Меню Рубрики

Вакцинация аденовирусной инфекции

Болезней, от которых можно защититься с помощью вакцин, больше, чем вы думаете. Но прививаться по полному списку никому, конечно, не надо: часто риск столкнуться с некоторыми вирусами/бактериями сильно меньше, чем риск развития какого-то серьезного нежелательного явления от прививки. Тем не менее, приятно знать, что в случае чего мы можем не только лечиться антибиотиками и немногими противовирусными средствами, но и эффективно предотвращать развитие инфекций.

Все непопулярные вакцины можно разделить на четыре группы.

1. Среди малоизвестных в России прививок есть те, которые на самом деле активно применяют во всем цивилизованном мире. Это, например, вакцина от вируса папилломы человека. Сейчас в России ее обычно делают за свой счет, и это дорого. В наш национальный календарь профилактических прививок наконец-то вошли, пусть и с оговорками, вакцины от ветряной оспы, пневмококка, менингококка, ротавируса и гемофильной палочки, что очень здорово, но тоже не всегда доступно.

2. Нестандартные вакцины бывают нужны перед поездкой в некоторые страны: иногда надо привиться от желтой лихорадки, японского энцефалита, брюшного тифа или холеры. Но эти вакцины не отменяют других мер предосторожности, особенно в случае холеры: прививка против нее работает недолго (например, после российской надо ревакцинироваться через полгода).

3. Другая любопытная группа малоизвестных вакцин: те, которые используются в России, но которых почему-то нет в других странах — возможно, там не удовлетворились результатами исследований этих вакцин. Это вакцины против шигеллёзов, синегнойной палочки, бруцеллёза и лептоспироза.

4. Но самые интересные прививки — это те, которые достать очень сложно или просто невозможно. Приведем список заболеваний, которые они способны предотвратить.

Микроснимок аденовируса, вызывающего ОРВИ

У аденовируса есть много серотипов, которые могут приводить к разным симптомам. Но чаще всего он становится причиной ОРВИ. В частности, 4-й и 7-й серотипы ответственны именно за нее, а 7-й еще за больное горло и покраснение глаз. Вакцина от этих двух разновидностей аденовируса существует, но купить ее нельзя: она одобрена в США только для военных и у нее даже нет торгового названия. Дело в том, что в армии постоянно случаются вспышки аденовирусной инфекции, чему очень способствует скученное проживание. Иногда это даже заканчивается смертельными случаями. Возможно, детям, которые больше всего подвержены аденовирусной инфекции, такая вакцина тоже пригодилась бы, но исследования с участием детей просто не проводились и рекомендовать ее им нельзя. Кроме того, этот препарат часто вызывает нежелательные реакции, требующие лечения.

Любопытно, что эта вакцина выпускается в таблетках, и надо принять две, чтобы стать защищенным.

Микрофотография бацилл сибирской язвы, окраска по Граму

Public Health Image Library

Вакцинация от сибирской язвы обязательно нужна людям, у которых повышен риск вдохнуть споры Bacillus anthracis. Это в первую очередь ветеринары, работающие в зоне, где может быть вспышка сибирской язвы, люди, которые контактируют со шкурами и шерстью животных при плохой защите от заражения, сотрудники лабораторий, где могут быть споры сибирской язвы. Если случается вспышка заболевания, то прививают всех, кто мог заразиться. На Западе используется адсорбированная сибиреязвенная вакцина, у нас — живая (в Штатах аналог нашей прививки применяют только у животных). Конечно, такую вакцину вы не можете купить в аптеке, и если она вам понадобится, то вам об этом обязательно скажут специальные люди.

Бактерия Yersinia pestis (желтого цвета), вызывающая бубонную чуму, в пищеварительном тракте блохи (фиолетового цвета)

Каждый год в мире несколько людей заболевают чумой. Но это не приводит к страшным пандемиям, потому что у нас есть антибиотики. Вакцины тоже есть, но они не очень эффективны и часто вызывают нежелательные реакции, поэтому ставка делается не на них. Прививаться положено только людям, которые работают с Yersinia pestis — бактерией, вызывающей чуму. Но в Штатах таких вакцин уже нет (хотя разрабатываются новые), а вот в России — даже две, одна — в виде таблетки для рассасывания.

С оспой мы справились даже лучше, чем с чумой, — с 1979 года мы официально от нее избавлены. Теперь вирус натуральной оспы есть только в двух лабораториях (в России и США). Справились с помощью вакцинации, и теперь почти никого от этой болезни не прививают: риск нежелательных реакций явно больше возможной пользы. Но оспа вызывается вирусом, а не бактерией, и против этого возбудителя у нас ничего нет. Поэтому внезапная вспышка оспы грозит большой бедой. Хорошо то, что некоторые страны (Великобритания, Швейцария, Япония, США и др.) запаслись вакцинами на случай возвращения оспы. Всего хранится несколько десятков миллионов доз. К сожалению, те люди, которых привили от оспы до 1980 года (от этого остался след на плече, не путать со следом от БЦЖ), уже не имеют достаточной защиты от такого заболевания, поэтому они тоже под угрозой. Сейчас разрабатываются новые, более безопасные прививки от оспы, и, кстати, если вы все-таки столкнетесь с вирусом и будете это знать, то у вас есть три дня, чтобы привиться и защитить себя от развития заболевания. В России такая возможность имеется.

Опоясывающий лишай обычно возникает у пожилых людей, переболевших ветрянкой. Его симптомы — с одной стороны на теле появляется сыпь и часто сильная боль. Болезнь развивается из-за вируса Varicella-zoster, который остался в организме после ветрянки и реактивировался из-за возрастного ухудшения работы иммунной системы. Если в России мало кто знает о прививке от ветряной оспы, то о прививке, предотвращающей развитие опоясывающего лишая, в курсе, наверное, только самые продвинутые пациенты. К сожалению, у нас эта вакцина не зарегистрирована, но все, кому исполнилось 60 лет, могут привиться в заграничной поездке.

Ооцисты паразита Plasmodium yoelii, вызывающего малярию у грызунов

Человечество уже очень давно пытается придумать вакцину от малярии. Небывалый успех, которого удалось добиться относительно недавно, — это прививка с эффективностью 18–39 процентов (в зависимости от возраста ребенка и количества доз). Вакцина называется RTS,S/AS01. Всемирная организация здравоохранения решила, что раз ничего лучше нет, то эту прививку опробуют в 3–5 африканских странах, где высок риск заразиться малярией. При этом, понятно, RTS,S/AS01 идет в комплекте со всеми остальными мерами предосторожности: противомоскитными сетками, инсектицидными спреями и др. Полагаться на нее одну было бы безумием. Если опыт этих стран покажет, что вакцина действительно приносит пользу и нет никаких неожиданных препятствий для того, чтобы она демонстрировала эту свою скромную эффективность, практику распространят на остальные страны.

Но какими бы любопытными ни были эти вакцины, главное — помнить о тех, что нужны вам по календарю. Да, взрослым надо прививаться не только когда они едут в тропические леса Бразилии или когда работают со шкурами оленей.

Автор благодарит за помощь в подготовке материала инфекциониста Дмитрия Трощанского.

Нашли опечатку? Выделите фрагмент и нажмите Ctrl+Enter.

Решите любимую математическую задачу совладельца Группы «Тинькофф»

источник

Что представляет собой аденовирус? Чем он опасен? Как от него защититься? Попробуем разобраться с поставленными вопросами.

Аденовирус (с греческого «aden» — железа и латинского «virus» — яд) впервые выделен в 1953 году группой американских учёных-вирусологов. Они обнаружили неизвестный вирус в аденоидах (увеличенная глоточная миндалина) ребёнка. Позже аденовирус находили в смывах из носоглотки у больных пневмонией, конъюнктивитом, фарингитом.

Аденовирусы — это семейство ДНК-содержащих вирусов, размножающихся в клетках животных и людей. Всего известно около 100 серотипов вируса. Серотипы 1, 2, 3, 4, 7, 14, 21, 34, 35 вызывают острую респираторную инфекцию и поражение глаз. Аденовирус 8-го серотипа связан с поражением роговицы (кератит). Тяжёлые пневмонии и бронхиты вызывают серотипы 34, 35, 7, 1, 21, 2, 5, 31.

Они являются причиной острых респираторных заболеваний (простуд) примерно в 10% случаев.

Аденовирусная инфекция – острый вирусный инфекционный процесс, сопровождающийся поражением дыхательных путей, глаз, лимфоидной ткани, пищеварительного тракта. Признаками аденовирусной инфекции служат умеренная интоксикация, лихорадка, ринорея, осиплость голоса, кашель, гиперемия конъюнктивы, слизистое отделяемое из глаз, нарушение функции кишечника. Кроме клинических проявлений, при постановке диагноза применяются серологические и вирусологические методы исследования. Терапия аденовирусной инфекции проводится противовирусными препаратами (внутрь и местно), иммуномодуляторами и иммуностимуляторами, симптоматическими средствами.

Аденовирусная инфекция – заболевание из группы ОРВИ, вызываемое аденовирусом и характеризующееся развитием ринофарингита, ларинготрахеобронхита, конъюнктивита, лимфаденопатии, диспепсического синдрома. В общей структуре острых респираторных заболеваний аденовирусная инфекция составляет около 20%. Наибольшую восприимчивость к аденовирусам демонстрируют дети от 6 месяцев до 3-х лет. Считается, что в дошкольном возрасте практически все дети переносят один или несколько эпизодов аденовирусной инфекции. Спорадические случаи аденовирусной инфекции регистрируются круглогодично; в холодное время года заболеваемость носит характер эпидемических вспышек. Пристальное внимание к аденовирусной инфекции приковано со стороны инфекционных болезней, педиатрии, отоларингологии, офтальмологии.

В настоящее время известно более 30 сероваров вирусов семейства Adenoviridae, вызывающих заболевание человека. Наиболее частой причиной вспышек аденовирусной инфекции у взрослых выступают 3, 4, 7, 14 и 21 серотипы. Серовары типов 1, 2, 5, 6 обычно поражают детей-дошкольников. Возбудителями фарингоконъюнктивальной лихорадки и аденовирусного конъюнктивита в большинстве случаев служат серотипы 3, 4, 7.

Вирионы возбудителя содержат двухцепочечную ДНК, имеют диаметр 70-90 нм и три антигена (группоспецифический А-антиген; определяющий токсические свойства аденовируса В-антиген и типоспецифический С-антиген). Аденовирусы относительно устойчивы во внешней среде: при обычных условиях сохраняются в течение 2-х недель, хорошо переносят низкие температуры и высушивание. Вместе с тем, возбудитель аденовирусной инфекции инактивируется при воздействии ультрафиолетовых лучей и хлорсодержащих дезинфектантов.

Аденовирусы распространяются от больных людей, которые выделяют возбудителя с носоглоточной слизью и фекалиями. Отсюда существует 2 основных пути заражения – в раннем периоде заболевания — воздушно-капельный; в позднем — фекально-оральный – в этом случае заболевание протекает по типу кишечных инфекций. Возможен водный путь заражения, поэтому аденовирусную инфекцию часто называют «болезнью плавательных бассейнов». Источником аденовирусной инфекции также могут являться вирусоносители, пациенты с бессимптомными и стертыми формами болезни. Иммунитет после перенесенной инфекции типоспецифический, поэтому возможны повторные заболевания, вызванные другим серотипом вируса. Встречается внутрибольничное инфицирование, в т. ч. при проведении парентеральных лечебных процедур.

Аденовирус может проникать в организм через слизистые верхних дыхательных путей, кишечника или конъюнктиву. Репродукция вируса протекает в эпителиальных клетках, регионарных лимфатических узлах и лимфоидных образованиях кишечника, что по времени совпадает с инкубационным периодом аденовирусной инфекции. После гибели пораженных клеток вирусные частицы высвобождаются и проникают в кровь, вызывая вирусемию. Изменения развиваются в оболочке носа, миндалин, задней стенки глотки, конъюнктивы; воспаление сопровождается выраженным экссудативным компонентом, что обусловливает появление серозного отделяемого из полости носа и конъюнктивы. Вирусемия может приводить к вовлечению в патологический процесс бронхов, пищеварительного тракта, почек, печени, селезенки.

Основными клиническими синдромами, форму которых может принимать аденовирусная инфекция, служат: катар дыхательных путей (ринофарингит, тонзиллофарингит, ларинготрахеобронхит), фарингоконъюнктивальная лихорадка, острый конъюнктивит и кератоконъюнктивит, диарейный синдром. Течение аденовирусной инфекции может быть легким, среднетяжелым и тяжелым; неосложненным и осложненным.

Инкубационный период при аденовирусной инфекции длится 2-12 дней (чаще 5-7 дней), вслед за чем следует манифестный период с последовательным появлением симптомов. Ранними признаками служат повышение температуры тела до 38-39 °С и умеренно выраженные симптомы интоксикации (вялость, ухудшение аппетита, мышечные и суставные боли). Одновременно с лихорадкой возникают катаральные изменения в верхних дыхательных путях. Появляются серозные выделения из носа, которые затем становятся слизисто-гнойными; затрудняется носовое дыхание. Отмечается умеренная гиперемия и отечность слизистой оболочки задней стенки глотки, точечный белесоватый налет на миндалинах. При аденовирусной инфекции возникает реакция со стороны подчелюстных и шейных лимфоузлов. В случае развития ларинготрахеобронхита появляется осиплость голоса, сухой лающий кашель, возможна одышка, развитие ларингоспазма.

Поражение конъюнктивы при аденовирусной инфекции может протекать по типу катарального, фолликулярного или пленчатого конъюнктивита. Обычно в патологический процесс глаза вовлекаются поочередно. Беспокоит резь, жжение, слезотечение, ощущение присутствия инородного тела в глазу. При осмотре выявляется умеренное покраснение и отек кожи век, гиперемия и зернистость конъюнктивы, инъецированность склер, иногда – наличие плотной серовато-белой пленки на конъюнктиве. На второй неделе заболевания к конъюнктивиту могут присоединяться признаки кератита.

Если аденовирусная инфекция протекает в кишечной форме, возникают приступообразные боли в околопупочной и правой подвздошной области, лихорадка, диарея, рвота, мезентериальный лимфаденит. При выраженном болевом синдроме клиника напоминает острый аппендицит.

Лихорадка при аденовирусной инфекции длится 1-2 недели и может носить волнообразный характер. Признаки ринита и конъюнктивита стихают через 7-14 дней, катара верхних дыхательных путей – через 14-21 день. При тяжелой форме заболевания поражаются паренхиматозные органы; может возникать менингоэнцефалит. У детей первого года жизни нередко развивается аденовирусная пневмония и выраженная дыхательная недостаточность. Осложненное течение аденовирусной инфекции обычно связано с наслоением вторичной инфекции; наиболее частыми осложнениями заболевания служат синусит, средний отит, бактериальная пневмония.

Распознавание аденовирусной инфекции обычно производится на основании клинических данных: лихорадки, катара дыхательных путей, конъюнктивита, полиаденита, последовательного развития симптомов. Методами экспресс-диагностики аденовирусной инфекции служит реакция иммунофлюоресценции и иммунная электронная микроскопия. Ретроспективное подтверждение этиологического диагноза проводится методами ИФА, РТГА, РСК. Вирусологическая диагностика предполагает выделение аденовируса из носоглоточных смывов, соскоба с конъюнктивы и фекалий больного, однако ввиду сложности и длительности редко используется в клинической практике.

Дифференциальную диагностику различных клинических форм аденовирусной инфекции проводят с гриппом, другими ОРВИ, дифтерией глотки и глаз, инфекционным мононуклеозом, микоплазменной инфекцией, иерсиниозом. С этой целью, а также для назначения местного этиотропного лечения пациенты нуждаются в консультации офтальмолога и отоларинголога.

Общая этиотропная терапия проводится препаратами антивирусного действия ( умифеновир, рибавирин, препарат из антител к гамма-интерферону человека). Местная терапия аденовирусной инфекции включает: инстилляции глазных капель (раствора дезоксирибонуклеазы или сульфацила натрия), аппликации ацикловира в виде глазной мази за веко, интраназальное применение оксалиновой мази, эндоназальную и эндофарингеальную инстилляцию интерферона. Проводится симптоматическая и посиндромная терапия: ингаляции, прием жаропонижающих, противокашлевых и отхаркивающих препаратов, витаминов. При аденовирусной инфекции, отягощенной бактериальными осложнениями, назначаются антибиотики.

Неосложненные формы аденовирусной инфекции оканчиваются благоприятно. Смертельные исходы могут отмечаться у детей раннего возраста в связи с возникновением тяжелых бактериальных осложнений. Профилактика аналогична предупреждению других ОРВИ. В периоды эпидемических вспышек показана изоляция больных; проведение текущей дезинфекции, проветривания и УФО помещений; назначение интерферона лицам, подвергшимся риску заражения. Специфическая вакцинация против аденовирусной инфекции пока не разработана.

источник

Аденовирусная инфекция (код по МКБ-10: A08.2, A85.1, A87.1, B30.0, B30.1, J12.0) — остро протекающее заболевание инфекционной природы, вызываемое аденовирусом различных серотипов, поражающих слизистые оболочки респираторного, гастроэнтерального, урогенитального тракта, конъюнктив глаз и лимфоидную ткань, протекающих с умеренно выраженным интоксикационным синдромом.

Аденовирусная инфекция чаще поражает детей и лиц молодого возраста. Наиболее восприимчивыми к аденовирусам являются дети 6 месяцев — 3 лет. Клиническая значимость аденовирусных заболеваний определяется широким распространением возбудителя, высоким риском возникновения эпидемических вспышек, значительным удельным весом (15-20% по разным данным) в структуре ОРВИ вирусных заболеваний верхних дыхательных путей, поражений конъюнктивы, лимфоидной ткани и кишечных расстройств. Актуальность аденовирусной инфекции также обусловлена научно доказанной онкогенной активностью ряда серотипов возбудителя и его возможностью принимать участие в образовании гибридных вирусов, имеющих особые биологические свойства, в частности, усиленную онкогенность.

О высокой восприимчивости населения и перенесенных инфекционных заболеваниях аденовирусной природы свидетельствует то, что практически у 80% взрослых людей обнаруживают антитела к аденовирусам. При этом, некоторые серотипы аденовируса могут персистировать в организме латентно без местной воспалительной реакции, так и после перенесенного типичного аденовирусного заболевания. Предполагается, что реинфицирование организма человека теми же серотипами протекает бессимптомно, что, по-видимому, и объясняет более низкую заболеваемость среди взрослых лиц.

Патогенез аденовирусной инфекции до настоящего времени изучен не полностью. В его основе — характер взаимодействия аденовируса с клетками организма человека. На сегодняшний день известно три типа взаимодействия:

  • Литический инфекционный процесс, при котором вирусы в процессе репликации (размножения) покидают эпителиальную клетку и поражают новые клетки, что приводит к накоплению большого количества вирусных частиц и гибели клетки хозяина. Этот тип взаимодействия характерен для остропротекающих аденовирусных заболеваний с поражением эпителия слизистой дыхательных путей, кишечника, конъюнктив, лимфоидной ткани.
  • Латентная (хроническая) инфекция. Как правило протекает в лимфоидных клетках, но механизмы латенции полностью не расшифрованы.
  • Онкогенная трансформация клеток человека, при которой происходит встраивание в геном клетки ДНК аденовируса.

Местом первичной локализации (входными воротами) и первичного накопления аденовирусов являются эпителиоциты эпителия носоротоглотки, слизистой конъюнктивы или эпителия тонкого кишечника. Период накопления вирусов в эпителиоцитах и регионарных лимфатических узлах в среднем соответствует длительности инкубационного периода. Воспалительный процесс часто протекает стадийно-нисходящим путем: верхние дыхательные пути — мелкие бронхи — легкие с поражением подслизистого слоя и перибронхиальной ткани, обусловливая очаговую/интерстициальную пневмонию. Процесс в легких сопровождается увеличением трахеобронхиальных лимфоузлов. В местах поражения эпителия развивается воспалительная реакция с расширением капилляров слизистой, гиперплазией подслизистого слоя с инфильтрацией мононуклеарными лейкоцитами, зачастую с кровоизлияниями. При попадании вируса на конъюнктиву развивается кератоконъюнктивит с нарушением зрения.

Попадание аденовируса в кишечник и поражение его эпителия происходит различными путями: заглатыванием инфицированной носоглоточной слизи при наличии назофарингита и алиментарным путем, при котором эпителий кишечника поражается первично, сопровождаясь клиникой острого энтерита с поражением регионарных лимфатических узлов и мезаденита. Также возбудитель может проникать лимфогенным путём в различные регионарные лимфоузлы, что приводит к гиперплазии лимфоидной ткани и накопление вируса.

Развитие интоксикации и появление лихорадки характерно для стадии первичной вирусемии. При этом, нарушается проницаемость стенок сосудов, что вызывает выраженную экссудацию и способствует развитию отеков, а выпадение фибрина в сочетании с некрозом клеток эпителия дыхательных путей/конъюнктивы приводит к образованию на задней стенке глотки, миндалинах, конъюнктиве пленчатых налетов.

В дальнейшем аденовирусы заносятся в паренхиматозные органы (почки, печень, селезенку), нервную систему, лимфатические узлы, где происходит их дальнейшее накопление, сопровождаемое системной лимфаденопатией, увеличением печени и селезенки (гепатолиенальный синдром).

Очевидно, повторные волны вирусемии обеспечивают длительность лихорадки, ее всплески. Вирусемия может наблюдаться не только в период манифестации заболевания, но и при латентно текущей инфекции. Антитела к аденовирусам в крови обнаруживаются с 8-10-го дня, достигая максимума через 2-3 недели. При этом, уровень нейтрализующих антител практически не меняется на протяжении длительного периода (нескольких лет), обеспечивая длительный типоспецифический стойкий иммунитет.

В основу классификации АДВИ положен принцип ведущего клинического синдрома (локализации воспалительного процесса), в соответствии с которым принято выделять:

  • ОРЗ аденовирусного генеза (ринит, ринофарингит, тонзиллит, ринофаринготонзиллит, трахеобронхит).
  • Аденовирусная пневмония.
  • Эпидемический кератоконюнктивит.
  • Фарингоконъюнктивальная лихорадка.
  • Аденовирусный гастроэнтерит.
  • Аденовирусный геморрагический цистит.
  • Поражения нервной системы (энцефалит, менингит, полирадикулоневрит) аденовирусного генеза.
  • Аденовирусные заболевания при иммунодефицитах (СПИД).

По степени тяжести выделяют:

  • Легкую форму. При легкой форме (острое катаральное воспаление респираторного трактата — риноларинготрахеобронхит, глотки — острый фарингит, регионарный лимфаденит, острый конъюнктивит).
  • Среднетяжёлую форму. Протекает с выраженными катаральными явлениями, лимфаденопатией, гиперплазией лимфоидных ткани ротоглотки, катарально-фолликулярным конъюнктивитом.
  • Тяжелую форму. Протекает на фоне генерализованного распространения вируса с попаданием в эпителиальные клетки кишечника, почек, печени, поджелудочной железы, ганглии головного мозга с выраженным воспалительным процессом, расстройством кровообращения и зачастую, с присоединением вторичной инфекции.

Аденовирусы относятся к ДНК-содержащим вирусам. Естественными хозяевами аденовирусов, являются млекопитающие и птицы. Известно около 100 сероваров вирусов и около 51 из них обнаружены у людей.

Аденовирион по форме представляет собой икосаэдр, геном которого содержит одну линейную двунитчатую ДНК и более 10 белков, образующих его структуру, в том числе и капсид вириона. Репликация вируса и его сборка осуществляется в ядре, а высвобождение вирионов происходит с разрушением эпителиальной клетки. По гемагглютинирующим свойствам и патогенности аденовирусы подразделяются на несколько подгрупп (А, В, С, D, E, F, G).

Антигенная структура аденовируса представлена тремя антигенами: групповой- общий (А-антиген), токсический, вызывающий цитопатическое действие в ткани (В-антиген) и типоспецифический, С-антиген. К важнейшим свойствам аденовирусов относится эпителиотропность – способность поражать клетки эпителия респираторного тракта, конъюнктивы, лимфоидной ткани, кишечника.

Вирус чрезвычайно устойчив в окружающей среде и может длительно (в течение 2-3 недель) сохраняться в воде и на стандартных предметах обихода при комнатной температуре (22 °С). Погибает в течение 30 минут при 56°C или под воздействием дезинфекционных хлорсодержащих препаратов в умеренных концентрациях и ультрафиолетового облучения.

Источник инфекции — вирусоноситель/больной человек, который продолжает выделять вирус во внешнюю среду с секретом верхних дыхательных путей еще на протяжении 25-28 дней после перенесенного заболевания, а с фекалиями – более 1,5 месяца. Механизм передачи аденовирусной инфекции преимущественно аэрозольный (воздушно-капельный), значительно реже — фекально-оральный (алиментарный, через инфицированные посуду, одежду, игрушки, испражнения), крайне редко — через контаминированные объекты внешней среды. Отмечается восприимчивость взрослых лиц и детей к аденовирусной инфекции. После перенесенного заболевания формируется типоспецифичный стойкий иммунитет, соответственно, могут возникать случаи повторных аденовирусных заболеваний, обусловленные другими сероварами вируса.

Входными воротами являются слизистая оболочка респираторного, кишечного тракта или конъюнктива глаз. Особенно часто АДВИ встречается у детей младшего возраста старше 6 месяцев и до 3-х лет. Дети более младшего возраста аденовирусной инфекцией практически не болеют в силу наличия у них пассивного иммунитета, полученного им от матери в виде типоспецифических антител, который после шести месяцев ослабевает, и ребенок становится восприимчив к аденовирусу.

Заболевание встречается круглогодично в виде спорадических случаев. Пик заболеваемости приходится на зимне-весенний период, в котором имеют место эпидемиологические вспышки аденовирусной инфекции в условиях тесного общения детей в организованных детских коллективах. Вспышки инфекции наиболее характерны для 3, 4, 7, 14 и 21 сероваров. Доля АДВИ составляет:

  • в общей заболеваемости 0,8-1,4%;
  • в инфекционной заболеваемости 10-12%;
  • в группе ОРИ – 22-25%.

Разные серовары обуславливают различные клинические варианты инфекционной патологии:

  • Серовары 1, 2, 5, 34, 35 группы С поражают эпителий дыхательных путей/кишечника у детей с длительной персистенцией в аденоидах и миндалинах.
  • Cеровары 4, 7, 14, 21 группы B – являются возбудителями ОРВИ у взрослых лиц.
  • Серовар 3 вызывает острую фарингоконъюнктивальную лихорадку.
  • Серовар 3, 4 вызывает аденовирусный геморрагический конъюнктивит.

Аденовирусная инфекция у иммунокомпетентных пациентов и детей может протекать в виде манифестных форм с широким спектром клинических проявлений, а также в виде субклинических стертых и латентных форм практически без симптоматики. Инкубационный период варьирует от 1 до 12 суток.

Для аденовирусных заболеваний характерен ряд особенностей:

  • Полиморфизм клинической симптоматики, что обусловлено вовлечением в воспалительный процесс различных систем/органов с появлением новых симптомов, что способствует относительно длительному течению аденовирусных заболеваний. Характерно преобладание местных симптомов относительно общих.
  • Длительный период (2-14 суток) повышенной температуры тела (чаще в пределах 38-39С) с лихорадкой различного типа.
  • Не выраженный интоксикационный синдром.
  • При поражении дыхательной системы — преобладание экссудативного компонента над умеренной симптоматикой общей интоксикации.
  • Острое начало: озноб, снижение аппетита, слабость, умеренная головная боль, возможны боли в суставах, мышцах. Со 2-3 дня — повышение температуры.

Манифестные формы АДВИ могут протекать в различных вариантах с соответствующими клиническими проявлениями:

  • ОРЗ (острое респираторное заболевание). Встречается как у детей, так и у взрослых. Как правило, начинается с катарального синдрома в виде ринита — выраженной ринореи и затруднения дыхания. Серозные выделения, вскоре приобретают слизисто-гнойный характер. Продолжительность ринита может составлять 2-3 недели. Через 1-2 дня у 80-90 % пациентов появляются симптомы тонзиллита и в 50-60 % пациентов — фарингита, сопровождаемые чувством першения/жжения в области задней стенки глотки и умеренной болью при глотании. Слизистая ротоглотки отечная, мягкое небо интактно. На задней стенке глотки видны гиперплазированные фолликулы, иногда с слизистыми налетами. В ряде случаев в процесс вовлекаются низлежащие отделы дыхательных путей с развитием клиники комбинированного поражения — ринофаринготонзиллита, ларингита, трахеита, бронхита разной степени выраженности. Какие-либо специфические признаки отсутствуют за исключением экссудативного компонента, что проявляется кашлем со слизистой мокротой. Вовлечение в патологический процесс лимфоидной ткани проявляется увеличением подчелюстных, шейных регионарных лимфатических узлов, реже — системной лимфаденопатией с увеличением отдаленных лимфатических узлов. Лимфоузлы мягкоэластическаой консистенции, безболезненны, не спаяны с тканями. Часто у пациентов кроме лимфаденопатии развивается синдром гепатоспленомегалии. Длительность и выраженность интоксикационного синдрома определяются тяжестью и распространенностью воспалительного процесса. Аденовирусная пневмония, как самостоятельная нозологическая форма у иммунокомпетентных взрослых лиц встречается относительно редко. Эта форма аденовирусной инфекции чаще встречается у детей раннего возраста, имеет преимущественно диффузный характер поражения и как правило, выраженными катаральными явлениями респираторного тракта и конъюнктивитом. Аденовирусная пневмония протекает с выраженной интоксикацией (высокой температурой, слизистой мокротой, мышечными болями). Тяжесть процесса обусловлена выраженным экссудативным компонентом, что способствует нарушению проходимости бронхов. Следует учитывать и то, что клиническая симптоматика иногда отягощается за счет присоединения вторичной микробной флоры (микстинфекция с стрептококками, стафилококками).
  • Фарингоконъюнктивальная лихорадка. Обычно вызывается аденовирусом серовара 3. Характеризуется острым началом, повышением температуры до 38 ºС, наличием симптомов конъюнктивита, ринита, фарингита (заложенность носа, боль в горле, глазах, ломота в теле), увеличением лимфоузлов. Продолжительность лихорадочного периода от 3-5 до 12-14 дней. Симптомы манифестируют чаще одновременно, но могут появляться и последовательно на протяжении нескольких дней. Характерным симптомом является катаральный, фолликулярный или пленчатый конъюнктивит, позволяющий отличить АДВИ от других ОРВИ. При этом, конъюнктивит будет появляться в первые дни болезни или на второй волне заболевания. Пациенты жалуются на ощущение «песка» и резь в глазах, веки отечны, глазная щель сужена, конъюнктива гиперемированная, резко отечна, отмечается скудное отделяемое. Иногда на фоне выраженной экссудации появляется пленчатый налет. Чаще поражается один глаз вначале, но зачастую позже вовлекается в процесс и второй глаз. Обычно конъюнктивит сохраняется после снижения температуры, в то время как боль в горле уже стихает. Регионарный лимфаденит сохраняется иногда на протяжении нескольких недель. Присутствует общеинтоксикационный синдром (отсутствие аппетита, слабость, мышечная и головная боль), реже явления менингизма. После перенесенного заболевания, особенно у детей отмечается длительная астения.
  • Эпидемический кератоконъюнктивит. Наиболее часто заболевание вызывает аденовирус типа 8, инкубационный период может увеличиваться до 3 недель, а симптоматика конъюнктивита сохраняется до месяца. Заболевание начинается постепенно, часто поражаются сразу оба глаза. Кератит развивается, когда симптомы конъюнктивита уже затихают, но его длительность может составлять 1-3 месяца и приводить к снижению зрения. Интоксикационный синдром, выражен слабо, предушные лимфатические узлы увеличены, катаральные явления практически отсутствуют. Реже заболевание протекает в виде конъюнктивита без вовлечения/с минимальным вовлечение в процесс роговицы. Основными жалобами в таком случае слезотечение и жжение в глазах остаются. Заболевание высоко контагиозное и все лица ближайшего окружения больного подвергаются значительному риску инфицирования.
  • Аденовирусный гастроэнтерит (серотип 1, 3, 40, 41). Регистрируется преимущественно у детей младшего возраста и новорожденных. Характерно бурное острое начало с частым жидким стулом, который в скором теряет каловый характер, тошнотой и периодической рвотой, вздутием живота и урчанием в кишечнике, повышением температуры до 39 С. Диарея у детей очень часто сочетается с конъюнктивитом и симптомами поражения дыхательных путей. Достаточно быстро развивается обезвоживание организма. У взрослых заболевание протекает легче — жалобы на слабость, жидкий стул, приступообразную боль в животе. Температура в пределах 38ºС, диарея у взрослых протекает без обезвоживания, обще интоксикационный синдром выражен умеренно. Длительность гастроэнтерита — 1-4 суток. Как осложнение аденовирусного гастроэнтерита можно считать появление респираторного синдрома (ринит, тонзиллит, фарингит).
  • Аденовирусный геморрагический цистит. Встречается относительно редко, преимущественно у детей и лиц молодого возраста. Вызывается аденовирусами типов 11 и 21. Путь проникновения аденовируса в мочевые пути до конца еще не выяснен. Заболевание начинается внезапно с дизурической симптоматики (частые позывы, боль при мочеиспускании, макрогематурия). В дальнейшем на протяжении 10-14 суток может выявляться микрогематурия. Заболевание продолжается до 2 недель. Соответствующие симптомы у детей менее выражены, а в ряде случаев заболевание протекает в субклинический форме.
  • Поражения нервной системы (энцефалит, менингит, полирадикулоневрит) при аденовирусных заболеваниях. Проявляется симптомами общемозговых расстройств (менингизм), обусловленных церебральными циркуляторными нарушениями. Как правило, симптоматика поражения ЦНС (ригидность мышц затылка, головная боль, положительный симптом Кернига) протекает на фоне клинических проявлений какого-либо аденовирусной инфекции (ОРЗ, фарингоконъюнктивальная лихорадка пневмония). Реже заболевание протекает с специфическим преимущественным аденовирусным поражением нервной системы в виде менингоэнцефалита, серозного менингита, полирадикулоневрита.
  • Аденовирусные заболеваний у иммуноскомпрометированных пациентов. Вызывается аденовирусами серотипа 34 и 35. Протекает чаще по типу пневмонии, геморрагического цистита, пневмонии, гастроэнтерита. Заболевание характеризуется тяжелым течением и сопровождается высоким уровнем смертности (до 70%). К факторам риска относят длительную иммуносупрессию и нейтропению, трансплантацию солидных органов и стволовых клеток, лимфопению, реакцию «трансплантат против хозяина».
Читайте также:  Циклоферон инструкция при аденовирусной инфекции

В целом, аденовирусная инфекция относится преимущественно к патологии детского возраста. При этом, у новорожденных она, если мать имеет достаточно напряженный иммунитет, протекает легко или вообще бессимптомно. Наиболее уязвимой группой являются дети 1-го года жизни, у которых респираторные проявления зачастую сочетаются с дыхательной недостаточностью, астматическим синдромом, ложным крупом, а диарейный синдром протекает с выраженным обезвоживанием. Дети старшего возраста болеют преимущественно легкими формами заболевания (ринит, фарингит).

Взрослые лица переносят заболевание сравнительно легко и болеют реже, что обусловлено как наличием специфических антител к определенному типу вируса, так и защитной ролью гетерологичных антител. По-видимому, частые инфицирования организма различными серотипами аденовирусов способствуют повышению напряженности гуморального иммунитета к гомологичным/гетерологичным видам аденовируса. В связи с чем реинфекция в большинстве случаев протекает легко или даже не приводит к заболеванию. Во многих случаях у взрослых такие формы заболевания, как тонзиллит или фарингит обусловлены активацией латентной инфекции, снижающей местную/общую реактивность организма.

Опорными признаки диагностики аденовирусной инфекции являются:

  • характерный эпидемический анамнез;
  • катаральный синдром поражения респираторного тракта;
  • конъюнктивит;
  • слабовыраженный синдромом интоксикации;
  • экссудативный характер воспаления;
  • лимфопролиферативный синдром;
  • гепатоспленомегалия;
  • волнообразное течение.

Методами экспресс-диагностики АДВИ являются иммунная электронная микроскопия и реакция иммунофлюоресценции. Вирусологическая диагностика (выделение аденовируса из биоматериала — соскоба с конъюнктивы, носоглоточных смывов, фекалий) в клинической практике ввиду сложности и длительности используется редко. Наиболее специфичной и чувствительной является полимеразно-цепная реакция, способная выявить отдельные ДНК вируса в исследуемом биоматериале.

Инструментальные методы (ренгеногарфия, фибробронхоскопия) проводятся по показаниям.
Дифференциальная диагностика проводится в зависимости от клинической формы АДВИ с гриппом, ОРВИ, конъюнктивитами/кератоконъюнктивитами различной этиологии, пневмониями, туберкулёзом.

Мы рассмотрели симптомы и теперь рассмотрим лечение аденовирусной инфекции у взрослых. Лечение проводится амбулаторно и только при тяжелом или осложненном течении заболевания показана госпитализация. В домашних условиях необходима изоляция больного и масочный режим. Назначается постельный режим, легкая диета и обильное питье. Важна гигиеническая обработка носоглотки и глаз три и более раз в день с использованием индивидуальных средств по уходу.

В целом, лечение аденовирусной инфекция у взрослых включает:

  • Противовирусную терапию, эффективность которой подтверждена многими исследованиями. Она сокращает длительность течения болезни, уменьшает проявления ее и тяжесть, препятствует активации бактериальной инфекции.
  • Патогенетическую терапию: дезинтоксикационные мероприятия (обильное питье), антигистаминные препараты, аскорбиновую кислоту, иммуномодулирующие препараты.
  • Симптоматическую терапию: жаропонижающие средства, при выраженной заложенности носа — сосудосуживающие капли (их не стоит использовать более 5–6 дней), при наличии кашля — противокашлевые и отхаркивающие средства.

Что касается самой противовирусной терапии, то она может состоять из:

  • Химиотерапевтических препаратов, оказывающих прямое воздействие на вирус — общее (при приеме внутрь или внутримышечном введении) и местное в случае конъюнктивита (глазные капли или мази и гели).
  • Неспецифической иммунотерапии (интерфероны, индукторы интерферона).

Препараты прямого действия быстро купируют симптомы в период разгара аденовирусных инфекций и назначаются большей частью при средней и тяжелой степени заболевания. С целью уменьшения частоты развития осложнений (пневмонии) и развития затяжного течения с рецидивами чаще всего применяется индуктор «поздних» интерферонов Кагоцел.

Вышеперечисленные препараты прямого действия активны в отношении не только вирусов гриппа, герпеса, но и аденовирусов. Они уменьшают длительность основных симптомов в период разгара аденовирусной инфекции (интоксикация, лихорадка, боль в горле, слезотечение), но почти не влияют на частоту вирус-ассоциированных пневмоний и рецидивы заболевания. Затяжное и рецидивирующее течение, «поздние» пневмонии связаны с длительным пребыванием аденовирусов в тканях, в основном, в лимфоидной.

Кагоцел и другие индукторы интерферонов уменьшают частоту развития пневмоний, затяжного и рецидивирующего течения. Также уменьшают длительность ринита и кашля. Учитывая то, что продолжительность действия этого препарата после однократного приема составляет пять суток, его можно применять коротким курсом — достаточно 4-х дней.

Не все химические противовирусные средства можно применять беременным и детям. Препараты интерферона имеют много побочных эффектов и их регулярное применение сопряжено с риском возникновения аутоиммунных заболеваний (псориаз, красная волчанка, Синдрома Шегрена, инсулинозависимый диабет).

В случае, если противопоказан прием химических фармацевтических препаратов, для лечения применяют гомеопатические средства (Сандра, Оциллококцинум) или противовирусные средства на растительной основе. Например, препарат Гипорамин (суппозитории, таблетки, мазь) разрешен к применению у беременных и детей с 3 лет. Он индуцирует продукцию интерферона и способствует сокращению длительности проявлений (кашель, ринит, температура, хрипы, стеноз гортани). Взрослым этот препарат назначают по 1 таблетке 4-5 раз в день, детям с 3до 12 лет по 1/2–1 таблетке 2-4 раза. Курс лечения составляет 3-5 суток.

Часто аденовирусная инфекция у взрослых протекает с длительным повышением температуры до 38-39 C, которая может держаться в течение 10-14 дней. Лихорадка требует симптоматического применения жаропонижающих средств. Если цифры не превышают 38,50 С и самочувствие больного удовлетворительное, можно обойтись народными методами снижения температуры и дать организму возможность побороться с вирусом.

Такие симптомы аденовирусной инфекции у взрослых, как резь в глазах и слезотечение устраняются местным применением глазных мазей, капель и гелей с противовирусной активностью. Из индукторов интерферона второго поколения капли Полудан показали лучшие результаты при поражениях глаз аденовирусом. Препарат способствует продукции собственного интерферона, который значительно превосходит по эффективности любые препараты готового интерферона. Капли вводят в конъюнктивальный мешок до 8 раз в сутки, а по мере улучшения частоту уменьшают до 3–4 в день.

В случае присоединения гнойной инфекции при конъюнктивите дополнительно назначаются антибиотики в каплях (мазях), но не более трех раз в день. Предпочтение отдается мази Тобрекс Сигницефу, Офтаквиксу. Больным с конъюнктивитом необходимо знать о его контагиозности (заразности), поэтому важно воздержаться от контактов с детьми, не лезть руками в глаза, пользоваться индивидуальным полотенцем и отдельными ватными спонжиками для глаз.

Гиперплазия лимфоидных образований. Этот симптом чаще встречается у детей. Лимфаденопатия, иногда выраженная, становится поводом для включения гомеопатических составов с действием на лимфатические узлы — Лимфомиозот, Вокара.

Боль или першение в горле. Для устранения этих симптомов можно применять полоскания отварами трав, раствором фурацилина, однако эффективнее средства, которые имеют широкий спектр антибактериальной активности и к тому же дают обезболивающий эффект: Декатилен, Стрепсилс Интенсив, Гексорал Табс, Фарингосепт, Гексализ, Фалиминт. Многие из них содержат масло перечной мяты или эвкалипта, которые устраняют раздражение, уменьшают саднение и придают таблеткам приятный вкус.

Для местного лечения ротоглотки рациональными являются комбинированные препараты, которые оказывают комплексное действие. Например, Гексализ, который проявляет противомикробное и противовирусное действие, а также оказывает противовоспалительный и обезболивающий эффект.

Противовирусную активность обеспечивают входящие в препарат лизоцим и эноксолон. Биклотим активен в отношении бактериальной флоры, а также оказывает местноанестезирующее и противовоспалительное действие. Взрослые могут рассасывать таблетки каждые два часа (максимально восемь таблеток в день). Важно то, что препарат разрешено применять у беременных и кормящих, а также детей.

Кашель. При этой инфекции он продуктивный (с мокротой) и нет такого надсадного сухого кашля как при трахеите. В комплексной терапии применяют отхаркивающие средства растительного происхождения: Таблетки от кашля с термопсисом, сироп Алтейка, Проспан, Гербион подорожник, Бронхиал с мать и мачехой и подорожником, Сироп солодки.

Также эффективным является прием препаратов Эсперал или Эриспирус. Действующее вещество фенспирид оказывает бронхолитический и противовоспалительный эффект. Проведенные исследования доказывают высокую эффективность этих препаратов в качестве противокашлевого средства при любых респираторных инфекциях.

Если посетить форум по вопросу лечения респираторно-вирусных заболеваний у взрослых, то становится ясно, что большинство больных для симптоматического лечения пользуются комбинированными препаратами, которые отпускаются в разных формах (таблетки, порошки для приготовления растворов) и без рецепта. Удобством является то, что в их составе — от трех до пяти фармакологических веществ.

В целом они обладают жаропонижающим, противовоспалительным и обезболивающим действием (за счет Парацетамола), сосудосуживающим и антиэкссудативным (деконгестант фенилэфрин эффективно устраняет заложенность носа), антигистаминным (фенирамин или хлорфенирамин устраняют аллергический отек слизистой носа и глотки, несколько подавляют кашель) и ангиопретекторным действием (рутозид и аскорбиновая кислота, которая укрепляет стенки сосудов и рассматривается как патогенетическое средство – усиливает выработку эндогенного интерферона).

Некоторые комбинированные средства включают также кофеин, который устраняет седативное действие антигистаминных препаратов, уменьшает вялость и повышает работоспособность. К числу таких, часто употребляемых комбинированных средств, можно отнести Антифлу, Колдрекс, Милистан мультисимптомный, Инфлюнет, Фервекс, Ринза, Терафлю.

Многие препараты сочетают в себе не только вышеперечисленные эффекты, но и противовирусный и интерфероногенный, поскольку дополнительно включают Римантадин. Это препарат АнвиМакс, АнГриКапс максима, Антигриппин-максимум. Последний удобен тем, что выпускается в форме капсул с раздельным содержанием Парацетамола, если нет необходимости в снижении температуры (капсула синего цвета). Все прочие ингредиенты содержит капсула красного цвета. С лечебной целью препарат применяется не позднее 2 суток от начала появления первых симптомов. Длительность курса не должна превышать пяти дней.

Комбинированные средства целесообразно принимать тогда, когда присутствуют все симптомы заболевания. При наличии одного или двух (повышенная температура и насморк), лучше ограничиться монопрепаратами. Риск возникновения побочных эффектов в этом случае снижается.

Как лечить аденовирусную инфекцию при подозрении на осложнения бактериального характера? Наличие осложнений в виде пневмонии, отита, синусита, при обострении хронического пиелонефрита или острых инфекциях мочевыводящих путей — показание к дополнительному назначению антибиотиков. Чаще всего антибиотик при остром отите и синусите назначается эмпирически. Это связано с тем, что эти состояния требуют срочного назначения антибактериальной терапии. Назначаются аминопенициллины и цефалоспорины, поскольку к ним чувствительны основные бактериальные возбудители.

В случае их назначения рекомендуется обязательное включение в схему лечения любого пробиотика для предупреждения дисбиотических нарушений, а параллельное профилактическое назначение противогрибковых препаратов является необоснованным. Лечение аденовирусной инфекции у детей будет рассмотрено отдельно.

источник

Вакцина ассоциированная против аденовирусной, герпесвирусной инфекцией, парагриппа-3 и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная

Владельцы патента RU 2517733:

Представленная вакцина содержит концентрированные антигенные материалы из штамма «Adeno III WBR-1-ДЕП» 3-го серотипа I подгруппы, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы, из штамма «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» 4-го серотипа II подгруппы, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почки теленка Taurus-1, из штамма «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» герпесвируса типа I, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы, из штамма «SF-4-ДЕП» вируса парагриппа-3, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток легких эмбриона коровы и из штамма «ВК-1-ДЕП» вируса вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы. Концентрированные и авирулентные антигенные материалы, инактивированные формалином, соединяют с адъювантом в эффективном соотношении. Вакцина индуцирует высокий уровень антител против указанных инфекций и обеспечивает надежную защиту новорожденных телят, молодняка периода доращивания и откорма. 2 з.п. ф-лы, 7 табл., 9 пр.

Вакцина ассоциированная против аденовирусной, герпесвирусной инфекций, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности против вирусных респираторно-кишечных инфекций телят и обуславливаемых ими нарушений репродуктивной функции взрослого поголовья крупного рогатого скота (КРС).

Респираторные и желудочно-кишечные болезни молодняка крупного рогатого скота остаются одной из наиболее сложных проблем инфекционной патологии животных во многих странах мира, в том числе и России. В этиопатогенезе их с большей постоянностью регистрируются вирус парагриппа-3 (ПГ-3), герпесвирус типа I, вирус вирусной диареи — болезни слизистых (ВД-БС), респираторно-синцитиальный вирус, парво- и реовирусы, а также рота-, коронавирусы, патогенные виды бактерий, хламидий и микоплазм. Эти болезни, протекающие преимущественно в виде смешанной инфекции, широко распространены в современных крупных молочных комплексах и потери молодняка в них достигают 35-50% (Гаффаров Х.З. Инфекционные болезни рогатого скота хламидийной, микоплазменной и вирусной этиологии, разработка диагностических и лечебно-профилактических препаратов // Автореф. дис. … док. вет. Наук. — Казань. — 1986. — 39 с.).

Достоверно установлено участие в данной патологии и аденовирусов КРС I и II подгрупп, которые по мнению ряда ученых являются одним из четырех наиболее вероятных возбудителей респираторных заболеваний КРС и по распространенности стоят на втором месте после парагриппа-3. Кроме того, они признаны этиологическим агентом неопластических процессов и бессимптомных инфекций у человека и животных и потому имеют гораздо большее эпизоотическое и социально-экономическое значение, чем предполагалось раньше (Гуненков В.В., Сюрин В.Н., Вертинская К.К. Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота / Малоизвестные вирусные инфекции крупного рогатого скота. — Москва, 1972.- 47 с.; Mocsari Е. et al., 1974. — // Acta Vet. Acad. Sci. Hung. — 1974. -24. — №1-2. — P.39-43; Mohanty S.B. Comparative studies of Bovine Adenovims // Amer. J. Vet. Res. — 1971. — V.32. — №12. — P.1899-1905).

Касаясь спектра патогенности аденовирусов КРС в естественных условиях, следует заметить, что аденовирусная инфекция у телят от 2-недельного до 2-4-месячного возраста характеризуется острым течением, развиваются бронхопневмония, энтериты и конъюнктивиты, вследствие воспалительных процессов слизистых оболочек дыхательных путей и пищеварительного тракта. У взрослого поголовья КРС инфекция протекает латентно, сопровождаясь длительным вирусоносительством. Выделение аденовируса из плодов свидетельствует о возможности транспланцентарной передачи возбудителя.

Аденовирусы КРС представлены шестью серотипами, проявляющими различия в антигенной структуре: аденовирусы 1, 2 и 3-го серотипов реагируют перекрестие между собой, но не взаимодействуют с сыворотками 4, 5 и 6-го серотипов, что явилось причиной их деления на две антигенной подгруппы (Bartha A. Proposal for sub grouping of bovine adenoviruses // Acta vet. Acad. Sci. Hung. — 1969. — 19. — №3. — P.313-321; Rondhuis P.R. Bovine Adenoviruses. A Comparative Serological and Experimental Study // Drukkerij-Uitgeverij G. van Dijk N.V. Breukelen. — 1970. — P.218).

Аденовирусная инфекция КРС была впервые установлена в США в 1959 году (Klein H., Maitzman W., Levine A.J. Structure function relationships of the adenovirus DNA-binding protein // J. Biol. Chem. — 1979. — V.254. — P.11051-11060) затем в Англии (Darbyshire J.H. Bovine Adenoviruses // J. Amer. Vet. Med. Assoc. — 1968. — V.152. — P.786-792), Венгрии (Aldasy P., Csontos L., Bartha A. Pneumoenteritis in Caives Caused by Adenoviruses //Acta Vet. Acad. Sci. Hung. — 1965. — 15. — P.175-176), Голландии (Rondhuis P.R. Anew Bovine Adenovirus // Arch. ges. Virusforsch. — 1968. — 25. — P.235-236), Японии (Inaba Y., Tanaka Y., Sato Y., Ito K., Ito H., Matumoto M. Bovine adenovirus. II A.Serotype. Fukuroi, Recoverend from Japanene Cattle // Jap.J. MicrobioL — 1968. — 12. — P.219-229). Несколько позже это заболевание было зарегистрировано в Италии, Польше, ФРГ, Канаде, Австралии, Болгарии и в других странах.

О широком распространении аденовирусной инфекции свидетельствуют частые случаи выделения при инфекционных респираторных заболеваниях телят, а также высокий процент серопозитивности у взрослого скота. Так, в реакции нейтрализации (РН) аденовирусные антитела обнаружены у 66,8% (Sawhney D.S. Vadehre D.V, Baker R.C. // Poultry Sci. — 1973. — 52. — №2. — P.465-473), 60% (Adamesteanu L., Adamesteanu C. // Rev. zootehn. si med. vet. — 1973. — V.23. — №9.- P.51-56) от всего обследованного поголовья и у 73,41% животных в тех группах, в которых в период исследования наблюдались клинические симптомы респираторно-кишечных заболеваний.

В большинстве случаев в этиологии респираторных заболеваний телят удавалось установить участие не только аденовирусов, но и других, таких как вирусов ПГ-3, инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи и хламидий (Sawhney D.S. et al., 1973). Однако Mocsari, E. et al. считает, что аденовирусы играют более важную роль в этиологии респираторных и кишечных заболеваний телят, чем вирус инфекционного ринотрахеита и хламидий.

Экспериментальное заражение телят в возрасте 20-25 дней (Аугустинавичус Б.В. / в кн. Науч.-тех. информация. — Литов. науч. — иссл. вет. институт. — 1966. — С.3-5), 8 недель (Pons W.A., Cucullu A.F., Franz A.O., Lee Louise S., Goldblatt Leo A. // J. Assoc. Offic. Anal. Chem. — 1973. — 56. — №4. — P.803-807), 6-12 недель и даже 8-месячных животных аденовирусом КРС вызывало клинически выраженное заболевание. Более того, вирусы 3-го и 4-го серотипов вызывают более тяжелое заболевание у телят, чем вирусы 1-го и 2-го серотипов, которые вызывают легкую реакцию или вовсе ее не вызывают у телят, лишенных молозива или выкормленных на обычном рационе (Gillespie J. // J. Amer. Vet. Med. Assoc. — 1973. — 163. -№7. — Р.901).

Первые сообщения о неблагополучии хозяйств в отношении аденовирусной инфекции в СССР появилось в конце 60-х годов (Алиева Н.А., Ганиев М.К., Дрейзин Р.С., Алиева Р.А., Сарыев Г.А. Аденовирусная инфекция телят // Труды АзНИВИ. — 1967. — Т. XXI; Гуненков В.В., Халенев Г.А., Сюрин В.Н. Вирусные и хламидиозные респираторные и кишечные инфекции крупного рогатого скота // Животноводство и ветеринария. Проблемы ветеринарии, серия «Итоги науки и техники». — Москва, 1975. — Т.8. — С.87-95).

В период 1998-2003 гг. был регистрирован самый высокий уровень заболеваемости телят аденовирусной инфекцией в хозяйствах Московской области. Из 108 обследованных хозяйств во всех случаях установлена циркуляция вирусов ПГ-3 (100%), ИРТ (63,8%), вируса ВД-БС (38,8%), аденовируса (36,2%) и респираторно-синцитиального вируса (4,6%). Полученные данные указывают на значительную роль аденовирусной инфекции в этиологической структуре респираторно-кишечной патологии крупного рогатого скота в хозяйствах Российской Федерации (Лобова Т.П. Усовершенствование лабораторной диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота // Автореф. дис. … канд. биол. наук. — ФГОУ ВПО МГАВМиБ. — Москва. — 2006. — 19 с.).

С целью выяснения этиологии смешанных респираторных заболеваний в различных регионах Среднего Поволжья и Урала, в 2001-2004 годы было исследовано 1665 проб сывороток крови различных половозрастных групп крупного рогатого скота из 76 неблагополучных хозяйств на наличие антител к вирусам ПГ-3, ИРТ, ВД-БС и аденовирусной инфекции. Результаты исследований показали, что наибольший процент положительных проб выявлено к вирусу ПГ-3 — 76,6% и к вирусу ИРТ — 35%, а к аденовирусу — 18,4%, ВД-БС — 17,9% (Ахметсафин Р.Г. Усовершенствование средств диагностики и специфической профилактики смешанных респираторных инфекций телят // Автореф. дис. … канд. вет. наук. — Казань. — 2005. — 19 с.).

Меры профилактики и борьбы с аденовирусной инфекцией в Российской Федерации (РФ), традиционно используемые в настоящее время, не решают проблему вследствие недостаточно полного раскрытия этиологии данного симптомокомплекса в каждом отдельном случае, неизученности принципиальных особенностей ее проявления в современных крупных комплексах, отсутствия в них системного сероиммунологического мониторинга в отношении основных возбудителей респираторно-кишечной патологии, создающего трудности определения ведущей роли того или иного инфекционного агента при смешанных инфекциях, и, наконец, ветеринарная служба страны в настоящее время реально не располагает высокоэффективными методами и средствами ее диагностики и какими-либо биопрепаратами для ее специфической профилактики.

Обращает на себя внимание высказывание ряда ученых о том, что достижения в иммунопрофилактике аденовирусной инфекции более скромны, чем при других вирусных заболеваниях телят респираторно-кишечного комплекса (Edwards G.S., Wogan G.N. // Biochim. biophys. acta. — 1970. — V.224. — 597 p.; Darbyshire J.H. Bovine Adenoviruses // J. Amer.Vet. Med. Assoc. — 1968. — V.152. — P.786-792). Это обусловлено рядом трудностей, очевидно, в первую очередь, связано с множеством типов возбудителя и латентным течением у взрослых животных (Сюрин Н.В., Самуйленко А.Я. Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота // Вирусные болезни животных. — Москва. — ВНИТИБП, 1998. — С.795-801).

Читайте также:  Насморк после аденовирусной инфекции

В нашей стране в 70-80-е годы изыскания эффективных методов иммунопрофилактики данной инфекции проводились в двух направлениях: путем создания пассивной защиты с помощью поливалентных гипериммунных сывороток и формирования активного иммунитета с помощью вакцин.

Для специфической профилактики вирусных респираторно-кишечных инфекций молодняка и маточного поголовья крупного рогатого скота в РФ применяют живые и инактивированные вакцины.

Известна вирусвакцина «ТКА-ВИЭВ» против инфекционного ринотрахеита КРС, которая используется в случаях возникновения этой инфекции, иммунизируют всех животных, находящихся в эпизоотическом очаге, а также в хозяйствах мясного направления при стационарном неблагополучии — всех животных, подозрительных по заболеванию и подозреваемых в заражении.

Известна «Вакцина инактивированная против аденовирусной инфекции крупного рогатого скота», которая была разработана на основе полевых штаммов «КЛБ» и «Русь 18/81», относящихся к I и II подгруппам соответственно (Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Коленкова Л.М., Литвинов Т.И., Лобова Т.П. Вакцина против аденовирусной инфекции крупного рогатого скота / Авт. свидетельство №4486434/30-13/138050 от 29.08.89). Вакцина была изготовлена Покровским заводом биологических препаратов в количестве 125 литров. Биопрепарат был применен в хозяйствах Краснодарского края, Киргизской ССР и Белорусской ССР. Испытанная вакцина была признана безвредной и иммуногенной для глубокостельных коров и телят в возрасте 10-15 дней.

Однако смешанный характер проявления вирусных респираторно-кишечных инфекций и особенности циркуляции этих вирусов предполагает большую эффективность ассоциированных вакцин и применение моновакцин не обеспечивает положительной динамики заболеваний (Вазир Я., Белоусова Р.В., Устинова Г.И. Испытания бивалентной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота на кроликах с использованием иммуномодуляторов // Ветеринарная патология. — 2007. — №3(22). — С.199-202; Матвеева И.Н. Промышленные технологии изготовления компонентов моно- и комплексных диагностикумов инфекционных заболеваний животных // Автореф. дис. … док. биол. наук. — Щелково. — 2008. — 53 с.).

Известна вакцина против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота сухая, культуральная ассоциированная, содержащая лиофилизированный вакцинный вирус ПГ-3 (штамм «ПТК-45/86») и вакцинный вирус инфекционного ринотрахеита (штамм «ТКА-ВИЭВ-В2»), выращенные в культуре клеток почки теленка и защитную среду высушивания. Вакцину вводят подкожно телятам в возрасте 1-6 месяцев двукратно, 7 месяцев и старше — однократно.

Известна вакцина, ассоциированная против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и хламидиоза крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная. В состав вакцины входят инактивированные антигены ПГ-3 (штамм «ПТК-45/86»), инфекционного ринотрахеита (штамм «ТКА-ВИЭВ-В2») и возбудителя хламидийного аборта коров (штамм «250»), эмульгированные в масляном адъюванте. Телят иммунизируют с 10-20-дневного возраста двукратно, в дозе 1 см 3 , вакцину вводят внутримышечно; телятам старше 6 месяцев, коровам и быкам-производителям в дозе 2 см 3 .

Известна вакцина инактивированная комбинированная против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза телят (Комбовак — К), представляющая собой комплексный препарат для профилактики 3-х вирусных и бактериальных болезней крупного рогатого скота, характеризующихся желудочно-кишечным синдромом. Вакцина изготовлена из инактивированных штаммов трех вирусов: рота-, корона- и вирусной диареи, протективных антигенов эшерихий: соматических 09, 078, 0115; капсульных полисахаридных К80, К30; адгезивных антигенов К99, F-41; термостабильных и термолабильных инактивированных энтеротоксинов.

Известна вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и пастереллеза телят (Комбовак-Р). Вакцина изготовлена из инактивированных штаммов вирусов инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи и двух видов пастерелл: Pasteurella multocida (серовары A, В и D) Pasteurella haemolitica.

Известна вакцина комбинированная против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота- и коронавирусной болезней телят (Комбовак), представляющая собой композицию из 6 штаммов вирусов, инактивированных формалином и сорбированных на 6%-ном геле гидроокиси алюминия (ГОА) и сапонина, предназначенная для иммунизации телят, нетелей и коров, в хозяйствах, неблагополучных по желудочно-кишечным и респираторным болезням.

Известна вакцина «Тривак» (ВИЭВ) для профилактики инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота (Юров К.П., Вечеркин А.С., Шуляк А.Ф., Жидков С.А. / Заявка на патент 96123539/13 от 11.12.1996). Вакцина содержит антиген из аттенуированного вируса инфекционного ринотрахеита (штамм «ТКА-ВИЭВ-В2»), антиген из аттенуированного вируса ВД-БС (штамм «ВК-1), аттенуированного вируса парагриппа-3 (штамм «ПТК-45/86») и защитную среду на основе желатина и сахарозы. Вакцину вводят внутрикожно, двукратно, телятам в дозе 0,2 см 3 , взрослым животным по 0,4 см 3 .

Общим недостатком вышеперечисленных известных вакцин является отсутствие в их составе антигена аденовирусов КРС 1-ой и 11-ой подгрупп, что значительно снижает их эффективность.

Из приведенной информации следует, что в настоящее время отечественных аналогов вакцин, предназначенных для специфической профилактики вирусных респираторных инфекций телят и вызываемых ими патологий репродуктивных органов маточного поголовья, изготовленных на основе антигенов аденовирусов крупного рогатого скота I и II-подгрупп, герпесвируса типа I, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, не существует.

Литературные данные свидетельствуют о том, что во многих странах производятся моно-, би- и поливалентные вакцины против аденовирусной инфекции крупного рогатого скота, отличающихся как по набору аденовирусных компонентов, сочетанию их с другими вирусами, а также по методам их изготовления, так их применения (Gole J. // J. Amer. Vet. Med. Assoc. — 1973. — №7. — Р.836-839; Phillipp J.I.H., Sands J.H. The Isolation of Bovine Adenovirus Serotypes 4 and 7 in Britain // Res. Vet. ScL — 1972. — 13. — P.386-387; Tribe G.W., Kerry J.B. Combined bovine parainfluenza and adenovirus vaccine // Vet. Rec. — 1969. — V.84. — P.299-303). В работах ряда авторов была показана перспективность и целесообразность создания ассоциированных вакцин с обязательным включением в их состав двух подгрупп аденовирусов: как 1, 3-го, так и 4 и 5-го серотипов. Причем была установлена более высокая иммуногенность ее с адъювантом из эмульсии твин-арлацель-байол, чем с адъювантом из 10-20% гидроокиси алюминия (Bürki F., 1973; Schipper E., Nicolet J., König H., Steck F. Virus bedingte Respirations-Krankheiten in Kälber und Ridermastbetreiben // Schweiz. Arch. Tierheilkunde. — 1972. — H.114. — S.334-361). Активную иммунизацию телят осуществляли по различным программам в зависимости от эпизоотической ситуации. Причем вакцинируют как молочное стадо, так и молодняк различного возраста.

1. В Венгрии впервые применили живую аденовирусную вакцину, приготовленную из штамма ТНТ/62 4-го типа, прошедшего 72 пассажа в культуре клеток тестикул бычка (Bartha A. Immunization experiments on calves with type 4 bovine adenovirus // Acta vet. Acad. Sci. Hung. — 1967. — V.-17. — P.209-216).

2. В Болгарии была сконструирована инактивированная вакцина с адъювантом на основе антигенов вируса инфекционного ринотрахеита, вируса ПГ-3, аденовируса типа 1 (штамм «Bovine-10») и аденовируса типа 3 (штамм «WBR-1»). Было изготовлено 16 серий вакцины и испытание их проводилось на 170 телятах в возрасте 45-180 дней. Животные вакцинировались подкожно, двукратно с 23-дневным интервалом в дозе 7 мл на теленка, а также 54 стельные коровы. У телят специфические антитела впервые были выявлены на 14-й день после вакцинации, а максимальные титры антител достигали через 28 дней после ревакцинации (Haralambiev H., Draganov, M., Zwetkov P. Hyperimmunserum Against Myxovirus Parainfluenza-3 and Bovine Adenovirus in Prophylaxis of Respiratory Disease in Calves // Arch. Exptl. Vet. Med. — 1972. — V.26. — P.273-276).

3. В Великобритании для специфической профилактики респираторных вирусных инфекций использована вакцина «Pneumovac Plus (C-Vet)». В состав вакцины входят антигены парагриппа-3 (штамм SF-4), аденовируса 3 серотипа (штамм «WBR-1»), реовируса 1 типа (штамм «Lang strain»), вируса вирусной диареи — болезни слизистых оболочек (штамм «Nadi»), вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и гель гидроокиси алюминия. Препарат вводится внутримышечно молодняку крупного рогатого скота, начиная с 14-дневного возраста, повторно вакцинируют в 5- и 10-недельном возрасте (Morzaria S.P., Richards M.S., Harkness J.W., Maund B.A. A field trial with a multicomponent inactivated respiratory viral vaccine // The Veterinary Record. — 1979. — V.11. — №3. — P.410-414).

Известна «Вакцина против энзоотической бронхопневмонии для крупного рогатого скота инактивированная», содержащая инактивированная антигены вируса парагриппа-3 (штамм «SF-4»), аденовируса крупного рогатого скота 1-го (штамм «Bovine 10»), 3-го (штамм «WBR-1») серотипов первой подгруппы и 5-го (штамм «Munich 293/3») серотипа второй подгруппы, реовируса 1-го (штамм «Lang») и 3-го (штамм «Dearing») серотипов, репродуцированные в соответствующих чувствительных биологических системах и подвергнутые инактивации формалином и ГОА-адъювант в эффективном соотношении (Animal Health Products / Vaccine against enzootic bronchopneumonia, inactivated, for cattle («Bovigrip») Aqueous suspension for subcutaneous injection. / Hoechst Veterinar GmbH. — 1992. — P.37-39)

Следовательно, вакцина содержит в своем составе антигены аденовирусов 1-ой и 2-ой подгрупп, реовирусов I и III серогрупп, а также вируса парагриппа-3. Вакцину вводят подкожно в дозе 5 см 3 , телят иммунизируют двукратно с интервалом от 4-недельного до 6-недельного возраста их жизни.

Известна «Вакцина против энзоотической бронхопневмонии и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, инактивированная для крупного рогатого скота», содержащая инактивированные антигены парагриппа-3 (штамм «SF-4»), аденовируса КРС 1-го (штамм « Bovine 10») и 3-го (штамм «WBR-1») серотипов, вируса инфекционного ринотрахеита (штамм «Calw»), реовируса 1-го (штамм «Lang») и 3-го (штамм «Dearing») серотипов, репродуцированных в чувствительных биологических системах и подвергнутые инактивации формалином и ГОА-адъювант в эффективном соотношении. Вакцину под названием «Bovigrip plus» производит крупнейшая в мире немецкая компания «Hoecht Veterinar GmbH», успешно используется во многих странах Западной Европы (Animal Health Products / Vaccine against enzootic bronchopneumonia and infectious bovine rhinotracheitis (IBR), inactivated, for cattle. Aqueous suspension for subcutaneous injection. / Hoechst Veterinar GmbH, 1992. — P.41-43).

1. Наиболее близкой к предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является «Инактивированная концентрированная поливалентная вакцина против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота» (Белоусова Р.В., Третьякова И.В., Лобова Т.П., Тиганова Н.В., Киш Л.К., Кузнецов Д.П. / Заявка на изобретение №2010152945/10 от 24.12.2010), включающая раздельное культивирование вирусов инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, сбор культуральной жидкости и получение антигенов, отличающаяся тем, что дополнительно вводят штамм «Bovine-10» аденовируса 1-ой подгруппы, который культивируют в культуре клеток «ПТ-80», получают вирус с инфекционным титром 6-7 lg ТЦД50 /мл, затем полученные вирусы инактивируют формалином до 0,2-0,3% конечной концентрации при температуре 37-38°С в течение 72 ч при рН 7,2-7,4 и концентрируют в 5 раз ПЭГ-6000 в конечной концентрации 9-11% в растворе 0,5-0,6 М хлорида натрия, далее полученные антигены смешивают в равных объемах 1:1:1, добавляют официнальный адъювант — гидроокись алюминия до 2-3% конечной концентрации и получают вакцину.

Анализ приведенной информации показывает, что проблема специфической профилактики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота до настоящего времени не решена. Создание ассоциированных вакцин против аденовирусной инфекции КРС с учетом превалирующих этиологических вирусных агентов, выявляемых проведением сероиммунологического мониторинга, могло быть перспективным и экономически целесообразным.

Прототипом — исходным образцом при создании новой вакцины, предлагаемого изобретения являлась «Инактивированная бивалентная вакцина против вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота и способ профилактики вирусной диареи и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота» (Белоусова Р.В., Лобова Т.П., Третьякова И.В., Вазир Я. / Заявка на изобретение №2008103716/13 от 06.02.2008). Из описания изобретения к патенту следует, что вакцина включает в себя антигены аденовируса первого серотипа (штамм «Bovine-10»), штамма «Орегон» вируса вирусной диареи, инактивированных формалином, концентрированных в 5 раз полиэтиленглюколем-6000 (ПЭГ-6000) и депонированных на гидроокиси алюминия в эффективном соотношении. Предложенную вакцину вводят животным внутримышечно с интервалом 13-16 дней в дозе 1 см 3 .

Вакцина-прототип имеет существенные недостатки:

— она не обеспечивает защиту животных от герпесвирусной инфекции типа I и парагриппа-3;

— она не обеспечивает защиту животных от аденовирусной инфекции, вызываемой аденовирусами второй подгруппы, которые в антигенном отношении отличаются между собой и могут вызывать различные патологические процессы в организме животных, несмотря на применение вакцин содержащих антигены аденовирусов иных подгрупп;

— пятикратная концентрация антигенных вирусных компонентов вакцины-прототипа может быть не достаточной для создания напряженного иммунитета у вакцинированных животных;

— гидроокись алюминия — это относительно слабый адъювант, не способный обеспечить длительное освобождение антигена из места введения вакцины, использованный нами масляный адъювант дает эмульсию типа «вода-масло», которая освобождает антигены в течение более длительного времени, чем гидроокись алюминия и аналогичные адсорбенты, это объясняет более мощную иммунную стимуляцию после первой иммунизации животных масляными вакцинами.

В связи с этим проблема создания вакцины ассоциированной, инактивированной, концентрированной и эмульсионной против аденовирусной инфекции, включая антигены I и II подгрупп, герпесвирусной инфекции типа I, парагриппа-3 и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, обладающей высокой антигенной и иммуногенной активностью и безвредностью, продолжает оставаться актуальной и является основным направлением исследований по ее совершенствованию.

Необходимость разработки и производства этой ассоциированной вакцины обусловлена многообразием форм клинического проявления аденовирусной инфекции у телят различных возрастных групп, широкой распространенностью ее в животноводческих комплексах РФ, течением болезни преимущественно по типу смешанных инфекций, формируемых чаще всего с участием герпесвируса типа I, вирусов парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек.

Результаты исследований, проведенные нами, показали, что установлена серопозитивность 65,0% исследованных проб к вирусу ПГ-3, к аденовирусу 48,3%, к герпесвирусу типа I 41,0%, к ВД-БС 39,4%. Полученные результаты указывают на факт циркуляции этих возбудителей среди различных возрастных групп крупного рогатого скота (табл.1).

Известно положение о том, что в естественных условиях одновременное или последовательное воздействие на организм животных нескольких возбудителей, взаимообуславливая действие друг друга, усугубляет и ухудшает течение инфекционного процесса. Это подтверждено результатами исследований как зарубежных, так и отечественных ученых.

Задачей настоящего изобретения является получение высокоиммуногенной ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против аденовирусной, герпесвирусной типа I, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота на основе производственных штаммов, обладающих высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации, пригодных для изготовления ассоциированного эмульсионного препарата, создающего эффективную защиту плода, новорожденных телят, молодняка периода доращивания и откорма, а также стельных коров и телок от указанных выше респираторно-кишечных вирусных инфекций и вызываемых ими патологий репродуктивных органов маточного поголовья, широко распространенных и постоянно циркулирующих в скотоводческих предприятиях Российской Федерации.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала эффективных, безвредных и ареактогенных ассоциированных вакцин против вирусных инфекций крупного рогатого скота.

Указанный технический результат достигнут созданием вакцины, обладающей высокой иммуногенной активностью, существенно отличающейся по комплексу вирусных антигенных компонентов от имеющихся средств профилактики, производимыми в настоящее время в РФ, и широким спектром специфической защиты плода, новорожденных телят, молодняка периода доращивания и откорма, стельных коров и телок, от инфицирования эпизоотическими (полевыми) штаммами аденовирусов I и II-подгрупп, герпесвируса типа I, парагриппа-3 и вируса ВД-БС, циркулирующих на территории Российской Федерации.

Предлагаемая вакцина содержит активное биологическое вещество в виде авирулентных очищенных и концентрированных антигенов штаммов «Adeno III WBR-1» 3-го серотипа первой подгруппы и «Adeno IV Wey bridge СТ2» 4-го серотипа второй подгруппы, штамма «ТКА-ВИЭВ-В2» герпесвируса типа I, штамма «SF-4» вируса парагриппа-3, штамма «ВК-1» вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, полученных в культурах клеток млекопитающих и целевых добавок в виде масляного адъюванта в эффективном соотношении. Первые два штамма аденовирусов получены из Центральной ветеринарной лаборатории МСХ Великобритании, изучены их иммунобиологические свойства. Штаммы аденовирусов «Adeno III WBR-1», «Adeno IV Weybridge CT2» и вируса парагриппа-3 «SF-4» депонированы в лаборатории по хранению и изучению штаммов особо опасных болезней животных (музей штаммов), используемых в ветеринарии и животноводстве Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности животных (ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»), Штамм «ТКА-ВИЭВ-В2» герпесвируса типа I и «ВК-1»вируса вирусной диареи — болезни слизистых оболочек КРС депонированы в коллекции ФГБУ «ВГНКИ».

Сущность изобретения заключается в следующем: «Ассоциированная вакцина против аденовирусной, герпесвирусной инфекций, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная» содержит концентрированные антигены аденовирусов КРС I и II-подгрупп, герпесвируса типа I, вируса ВД-БС крупного рогатого скота, эмульгированных в масляном адъюванте, при следующем соотношении компонентов, об.% 1:1:1:1:1 (инактивированных формалином до конечной концентрации 0,2-0,3%).

Авирулентная, очищенная и концентрированная культуральная суспензия аденовируса крупного рогатого скота I подгруппы штамм «Adeno III WBR1-ДЕП»), полученная в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы (линия MDBK) с инфекционным титром не менее 6,25 lg ТЦД50/мл 10,0-11,0
Авирулентная, очищенная и концентрированная культуральная суспензия аденовируса крупного рогатого скота II подгруппы штамм «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП», полученная в перевиваемой культуре клеток почки теленка Taurus-1 (T-1) с инфекционным титром не менее 6,5 lg ТЦД50/мл 10,0-11,0
Авирулентная, очищенная и концентрированная культуральная суспензия герпесвируса типа I крупного рогатого скота штамм «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП», полученная в перевиваемой культуре клеток «MDBK» с инфекционным титром не менее 7,5 lg ТЦД50/мл 10,0-11,0
Авирулентная, очищенная и концентрированная культуральная суспензия вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота, полученная в перевиваемой культуре клеток легких эмбриона коровы (ЛЭК) штамм «SF-4-ДЕП» с инфекционным титром не менее 6,5 lg ТЦД50/мл и активностью в РГА не менее 6 lg2 (1:64) 10,0-11,0
Авирулентная, очищенная и концентрированная культуральная суспензия вируса ВД-БС крупного рогатого скота штамм «ВК-1-ДЕП», полученная в перевиваемой культуре клеток «MDBK» с инфекционным титром не менее 6,5 lg ТЦД50/мл 10,0-11,0
Целевая добавка — адъювант до 100,0

Штаммы вирусов, используемых в качестве производственных, характеризуются следующими признаками и свойствами:

— штамм «Adeno III WBRl-ДЕП» аденовируса крупного рогатого скота I подгруппы и штамм «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» аденовируса крупного рогатого скота II подгруппы являются представителями рода Mastadenovirus семейства Adenoviridae. Вирусные частицы правильной многранной (икосаэдры) формы. Геном вирусов представлен двухспиральной, нефрагментированной линейной молекулой ДНК. Вирионы имеют диаметр 70-80 нм, вирусы устойчивы к эфиру, хлороформу, сапонину, дезоксихолату натрия, трипсину. Обработка хлороформом повышает инфекционный титр вирусов на 0,5 lg. Аденовирусы устойчивы к изменению рН среды от 3,0 до 9,0 в течение 3 ч при комнатной температуре. При 4° хранятся более 6 месяцев, при комнатной температуре 1-4 месяца, длительно сохраняют инфекционную активность при -30°С. Вирусы устойчивы к повторному замораживанию и оттаиванию, сохраняются при рН 6,0-9,0 и хорошо переносят лиофильную сушку. Штаммы не обладают гемагглютинирующими свойствами.

Штамм аденовируса «Adeno III WBR-1-ДЕП» в культуре клеток линии МДВК и штамм «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» в культуре клеток почки теленка Taurus-1 (T-1) вызывают ЦПД через 48-72 часов после заражения. Видимые цитопатические изменения, индуцируемые вирусом, характеризуются укрупнением и округлением клеток. В последующем клетки постепенно группируются в конгломераты в виде комков, гроздьев, образуя пустоты в монослое, напоминающие соты.

— Штамм «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» герпесвируса типа I крупного рогатого скота герпесвируса типа I рода Herpesvirus семейства Herpesviridae представляет собой однородную популяцию ДНК-содержащего вируса, полученный путем воздействия ультрафиолетовыми лучами на исходный вирулентный вирус ИРТ в дозе, близкой к пороговой. Капсид гексогональной формы, диаметр 100-110 нм, состоит из 162 капсомеров. Вакцинный штамм «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» обладает высокими иммуногенными свойствами и определен нами в качестве производственного для изготовления ассоциированной вакцины.

Герпесвирус типа I репродуцируется в монослое клеток почки эмбриона коровы и его цитопатогенное действие наступает через 48-96 часов. Вирус, выращенный в монослое перевиваемых линий МДВК, обладает стабильной активностью и достигает 6,75-7,25 lg ТЦД50/см 3 . Репродукция вируса сопровождается подавлением митотической активности клеток и образованием внутриядерных включений. Вирус легко концентрируется и очищается центрифугированием в градиенте коллоидной окиси кремния — полиэтиленгликоля. Осадить его можно метанолом, ацетоном, сернокислым магнием и сернокислым аммонием. Ацетон, эфир, хлороформ и этиловый спирт инактивируют вирус немедленно. При температуре -60-70°С вирус выживает 7-9 месяцев, температура 56° инактивирует его через 20 мин, 37° — через 4-10 суток, 22° — через 50 суток. При 4° активность вируса снижается через 30-40 суток лишь на 1 lg. Лиофилизация почти не снижает его активность.

— штамм «SF-4-ДЕП» вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота является представителем рода Paramyxovirus семейства Paramyxoviridae. Вирионы округло-овальной формы, состоящие из оболочки и внутреннего компонента. Диаметр вирионов 150-250 нм, геном вируса представлен несегментированной однонитевой линейной РНК. При 4° без консерванта через 3-4 месяца полностью утрачивает инфекционную активность, при -60° вирус сохраняется инфекционным в течение нескольких месяцев. При многократном замораживании и оттаивании вирусной суспензии инфекционная активность быстро утрачивается. Штамм «SF-4-ДЕП» не агглютинирует эритроциты кур, лошади, хорошо агглютинирует эритроциты морской свинки и в более низком титре эритроциты кролика, свиньи, коровы, обезьяны, мыши, человека (0 группы). Штамм чувствителен к эфиру и дезоксихилату, к кислому рН (3,0).

Штамм «SF-4-ДЕП» вируса ПГ-3 в культуре клеток ЛЭК вызывает ЦПД через 72 ч после заражения. Видимые цитопатические изменения, индуцируемые вирусом, характеризовались образованием гранулированных и вакуолизированных округлых клеток или многоядерных симпластов, возникших в результате слияния нескольких клеток. Клетки, инфицированные вирусом ПГ-3, вызывают диффузную адсорбцию эритроцитов морской свинки.

— штамм «ВК-1-ДЕП» вируса ВД-БС крупного рогатого скота является представителем рода Pestivirus семейства Flaviviridae, геном вируса представлен однонитевой РНК. Величина вирионов 40-100 нм, плавучая плотность в градиенте плотности сахарозы 1,5-1,19 г/см 3 .

Чувствителен к эфиру, хлороформу и трипсину. Прогревание при 50°С в течение 10 мин приводит к инактивации аттенуированного вируса. Замораживание при -20°С и оттаивание снижает титр инфекционной активности в культуре клеток. В отличие от исходного эпизоотического штамма вируса аттенуированный штамм приобрел большую устойчивость к воздействию рН 3,0.

Не агглютинирует эритроциты морской свинки, барана, крупного рогатого скота и птиц. Размножается с развитием цитопатического действия в культурах клеток ПЭК, почки теленка (ПТ), почки эмбриона свиньи (ПЭС). По мере развития ЦПД клетки постепенно отторгаются от поверхности стекла, образуя островки. Вирус достигает инфекционного титра 10 6,0-6,5 ТЦД50/мл.

В организме морских свинок и крупного рогатого скота вызывает образование вируснейтрализующих антител. У вакцинированного крупного рогатого скота стимулирует образование местного и гуморального иммунитета. Вызывает слабую реакцию у некоторых вакцинированных телят при подкожном, внутримышечном и интраназальном введениях пятикратной иммунизирующей дозы: 1-2-дневное повышение температурной реакции тела на 0,3-0,5°С, незначительное снижение количества лейкоцитов, без других отклонений от клинической и физиологической нормы (Жидков С.А., Крюков Н.Н. Штамм вируса Bovine viral Diarrhea-mucosal disease virus для изготовления вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота // Авт. свидетельство SU 1322673 от 09.09.85). В лиофилизированном состоянии при 4-10°С хранится в течение года, практически не снижая инфекционной активности.

Штаммы вирусов, принятые заявителем в качестве производственных, обладают высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации, отличаются высокой продуктивностью в чувствительных биологических системах культивирования. Они свободны от контаминации бактериями, грибковой микрофлорой, микоплазмами и сопутствующими вирусами. Экспериментально в лабораторных условиях и производственных опытах подтверждена возможность их использования для изготовления ассоциированной вакцины, создающей напряженный и продолжительный иммунитет у вакцинированных животных.

2. Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам предлагаемого изобретения.

Определение из перечня выявленных аналогов прототипа (ассоциированные вакцины «Bovigrip», «Bovigrip plus», в состав которых включены инактивированные антигены парагриппа-3 (штамм «SF-4»), аденовируса КРС 1-го (штамм «Bovine 10») и 3-го (штамм «WBR-1») серотипов, вируса инфекционного ринотрахеита (штамм «Calw»), производства «Hoecht Veterinar GmbH») как наиболее близкого по совокупности признаков по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вакцины, изложенных в независимом пункте формулы изобретения.

Читайте также:  Сколько длится аденовирусная инфекция у ребенка

Следовательно, заявляемое решение соответствует условию патентоспособности «Новизна».

Для проверки соответствия предлагаемого решения условию патентоспособности «Изобретательский уровень» проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы изобретения.

Результаты поиска показали, что предлагаемое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания, а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований для достижения технического результата.

Следовательно, предлагаемая ассоциированная вакцина соответствует условию патентоспособности «Изобретательский уровень».

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1. Производственный штамм «Adeno III WBR1-ДЕП» аденовируса крупного рогатого скота I подгруппы для изготовления предлагаемой вакцины репродуцируют в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы (линия MDBK), выращенной в роллерных трехлитровых бутылях на комбинированной ростовой среде, состоящей из среды 199 — 10%, ГЛА — 40%, Игла МЕМ — 40%, сыворотки крупного рогатого скота — 10% и антибиотиков. Культуру выращивают в течение 3-4 суток при посевной концентрации 140-150 тыс. клеток в 1 см 3 среды.

Для получения 10 л вирусной суспензии берут 28-35 бутылей с культурой клеток емкостью 3,0 дм 3 каждый.

Ростовую среду сливают, вносят поддерживающую среду (ГЛА — 60%, Игла МЕМ — 40% и антибиотики: стрептомицин — 100 мкг/см 3 , пенициллин — 100 ЕД./см 3 ) в количестве 300-350 см 3 , в которую предварительно вносят аденовирус крупного рогатого скота штамм «Adeno III WBR1-ДЕП» из расчета 0,2-1 ТЦД50/клетку. Бутыли инкубируют в роллерной установке при 37-38°С в течение 48-72 часов. Сбор культуральной жидкости производят в период выраженного цитопатического эффекта — максимального накопления вируса. Инфекционный титр вируса должен быть не ниже 6,25 lg ТЦД50/мл.

Освобождение вируса из клеток осуществляют путем трехкратного замораживания и оттаивания. Полученный вируссодержащий материал очищают от клеточного детрита путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 20 минут, соблюдая стерильные условия.

Очищенную вируссодержащую суспензию подвергают инактивации формалином (содержанием активного формальдегида 37-38%) в конечной концентрации 0,2-0,3% при температуре 37°С в течение 72 ч при периодическом перемешивании.

Концентрирование антигена аденовируса I подгруппы проводят с помощью ПЭГ-6000 до конечной концентрации 7-8% (вес. объем) и хлорида натрия до конечной концентрации 3% в течение 24 ч при температуре 4°С. Вирусный белок осаждают центрифугированием при 5000 об/мин в течение 60 минут и ресуспендирование осадка проводят 0,85% раствором натрия хлорида. Полученный концентрированный антиген стандартизируют путем количественного определения специфического белка на спектрофотометре. Концентрация белка должна быть в пределах 1,8-2 мг/см 3 . Концентрированный антигенный материал проверяют на стерильность, авирулентность по общепринятой методике.

Пример 2. Производственный штамм «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» аденовируса крупного рогатого скота II подгруппы для изготовления предлагаемой вакцины репродуцируют в культуре клеток перевиваемой культуре клеток почки теленка Taurus-1 (T-1) выращенной в роллерных трехлитровых бутылях на ростовой среде Игла МЕМ-90%, сыворотки крупного рогатого скота — 10% и антибиотиков (стрептомицин — 100 мкг/см 3 , пенициллин — 100 ЕД./см 3 ). Культуру выращивают в течение 3-4 суток при посевной концентрации 140-150 тыс. клеток в 1 см 3 среды.

Для получения 10 л вирусной суспензии берут 35-37 бутылей с культурой клеток емкостью 3,0 дм 3 каждый.

Ростовую среду сливают, вносят поддерживающую, состоящую из среды Игла MEM и антибиотиков в количестве 300 см 3 , в которую предварительно вносят аденовирус крупного рогатого скота штамм «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» из расчета 0,2-1 ТЦД50/клетку. Бутыли с зараженным монослоем инкубируют в роллерной установке при 37-38°С в течение 48-72 часов. Инфекционный титр вируса в культуральной суспензии должен быть не ниже 6,5 lg ТЦД50/мл.

Полученный вируссодержащий материал трехкратно замораживают при -20°С и оттаивают при 37°С, затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут с целью освобождения от клеточного детрита.

Вируссодержащую суспензию инактивируют формалином (содержанием активного формальдегида 37-38%) в конечной концентрации 0,2-0,3% при температуре 37°С в течение 72 ч при периодическом перемешивании.

Концентрирование антигена аденовируса II подгруппы проводят с помощью ПЭГ-6000 до конечной концентрации 7-8% (вес. объем) и хлорида натрия до конечной концентрации 3% в течение 24 ч при температуре 4°С. Осаждают вирусный белок путем центрифугирования при 5000 об/мин в течение 60 минут, полученный осадок ресуспендируют 0,85% раствором натрия хлорида. Стандартизацию антигена проводят на спектрофотометре. Концентрация специфического белка должна быть в пределах 1,8-2 мг/см 3 . Концентрированный антигенный материал проверяют на стерильность и авирулентность.

Пример 3. Производственный штамм «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» герпесвируса типа I крупного рогатого скота для изготовления предлагаемой вакцины репродуцируют в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы (линия MDBK), выращенной на комбинированной ростовой среде, состоящей из среды 199 — 10%, ГЛА — 40%, Игла МЕМ — 40%, сыворотки крупного рогатого скота — 10% и антибиотиков. При посевной концентрации 140-150 тыс. клеток в 1 см 3 среды формирование сплошного монослоя в роллерных трехлитровых бутылях происходит в течение 3-4 суток при температуре 37±0,5°С в условиях термальной комнаты.

Для получения 10 л вирусной суспензии берут 28-35 бутылей (емкость 3,0 дм 3 ) с монослоем культуры клеток линии MDBK.

После слития ростовой среды вносят поддерживающую среду (ГЛА-60%, Игла МЕМ-40% и антибиотики: стрептомицин — 100 мкг/см 3 , пенициллин — 100 ЕД./см 3 ) в количестве 300-350 см 3 , в которую предварительно вносят герпесвируса типа I штамм «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» из расчета 0,1-1 ТЦД50/клетку. Бутыли инкубируют в роллерной установке при 37-38°С в течение 48-72 часов. Сбор культуральной жидкости производят в период выраженного цитопатического эффекта — максимального накопления вируса. Инфекционный титр вируса должен быть не ниже 7,5 lg ТЦД50/мл.

Вируссодержащий материал трехкратно замораживают при -20°С и оттаивают при 37°С, затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут с целью освобождения от клеточного детрита.

Очищенную вируссодержащую суспензию подвергают инактивации формалином (содержанием активного формальдегида 37-38%) в конечной концентрации 0,2-0,3% при температуре 37°С в течение 72 ч при периодическом перемешивании.

Концентрирование антигена герпесвируса типа I проводиться ПЭГ-6000, который добавляется в очищенную вируссодержащую суспензию до конечной концентрации 7-8% (вес. объем), добавляют хлорида натрия до конечной концентрации 3%. Концентрирование проводится в течение 24 ч при температуре 4°С. Вирусный белок осаждают центрифугированием при 5000 об/мин в течение 60 минут. Полученный концентрированный антиген стандартизируют путем количественного определения специфического белка на спектрофотометре. Концентрация вирусного белка должна быть в пределах 1,8-2 мг/см 3 . Концентрированный антигенный материал проверяют на стерильность, авирулентность.

Пример 4. Производственный штамм «SF-4-ДЕП» вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота для изготовления предлагаемой вакцины репродуцируют в перевиваемой культуре клеток легких эмбриона коровы (ЛЭК).

Культуру клеток «ЛЭК» при посевной концентрации 140-150 тыс. клеток в 1 см 3 выращивают в матрасах емкостью 1,5 дм 3 в течение 3-4 суток на комбинированной среде, состоящей из среды ГЛА — 60%, Игла MEM — 30% и 10% сыворотки крупного рогатого скота.

Для получения 10 л вирусной суспензии берут 65-70 матрасов с культурой клеток емкостью 1,5 дм 3 каждый. После слива ростовой среды в матрасы вносят суспензию парагриппа-3 из расчета 0,2-1 ТЦД50/клетку. Адсорбцию вируса проводят при 37°С в течение 1 часа. После этого в матрасы вносят 150 см 3 поддерживающей среды, состоящей из Игла MEM 40% и среды ГЛА 60%, антибиотиков. Культивирование ведут при 37°С в течение 72-96 часов. В качестве контроля оставляют незараженными 3 матраса, в которых не должно быть каких-либо деструктивных изменений в период культивирования. Зараженные матрасы с 80-90% поражением клеточного монослоя отбирают, трехкратно замораживают при -20°С и оттаивают.

Полученный вируссодержащий материал очищают от клеточного детрита путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 20 минут, соблюдая стерильные условия. Гемагглютинирующую активность штамма «SF-4-ДЕП» вируса ПГ-3 крупного рогатого скота определяют в РГА с 1% суспензией эритроцитов морской свинки при 20-22°С. Гемагглютинирующая активность вируса ПГ-3 крупного рогатого скота должна быть не менее 6 log2 (1:64).

Очищенную вируссодержащую суспензию подвергают инактивации формалином (содержанием активного формальдегида 37-38%) в конечной концентрации 0,2-0,3% при температуре 37°С в течение 72 ч при периодическом перемешивании.

Пример 5. Производственный штамм «ВК-1-ДЕП» ВД-БС крупного рогатого скота для изготовления предлагаемой вакцины репродуцируют в культуре клеток почек эмбриона коровы (линия MDBK), выращенной на комбинированной ростовой среде, состоящей из среды 199-10%, ГЛА-40%, Игла МЕМ-40%, сыворотки крупного рогатого скота — 10% и антибиотиков. Посевная концентрация 140-150 тыс. клеток в 1 см 3 среды, монослой в роллерных трехлитровых бутылях формируется в течение 3-4 суток при температуре 37±0,5°С в условиях термальной комнаты.

Для получения 10 л вирусной суспензии берут 28-35 бутылей (емкость 3,0 дм 3 ) с монослоем культуры клеток линии MDBK.

Перед заражением ростовую среду сливают, вносят поддерживающую среду (ГЛА — 60%, Игла МЕМ — 40% и антибиотики: стрептомицин — 100 мкг/см 3 , пенициллин — 100 ЕД./см 3 ) в количестве 300-350 см 3 , в которую предварительно вносят вирус ВД-БС штамм «ВК-1-ДЕП» из расчета 0,2-1 ТЦД50/клетку. Инкубацию проводят в роллерной установке при 37-38°С в течение 48-72 часов. Сбор культуральной жидкости производят в период выраженного цитопатического эффекта — максимального накопления вируса. Инфекционный титр вируса должен быть не ниже 6,5 lg ТЦД50/мл.

Вируссодержащий материал трехкратно замораживают при -20°С и оттаивают при 37°С, затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут с целью освобождения от клеточного детрита.

Очищенную вируссодержащую суспензию подвергают инактивации формалином (содержанием активного формальдегида 37-38%) в конечной концентрации 0,2-0,3% при температуре 37°С в течение 72 часов.

Концентрирование антигена вируса ВД-БС проводят ПЭГ-6000, который добавляется в очищенную вируссодержащую суспензию до конечной концентрации 7-8% (вес. объем), добавляют хлорида натрия до конечной концентрации 3%. Концентрирование проводиться в течение 24 ч при температуре 4°С. Вирусный белок осаждают центрифугированием при 5000 об/мин в течение 60 минут. Полученный концентрированный антиген стандартизируют путем количественного определения специфического белка на спектрофотометре. Концентрация вирусного белка должна быть в пределах 1,8-2 мг/см 3 . Концентрированный антигенный материал проверяют на стерильность, авирулентность.

Пример 6. Масляный адъювант для изготовления предлагаемой вакцины готовят из синтетического масла ПЭС-3М (кремнеорганическая жидкость ГОСТ 13004-77) и ланолина безводного, взятых в соотношении 84:16 объемных частей. Смесь масла и ланолина смешивают, автоклавируют при 120°С (1,0 атм.) в течение 40 мин. Готовый адъювант охлаждают, проверяют на стерильность по общепринятой методике.

Пример 7. Вакцину ассоциированную против аденовирусной, герпесвирусной инфекций, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированную эмульсионную готовят путем диспергирования смеси концентрированных антигенных материалов из штаммов «Adeno III WBR1-ДЕП» аденовируса крупного рогатого скота I подгруппы, «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» аденовируса крупного рогатого скота II подгруппы, «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» герпесвируса типа I, «SF-4-ДЕП» вируса парагриппа-3, «ВК-1-ДЕП» вируса вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

Для этого концентрированные антигенные материалы, полученные так, как описано в примерах 1, 2, 3, 4 и 5, смешивают между собой в соотношении 1:1:1:1:1, т.е. берется 1 часть антигенного материала аденовируса крупного рогатого скота I подгруппы, 1 часть аденовируса крупного рогатого скота II подгруппы, 1 часть герпесвируса типа I, 1 часть парагриппа-3 и 1 часть вируса ВД-БС.

Антигенный материал концентрированный из штамма «Adeno III WBRl-ДЕП» аденовируса крупного рогатого скота 10,0-11,0
Антигенный материал концентрированный из штамма «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» аденовируса крупного рогатого скота 10,0-11,0
Антигенный материал концентрированный из штамма «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» герпесвируса типа I 10,0-11,0
Антигенный материал концентрированный из штамма «SF-4-ДЕП» парагриппа-3 10,0-11,0
Антигенный материал концентрированный из штамма «ВК-1-ДЕП» вируса ВД-БС 10,0-11,0

Полученную смесь концентрированных антигенов тщательно эмульгируют с масляным адъювантом в соотношении 1:1 (об.%:50:50).

Ассоциированную вакцину разливают в стерильные стеклянные флаконы и контролируют в соответствии с техническими условиями.

По внешнему виду вакцина представляет собой стойкую эмульсию розовато-белого цвета. При длительном хранении в верхней части флакона допускается незначительное (до 10%) расслоение эмульсии, восстанавливающейся при взбалтывании.

Стерильность вакцины определяют в соответствии с ГОСТ 28085-89, путем высева на МПА, МПБ, МППБ и агар Сабуро. Вакцина не должна давать роста бактерий и грибов ни в одной из засеянных пробирок, т.е. должна быть стерильной.

Для определения остаточной вирулентности ассоциированную вакцину разводят в соотношении 1:10 и в объеме 0,1 см 3 мерной пипеткой вносят в 5 флаконов с перевиваемыми культурами клеток Т-1, ЛЭК, МДВК выдерживают в течение 1,5-2 ч при 37°С, а по 5 флаконов с указанной культурой клеток оставляют в качестве контроля. После адсорбции инокулят сливают, во флаконы с культурами клеток Т-1, ЛЭК, МДВК вносят поддерживающую среду с антибиотиками и инкубируют в термостате при 37°С 5-7 дней. Все флаконы с культурами клеток периодически просматривают под микроскопом с целью обнаружения ЦПД аденовируса, герпесвируса типа I, ПГ-3 и вируса диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

Полученные культуральные суспензии используют для последующих двух «слепых» пассажей. На третьем пассаже в перевиваемых культурах клеток Т-1, ЛЭК, МДВК характерное ЦПД аденовируса, герпесвируса, ПГ-3 и ВД-БС не выявляется, что свидетельствует об авирулентности ассоциированной вакцины.

Для проверки безвредности вакцину вводят внутрибрюшинно 10 белым мышам в дозе 0,25 см 3 . Вакцина считается безвредной, если белые мыши в течение 10 суток остаются клинически здоровыми без каких-либо патологических изменений.

Вязкость вакцины определяется на вискозиметре ВПЖ-2, и ее выражают в мм 2 /с. Предлагаемая вакцина, содержащая в качестве целевой добавки масляный адъювант (синтетическое масло ПЭС-3М и ланолин безводный), образующий тип эмульсии «вода-масло», имеет вязкость 38±0,5 мм 2 /с.

Для определения стабильности препарата образцы вакцины замораживают при -40°С в течение 1 часа. По истечении указанного времени пробирки с вакциной помещают на 1 час в термостат при 37°С. В пробирках после замораживания и выдерживания в термостате в верхней части может наблюдаться отслоение 0,5-1% прозрачного масла, а остальная часть представлена эмульсией. В данном случае вакцина считается стабильной.

Для проверки реактогенности препарата вакцину вводят внутримышечно в область бедра 3 кроликам в дозе 2 см 3 . За клиническим состоянием животных ведут наблюдение в течение 14 суток. В процессе наблюдения за клиническим состоянием животных, которым вводилась вакцина существенного отклонения общего и местного характера, не выявлено. У подопытных животных отмечалось незначительное повышение местной температуры в месте инъекции, но при этом общее состояние оставалось удовлетворительным. На разрезе тканей признаков воспаления не выявлено. Следовательно, ассоциированная вакцина относится к типу ареактогенных препаратов.

Антигенную активность контролируют на трех кроликах живой массой 2,5-3,0 кг, которым вакцину вводят внутримышечно, двукратно с интервалом 21 день в дозе по 2 см 3 . Кровь у кроликов берут из ушной вены через 21-30 дней после второй вакцинации. Сыворотку исследуют на наличие специфических антител к антигенам аденовируса, герпесвируса типа I и ВД-БС — в ИФА, парагриппа-3 — в РТГА. Одновременно берут кровь у двух невакцинированных кроликов и используют сыворотку для контроля.

Серию вакцины считают прошедшей контроль на антигенную активность, если титр вирусоспецифических антител через 21-30 дней после II вакцинации составляет к аденовирусу, герпесвирусу типа I, вирусу ВД-БС не менее 1:1600 в ИФА, к ПГ-3 1:160 и более в РТГА (табл.2). Изготовленная вакцина имеет оптимальный состав компонентов, об.%:

Антигенный материал, концентрированный из штамма «Adeno III WBR1-ДЕП» аденовируса КРС, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона коровы (линия MDBK) с биологической активностью не менее 6,25 lg ТЦД50/мл и инактивированного формалином (конечная концентрация 0,2-0,3%) 10,0-11,0
Антигенный материал концентрированный из штамма «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» аденовируса КРС, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток почки теленка Taurus-1 (T-1) с биологической активностью не менее 6,5 lg ТЦД50/мл и инактивированного формалином (конечная концентрация 0,2-0,3%) 10,0-11,0
Антигенный материал концентрированный из штамма «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» герпесвируса типа I, репродуцированного в культуре клеток почек эмбриона коровы (линия MDBK) с биологической активностью не менее 7,5 lg ТЦД50/мл и инактивированного формалином (конечная концентрация 0,2-0,3%) 10,0-11,0
Антигенный материал концентрированный из штамма «SF-4 — ДЕП» парагриппа-3 КРС, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток легких эмбриона коровы (ЛЭК) с биологической активностью не менее 6,5 lg ТЦД50/мл и гемагглютинирующей активностью не менее 6 logs (1:64), инактивированного формалином (конечная концентрация 0,2-0,3%) 10,0-11,0
Антигенный материал концентрированный из штамма «ВК-1-ДЕП» вируса ВД-БС КРС репродуцированного в культуре клеток почек эмбриона коровы (линия MDBK) с биологической активностью не менее 6,5 lg ТЦД50/мл, инактивированного формалином (конечная концентрация 0,2-0,3%) 10,0-11,0
Целевая добавка — адъювант до 100

Содержание антигенных материалов вакцине в указанных выше пределах является их эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата от использования изобретения.

Вакцина предназначена для специфической профилактики респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка.

Вакцину применяют для профилактики аденовирусной, герпесвирусной инфекций, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых крупного рогатого скота в угрожаемых и стационарно неблагополучных хозяйствах.

Вакцину вводят телятам и взрослому поголовью внутримышечно в области средней трети шеи, соблюдая правила асептики и антисептики, по следующей схеме:

— глубокостельных коров и нетелей вакцинируют дважды: первый раз за 40-50 дней до отела, второй раз — за 15-20 дней до отела в дозе по 2 см 3 с целью профилактики респираторных и желудочно-кишечных заболеваний у новорожденных телят, создавая тем самым колостральный иммунитет.

— телят иммунизируют с 25-30-дневного возраста в дозе по 1 см 3 двукратно, с интервалом 21 день, с целью профилактики вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций. Ревакцинацию проводят через 6 месяцев.

— телят старше 6 месяцев и быков-производителей вакцинируют двукратно, с интервалом 21 день, в дозе по 2 см 3 . Через 6 месяцев ревакцинируют.

Вакцина вызывает формирование иммунного ответа у крупного рогатого скота к аденовирусу, герпесвирусу типа I, парагриппу-3 и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек. Иммунитет у привитых животных наступает через 21-30 дней после двукратного применения и сохраняется в течение 6 месяцев. Специфические антитела от вакцинированных коров передаются с молозивом новорожденным телятам. Вакцина безвредна, лечебными свойствами не обладает.

Пример 8. Проведены испытания по определению прививной дозы «Ассоциированной вакцины против аденовирусной, герпесвирусной инфекций, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированной эмульсионной», изготовленной из концентрированных антигенных материалов штаммов «Adeno III WBR1-ДЕП» аденовируса крупного рогатого скота I подгруппы, «Adeno IV Weybridge СТ2-ДЕП» аденовируса КРС II подгруппы, «ТКА-ВИЭВ-В2-ДЕП» герпесвируса типа I, «SF-4-ДЕП» вируса парагриппа-3, «ВК-1-ДЕП» вируса вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, как описано в примере 7.

Определение прививной дозы экспериментальной серии ассоциированной вакцины проводилось на крупном рогатом скоте в производственных условиях ООО «Золотая Нива» Кайбицкого района РТ.

Для этой цели, предварительным исследованием сывороток крови от животных, сформированы три группы животных разных возрастных групп по принципу аналога в количестве 15 голов, серонегативных или имеющих низкий уровень антител в отношении аденовируса, герпесвируса типа I, ПГ-3 и ВД-БС крупного рогатого скота. Каждую дозу препарата вводили 5 животным. Вакцину вводили внутримышечно в среднюю треть шеи двукратно с интервалом в 21 день по схеме: глубокостельным коровам и нетелям — по 1 см 3 , 2 см 3 и 3 см 3 (первый раз — за 40-50 дней, второй раз — за 15-20 дней до отела); телятам 25-30 дневного возраста — 0,5 см, 1 см 3 , 2 см 3 ; молодняку старше 6 месяцев — по 1 см 3 , 2 см 3 и 3 см 3 .

С целью определения динамики нарастания титров специфических антител взятие крови у животных всех групп проводили до вакцинации, через 21 день после первой и второй иммунизации. Пробы сыворотки крови исследовали на наличие антител к ПГ-3 в РТГА, к аденовирусам, герпесвирусу типа I и вирусу ВД-БС в ИФА. Статистически обработанные результаты исследований представлены в таблицах 3, 4, 5.

Двукратное введение ассоциированной вакцины в среднем обеспечивало выработку антител в ИФА в пределах у глубокостельных коров и нетелей к аденовирусу I подгруппы 2400,00±565,69, аденовирусу II подгруппы 2880,00±357,77, к герпесвирусу 2560,00±438,18, к ВД-БС 2240,00±438,18 и к ПГ-3 в РТГА 512,00±87,64; у телят 25-30-дневного возраста к аденовирусу I подгруппы 2080,00±536,66, аденовирусу II подгруппы 2240,00±438,18, к герпесвирусу 1600,00±0,00, к ВД-БС 1440,00±178,89 и к ПГ-3 164,00±53,10; у молодняка старше 6-месячного возраста к аденовирусу I подгруппы 2560,00±438,18, аденовирусу II подгруппы 2560,00±438,18, к герпесвирусу 2560,00±438,18, к ВД-БС 2880,00±357,77 и к ПГ-3 384,00±71,55.

Таким образом, были определены оптимальные двукратные прививные дозы вакцины для крупного рогатого скота различных возрастных групп, которые составили: для глубокостельных коров и нетелей 2 см 3 , телят 25-30-дневного возраста 1 см 3 , молодняка старше 6-месячного возраста 2 см 3 .

Пример 9. Проведены испытания антигенной активности и эффективности «Ассоциированной вакцины против аденовирусной, герпесвирусной инфекций, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированной эмульсионной» на крупном рогатом скоте в производственных условиях.

Согласно данным ветеринарной службы хозяйства желудочно-кишечные и респираторные заболевания молодняка наблюдаются ежегодно и проявляются в основном в осенне-зимний и весенний период. В 2011 году (за период с января по октябрь) получен 281 теленок, из них заболело 75 телят, что составляет 26,6%, пало 20 телят — 7,1% от общего поголовья полученного молодняка.

Вакцинации подвергались телята с 25-30-дневного возраста, глубокостельные коровы и нетели, молодняк до 12 месяцев. Вакцину вводили внутримышечно в среднюю треть шеи: глубокостельным коровам и нетелям за 40-50 дней и 15-20 дней до отела по 2 см 3 ; молодняку до 6 месяцев по 1 см 3 и молодняку старше 6 месяцев по 2 см 3 двукратно с интервалом 21 день. Вакцинировано 800 голов крупного рогатого скота. В поствакцинальный период у привитых животных отклонений от физиологической нормы не наблюдалось.

Изучение динамики нарастания титров специфических антител в сыворотке крови КРС проводили до вакцинации и через 21 день после второй иммунизации (n=20). С целью определения напряженности колострального иммунитета исследовали сыворотки крови молодняка до 14-дневного возраста (n=20). Пробы сыворотки крови исследовали на наличие антител к ПГ-3 в РТГА, к аденовирусу, герпесвирусу типа I и вирусу ВД-БС в ИФА и реакции нейтрализации (РН) (табл.6).

Уровень специфических антител в сыворотке молозива отелившихся вакцинированных коров определяли к ПГ-3 в РТГА, к аденовирусу, герпесвирусу типа I и вирусу ВД-БС в ИФА, контрольной группой служили не вакцинированные животные (n=10). Статистически обработанные результаты исследований представлены в таблице 7.

Двукратное введение ассоциированной вакцины в среднем обеспечивало выработку антител в ИФА (РН) в пределах у глубокостельных коров и нетелей к аденовирусу I подгруппы 2500,00±234,20 (56,00±7,85), аденовирусу II подгруппы 2740,00±195,86 (60,00±7,71), к герпесвирусу 2340,00±234,95 (54,40±8,20), к ВД-БС 2220,00±219,75 (54,40±9,63) и к ПГ-3 в РТГА 552,00±55,19; у телят 25-30-дневного возраста к аденовирусу I подгруппы 2240,00±286,19 (57,26±8,46), аденовирусу II подгруппы 2120,00±266,46 (56,00±9,11), к герпесвирусу 1040,00±124,19 (49,60±7,23), к ВД-БС 1360,00±246,23 (51,20±5,53) и к ПГ-3 158,00±58,36; у молодняка до 14-дневного возраста к аденовирусу I подгруппы 1120,00±92,25 (38,40±3,01), аденовирусу II подгруппы 1100,00±98,18 (39,20±3,47), к герпесвирусу 1080,00±136,76 (36,00±3,55) к ВД-БС 1200,00±94,15 (44,00±3,93) и к ПГ-3 168,00±19,66. В 2012 году от вакцинированных коров и нетелей получено 268 телят, из них заболело 32 теленка, что составляет 11,9%, пало 12 телят — 4,4% от общего поголовья полученного молодняка.

Производственное испытание ассоциированной вакцины против аденовирусной, герпесвирусной инфекций, парагриппа-3 и вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированной эмульсионной показало, что она безвредна, ареактогенна и вызывает формирование напряженного иммунного ответа у животных после двукратной вакцинации. Изучением эффективности ассоциированной вакцины в условиях хозяйства установлено, что она обеспечивает защиту новорожденных телят, молодняка периода доращивания от вирусных респираторных и желудочно-кишечных инфекций, а также стельных коров и телок от патологий репродуктивных органов.

источник