинации; любые антибиотики — в течение 15 сут. после вакцинации животных. 12. Каждое вакцинированное животное метят путем выщипа круглого отверстия в основании правого уха. Их берут на учет и за ними устанавливают наблюдение в течение 10 дней, имея в виду, что у привитых животных может повыситься температура тела, иногда отмечается кратковременная хромота. 13. Проведение вакцинации животных оформляют актом, в котором указывают наименование хозяйства, фермы, ее эпизоотическое состояние в отношении бруцеллеза или инфекционного эпидидимита, количество, пол и возраст вакцинированных животных, наименование предприятия, изготовившего вакцину, номер серии, дату изготовления и срок годности препарата. Один экземпляр акта направляют главному ветеринарному врачу района, другой хранят в хозяйстве.

5. Описать технику взятия крови у разных видов сельскохозяйственных животных и птицы.

Взятие крови для исследования у сельскохозяйственных животных производится разными способами. У лошадей, крупного и мелкого рогатого скота ее берут обычно из яремной вены, расположенной над тра

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

источник