Аденовирусная инфекция птиц диагностика

Семейство Adenoviridae объединяет большую группу вирусов, поражающих жи­вотных, птиц и людей. В состав семейства входит два рода. Род Mastadenovirus вклю­чает аденовирусы млекопитающих: человека — 47 серотипов, обезьян — 27 сероти- пов, КРС — 10, овец — 6, свиней — 4, собак — 2, лошадей — 1, коз — 1. Род Aviadenovirus представлен аденовирусами птиц, в том числе кур — 13 серотипов, ин­деек — 3, уток — 2, фазанов — 1. Антигеннородственные аденовирусы выделены так­же от перепелов, гусей, голубей, куропаток, цесарок, дроздов, лебедей, попугаев и других видов декоративных и диких птиц. Аденовирусы птиц условно дифференци­рованы на 3 группы. В первую группу входят 12 серотипов аденовирусов кур и других птиц, которые имеют общий группоспецифический преципитирующий антиген, напри­мер возбудители «CELO-инфекции», бронхита перепелов, панкреатита цесарок, гепа­тита с включениями-гидроперикардита кур. Ко второй группе относятся аденовирусы, обладающие гемагглютинирующим антигеном и имеющие общий с первой группой преципитирующий антиген, в том числе штаммы «В 8-78» и «127» вируса «Синдрома снижения яйценоскости-76» (ССЯ-76). В третью группу включены аденовирусы с группоспецифическим преципитирующим антигеном, отличающимся от таковых первых двух групп — аденовирусы геморрагического энтерита индеек, болезни «мра­морной селезенки» фазанов. Аденовирусы широко распространены среди домашних и других видов птиц. Любые из имеющихся 13 серотипов аденовирусов в различных сочетаниях могут циркулировать в одном хозяйстве, а также в организме одной внеш­не здоровой птицы. Цыплята, не имеющие каких-либо признаков заболевания, но за­раженные аденовирусом, способны выделять его во внешнюю среду 7 месяцев и более. Имеются случаи изоляции аденовирусов от клинически здоровых 4-5-летних кур. Обычно контакт птиц с аденовирусами завершается развитием субклинической пато­логии, с поражениями органов, выявляемыми только при гистологическом исследова­нии. Но в последнее время аденовирусная инфекция на цыплятах и, реже, курах про­является в виде синдрома «гепатита с тельцами-включениями—гидроперикардита», сопровождающегося высокой смертностью птиц.

Аденовирусы представляют собой изометрические частицы, имеющие форму икосаэдра и величину 70-90 нм, без наружной оболочки, не содержащие липидов и гликопротеидов. Вирионы состоят из сердцевины, сформированной ДНК и бел­ком, и капсида, построенного из 252 капсомеров. На ребрах равносторонних тре­угольных граней, общих для соседних треугольников, лежит по 6 капсомеров. Каж­дый из 240 капсомсров, расположенных па поверхности и ребрах треугольных граней, находится в окружении 6 капсомеров и называется гексоном. Полипептид гексонов имеет группо- и типоспецифические антигенные детерминанты, которые в организме животных и птиц индуцируют синтез антител. Каждый из 12 капсомеров на вершине икосаэдра окружен пятью соседними капсомерами и носит название пентона. В каждом пентоне имеется основание, закрепленное в капсиде, от которого от­ходит нить, состоящая из стержня, заканчивающегося головкой величиной 4 нм. Размеры нити варьируют у аденовирусов различных серотипов от 10 нм до 31 нм.

Нить пеитона участвует в адсорбции вируса на поверхности клетки и в индуцирова­нии антител, обладающих вируснейтрализующей активностью. Некоторые аденови­русы имеют характерные фибриллярные структуры, состоящие из двух нитей с утолщениями, причем длина одной из них равна 42,5 нм, а другой 8,5 нм. Молеку­лярная масса вириона составляет 170-175 Мд, плавучая плотность в градиенте хло­рида цезия 1,32-1,35 г/см 3 , константа седиментации 560 S. В вирионах содержится 86-88% белка и 12-14% ДНК. Молекулярная масса вирионов 170 Мд. Геном сфор­мирован одной двухспиральной молекулой ДНК. Синтез полипептидов вируса про­исходит в цитоплазме, транскрипция и репликация ДНК, а также сборка вириона — в ядре. Аденовирусы устойчивы во внешней среде, к действию эфира, хлороформа и некоторых растворителей липидов, сапонину, дезоксихолату натрия, 0,25% рас­твора трипсина, 2% фенола (карболовой кислоты), 50% раствору этилового спирта. Относительно стабильны при рН 6,0-9,0. При температуре минус 25°С вирус сохра­няется до трех и более лет. При повышенной температуре происходит инактивация аденовирусов, но степень ее выраженности у разных серотипов и даже у различных штаммов одного серотипа может значительно отличаться. В среднем при температуре плюс 60

70 о С на инактивацию требуется от 30 мин. до 1 часа. Аденовирусы устойчи­вы к многократному повторному замораживанию и оттаиванию и не теряют инфек­ционных свойств при сублимационном высушивании. Аденовирусы инактивируются бетта-пропиолактоном, формальдегидом, гидроксиламином, ультрафиолетовыми лучами, абсолютным этиловым спиртом или его йодным раствором, производными этиленимина. Иногда устойчивость аденовирусов к некоторым химическим и физи­ческим инактиваторам, используемым при определенных параметрах, может быть, на первый взгляд, необоснованно повышенной. Что обусловлено устранением повре­ждений вирусной ДНК с помощью защитных механизмов клетки-хозяина и появле­нию новой, функционально полноценной, генерации вирионов. Поэтому в началь­ном периоде инактивации действие производных этиленимина может проявляться незначительно.

Полный цикл репродукции аденовируса в клетке (при заражении культуры кле­ток), после 12-24-часового латентного периода (от заражения клетки до начала фор­мирования зрелых вирионов) длится 24 часа. Затем следует 24-часовой период нако­пления вирионов в виропласте ядра клетки-хозяина до критического количества. Исход взаимодействия аденовируса и клетки зависит от многих причин, в том числе от типа вируса, остроты течения инфекции и других. При литическом (или «взрыв­ном») варианте после завершения созревания определенного количества вирионов происходит разрушение ядерной оболочки и выход всей массы вирусов. Возможен выход вирионов по мере созревания одиночно или группами, почкованием от обо­лочки ядра, а затем оболочки клетки.

В связи с эпителио-, гепато-, а, при определенных ситуациях, пантропностыо аденовирусов, они поражают различные органы и ткани птиц. При остро протекаю­щих инфекциях, через 3-4 суток после заражения, аденовирусы выделяли из гомогенатов печени, селезенки, поджелудочной железы, фабрициевой сумки, трахеи, конъ­юнктивы, легких, периферической крови, лейкоцитов и сыворотки крови, репродуктивных органов, пищевода, кишечника, его содержимого и фекальных масс, назальных, глоточных и клоакальных смывов, из центральной нервной систе­мы (обычно при интрацеребральном заражении).

Аденовирусы с 1 по 9 серотипы (не гемагглютинирующие, в т. ч. не вирус ССЯ-76) способны вызывать снижение яичной продуктивности у кур-несушек. Трудно считать этот признак специфичным для аденовирусов, поскольку снижение яичной продуктивности наблюдается по многим причинам. Однако имеются сведе­ния о зависимости между снижением яичной продуктивности, снесением яиц со сла­бой скорлупой или бесскорлупных яиц, особенно у мясных кур-несушек, около 30-недельного возраста и наличием в популяции аденовирусов. При эксперимеитальном комбинированном заражении кур-несушек (одновременно — интраназальном и внутримышечном) отмечается снижение яйценоскости на 12%, наблюдающееся в те­чение 10-21 дней.

Многие штаммы аденовирусов, особенно относящиеся к 1 и 2 серотипам, могут по­ражать дыхательную систему птиц и вызывать различные заболевания. Однако зави­симость между наличием поражения органа дыхания и выделением от больных кур аденовирусов не доказывает, что аденовирусы были единственной первопричиной па­тологии. Но попадание в организм дополнительного, даже условно патогенного агента, токсинов или интенсивное воздействие на организм птиц какого-либо факто­ра небиологического происхождения может активизировать латентные аденовирусы, локализующиеся в различных участках дыхательной системы. Возникает респиратор­ный симптомокомплекс: угнетение, снижение двигательной активности, бронхит, тра­хеит, иногда пневмония. Вирус выделяется из назальной и трахеальной слизи, гомогенатов трахеи и легких

Аденовирусная инфекция имеет зооантропонозное значение, поскольку отмечена чувствительность млекопитающих к аденовирусам некоторых серотипов. Аденовиру­сы птиц, как и собак, КРС, человека обладают онкогенными свойствами. Трансфор­мирующая (онкогенная) активность установлена у вирусов первого серотипа и штам­мы Phelps и Ote; второго — штамм SR-48; третьего — штамм SR-49; четвертого — штамм KR-95; шестого — CR-119. Притом некоторые штаммы трансформируют не только клетки птиц, но также млекопитающих, в том числе людей.

Аденовирусы индуцируют выработку вируснейтрализующих, атигемагглютинирующих, комплементсвязывающих и вируспреципитирующих антител.

источник

Аденовирусная инфекция птиц — хроническая в основном у птиц и летальная у КЭ инфекция, вызываемая вирусами CELO (Chicken Embrio Lethal Orphan) и GAL (Gallus Adeno-Like virus ). Первые сообщения о выделении штаммов, которые позднее были классифицированы как аденовирусы птиц (АВП), поступили из Южной Африки и США. С тех пор в ряде лабораторий были выделены многочисленные изоляты АВ, в том числе от домашних кур, индеек, уток, фазанов, перепелов, цесарок, голубей, а также от диких птиц. До тех пор, пока не были выяснены связи между изо-лятами и болезнями птиц, выделенные изоляты получали самые разные названия, например, энтеровирус, латентный вирус или энтероцитопатогенный птичий вирус орфан (ЕСАО). Так, выделенный из КЭ вирус соответственно его патогенному действию назвали Chicken Embtyo Lethal Orphan (CELO). Вирус, выделенный как контами-нант из iut. RPL-I2 лимфоидного лейкоза, из-за сходства с АВ получил название Gallus Adeno-Like (GAL). Лишь в 1977 г. Мс Ferran, Adair предложили в названии вирусов, выделенных от птиц, отражать как вид птицы, от которого они выделены, так и их серотип. Таким образом, название «аденовирусы птиц» остается общим для обозначения всех изолятов от птиц.

Ветеринарным вирусологам были известны три птичьих вируса до того, как они были отнесены к семейству аденовирусов: 1) возбудитель бронхита перепелов (Quail Bronchitis Virus — QBV), впервые выделенный в 1949 г. N. O. Olson в Западной Вирджинии (США); 2) CELO- кишечный сиротский летальный вирус КЭ, изолированный в 1962 г. доктором V. J. Yates и являющийся причиной гибели эмбрионов. До недавнего времени вирус CELO не вызывал заболевания цыплят после вылупления; 3) вирус, изолированный в 1958 г. доктором G. R. Sharpless из общего пула с вирусом лимфоматоза птиц, а в 1960 г. идентифицированный B. R. Burmester как аденоподобный вирус GAL. Он был выделен позднее, чем QBV (вирус бронхита перепелов) и вирус — CELO. В 1959 г. было показано близкое родство (но не идентичность) между вирусами CELO и QBV, и лишь в 1963 г. вирусы CELO и GAL были отнесены к аденовирусам.

В настоящее время насчитывается 13 различных серотипов АВ, относящихся к группам CELO, GAL, и один тип — возбудитель синдрома снижения яйценоскости или литья яиц — EDS-76 (Egg Drop Syndrome -76). АВ инфекция в промышленном птицеводстве приобрела особое значение по ряду причин. Во-первых, у кур она вызывает такие болезни, как гепатит с тельцами-включениями, у индеек — геморрагический энтерит, у фазанов — вирусный гепатит и мраморная болезнь селезенки, у перепелов — бронхит. Во-вторых, АВ часто выступают в роли вторичного фактора при других инфекционных болезнях, особенно при инфекционном бронхите кур, микоплазмозе и других заболеваниях дыхательных путей птицы. В-третьих, АВ отрицательно влияют на яйценоскость и качество яиц. И наконец, вследствие вертикальной передачи АВ птиц, контаминируя КЭ, часто являются помехой в использовании эмбрионов с целью репродукции других вирусов. АВ птиц широко распространены в США, Канаде, Германии, Швеции, Франции, Венгрии, Италии, Югославии, Чехии, Северной Ирландии, Южной Ирландии, Японии, Индии, Корее, Египте, Австралии, Великобритании.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. В Естественных условиях CELO-инфекция может протекать остро или латентно. АВ в ассоциации с другими возбудителями вызывают развитие инклюзионного гепатита, респираторных болезней, воспаления органов яйцеобразования, теносиновитов, апластической анемии, геморрагического энтерита, геморрагии в мышечной ткани и органах. Наиболее патогенным оказался вирус CELO. Вирус GAL распространен широко, однако его роль недостаточно ясна; аденовирус IBH (Inclusion body hepatitis), вызывающий инклюзи-онный гепатит с тельцами-включениями в печени, продолжается 5—7 недель с летальным исходом до 31 %. Многообразие клинических симптомов и патологоанато-мических изменений, вызванных вирусом CELO, или, возможно, некоторыми другими типами АВ, могут быть связаны с поражением респираторных органов, печени и диареей, нервными симптомами, слабостью конечностей, отставанием в развитии или снижением яичной продуктивности.

Течение АВ инфекции у кур и цыплят может усиливаться или ослабляться сопутствующими факторами: наличием специфических AT, возрастом птицы, поражением ее бактериями, микоплазмами, вирусом инфекционного бронхита и усугубляться условиями содержания, излишней плотностью посадки птицы, плохой вентиляцией и проводимой в птичниках дезинфекцией. Помимо вялой, клинически нечетко проявляющейся аденоинфекции птиц, известны еще 4 нозологически обособленных болезни, вызываемые аденовирусами группы CELO. Это инклюзионный гепатит, мраморная болезнь селезенки фазанов, бронхит перепелов и геморрагический энтерит индеек.

После первичного инфицирования слизистой оболочки верхних дыхательных путей у зараженной птицы в течение 3—14 дней отмечается виремия. В этот период вирус можно выделить из крови, трахеи, легких, почек, печени и селезенки. Однако с повышением титра AT уровень виремии постепенно снижается, но в течение 1—2 недель еще удается выделять вирус из слизистой оболочки кишечника, верхних дыхательных путей, иногда помета, т. е. из мест, благоприятных для размножения АВ.

Механизм воздействия АВ на изменение яичной скорлупы, пока недостаточно ясен. При гистологическом исследовании яйцевода у естественно больных птиц находили незначительные изменения, отек его с умеренной инфильтрацией плазматическими клетками, лимфоцитами и гетерофилами в соединительную пластину и уменьшение или исчезновение секреторных гранул в эпителии матки. Анализ сыворотки показывает уменьшение алкалинфосфатов, энзимов, входящих и участвующих в формировании скорлупы. Исследования матки показали, что на 3-й день она была нормальной, на 7-й — находили в клетках складок эпителия тельца-включения, на 10-й — отмечали тельца-включения и некроз эпителия с воспалением и артериитом, на 15-й день — сильное воспаление и некротическо-пролиферативный артериит.

Патология КЭ. Это наиболее патогномоничные признаки АВ инфекции (группы CELO) в птицеводстве. В естественных условиях она проявляется уменьшением объема амниотической жидкости и увеличением аллантоисной, геморрагией КЭ, аналогичной той, которая вызывается вирусом ИБК, утолщением и помутнением ХАО. В ядрах клеток эктодермального эпителия оболочек обнаруживают базофильные включения, гиперемию эмбрионов и дегенеративные изменения в печени. КЭ меньше контрольных, отекшие, с кровоизлияниями. На 17-й день вирус влияет на вылуп-ление. Winterfield R. W. считал, что поражения, возникающие в КЭ, зависят от возраста его и метода введения вируса. Mandelti G. заражал эмбрионы АВ птиц (шт. 1123/75 и PV, выделенными из образцов печени с ядерными включениями в клетках) и наблюдал в 20—60 % случаев их гибель. При вскрытии таких КЭ отмечалась их бледность, печень имела светло-коричневый или зеленоватый цвет с обширными некротическими очагами вдоль краев печеночных долей. При инокуляции вируса на ХАО через 6—7 дней появлялись небольшие беловатые фокусы. При гистологическом исследовании печеночные поражения представляли собой ишемические некрозы, окруженные интенсивной перифокальной гиперемией, в остальной паренхиме печени были дегенеративные явления и слабо эозинофильные внутриклеточные включения. В эпителиальных клетках фокусов эктодермы ХАО просматривались большие внутриядерные эозинофильные включения.

У КЭ, зараженных в аллантоисную полость или желточный мешок, в гепатоцитах и в меньшей степени эпителиальных клетках кишечника и почечных канальцев обнаруживаются внутриядерные тельца-включения. Причем, в тех случаях, когда вирус не инокулировался в аллантоисную полость, вирусный АГ в эмбрионе не выявляется. При заражении КЭ в аллантоисную полость вирусный АГ успешно выявлялся ИФ в легких, почках, кишечнике, слизистой оболочке носовой полости и костном мозге, а внутриядерные тельца-включения — в клетках печени тех эмбрионов, которые ино-кулировались вирусом GAL. Вирус GAL, инокулированный на ХАО эмбриона, также индуцировал образование внутриядерных включений в клетках гепатоцитов.

Патологоанатомические изменения у больной птицы нетипичны, иногда они проявляются легким опуханием верхней части трахеи. При гистологическом исследовании в подслизистой области трахеи находили небольшую пролиферацию моно-нуклеарных клеток. Описаны изменения у кур, как тяжелые поражения в виде хронического гепатита. Более ранние поражения печени проявлялись инфильтрацией лимфоцитов и фибробластов в портальную область. Цитоплазма гепатоцитов содержала маленькие жировые вакуоли, а внутри — ядерные эозинофильные включения в гепатоцитах также выявлялись, но в меньшей степени, чем в печени. В большинстве случаев печень поражалась лимфоцитарной и гетерофильной инфильтрацией в портальной области. В области фокусов отмечалась достаточно обширная жировая инфильтрация.

При интравенозном заражении 12-месячных кур вирусом СЕЮ (шт. Ote) отмечали изменения только в печени в виде серовато-белых фокусов размером от булавочной головки до просяного зерна или серовато-белых поражений на поверхности и разрезе органа.

Внутриядерные включения в гепатоцитах печени находили на 2—6-й день после инокуляции вируса. В почках их также обнаруживали на 2—6-й день после заражения. В эпителии протоков отмечали слабую дегенерацию и некроз. Внутриядерные включения в трахее были в эпителиальных клетках слизистой оболочки на 2—6-й день после инокуляции, а в легких они отмечались в ядрах эпителиальных клеток бронхов. В пластинках соединительной ткани, в основном в бронхах, обнаруживалась легкая лимфоцитарная и гетерофильная инфильтрация. Лишь у кур, зараженных вирусом интратрахеально, отмечали гистопатологические изменения в трахее. Базофильные внутриядерные включения в эпителиальных клетках трахеи обнаруживали редко.

Патологоанатомические изменения у птиц, инокулированных интравенозно, обнаружены в печени, селезенке, поджелудочной железе и почках. Поражения поджелудочной железы отмечали на 4-й день после инокуляции вируса. В эпителиальных клетках концевого отдела панкреатической железы были также обнаружены внутриядерные включения. Поражения селезенки отмечали на 2-й и на 4-й день после заражения. Они состояли в периваскулярном увеличении числа лимфоцитов и появлении внутриядерных телец-включений. В кишечнике отмечался незначительный острый катаральный энтерит.

При аэрозольном заражения шт. Ote и В1209 вируса CELO развивались обширные поражения легких, сопровождающиеся гиперемией и некоторым уплотнением. Поражения воздухоносных мешков состояли в помутнении и утолщении задней торакально-абдоминальной части, иногда наполненных пенистым или кремообразным экссудатом. У птиц, зараженных внутривенно или в костный мозг вирусом GAL, наблюдали только анемию.

Морфология и химический состав. АВ птиц, так же как и млекопитающих, имеют размер 95—100 нм с гексагональным профилем в сердцевине. Полые капсомеры в виде растянутых призм длиной 10—11 нм и шириной 5—6 нм имеют полигональные секции пересечения. Капсомеры кажутся упакованными в равносторонние треугольные грани, которые на ребрах разделены. По периферии частиц имеется 30 капсомеров в виде осей двойной симметрии, в каждом ребре по 4 капсомера, разделенных верхушками. АВ птиц имеет икосаэдральную форму кубической симметрии в соотношении 5:3:2, строение капсомеров сходно со стоением АВ человека типа 5. Вирионы его содержат 252 капсомера. Различие между АВ птиц и человека состоит в пустых вытянутых капсомерах, которые по форме приближаются к капсомерам вируса герпеса и полиомы. В препаратах инфицированных клеток, окрашенных ФВК, вирус GAL появлялся в ядре в виде кристаллических конгламератов и имел гексагональный профиль.

Ультраструктура очищенного вируса CELO такая же, как и вируса GAL. Каждый капсомер окружен 5, а некоторые 6 соединительными капсомерами. При ЭМ вируса бронхита перепелов обнаружено два типа частиц: большие (70—75 нм), похожие на вирус CELO, и маленькие (20—24 нм), возможно возникшие из больших частиц или представляющие лишь их внутренний компонент.

В монослое клеток почки КЭ, инфицированных вирусом CELO, вирионы иногда представлены в виде цепочки в ядре пораженной клетки, но никогда не обнаруживаются в виде кристаллоподобной ракетки, как об этом сообщалось в отношении вируса GAL. В виде кристаллов вирус CELO был обнаружен лишь в ядрах эндодермальных клеток ХАО КЭ, инокулированных в аллантоисную полость.

Вирионы АВ птиц не имеют липопротеиновой оболочки, плотность их в CsCl составляет 1,34—1,35 г/см3. Они не содержат липидов или жиров, что обусловливает их устойчивость к жирорастворителям (эфиру и хлороформу). В результате внутриядерной репродукции вирусов CELO и GAL формируются внутриядерные включения, имеющие диагностическое значение. ДНК и белок в вирусе CELO составляют 17,3 и 80,7 % соответственно.

Геном — линейная 2двуспиральная молекула ДНК с мол. м. 30 кД. Наибольший полипептид вируса CELO представляет гексон АГ, который был определен методом электрофореза в ПААГ. Так же были идентифицированы два полипептида пентона и два внутренних компонента.

Описаны такие структурные белки вируса CELO как V-антиген и неструктурный специфический Т-, или tumor (опухолевый)-антиген (или нео — антиген). Эти АГ обнаружены и в онкогенных птичьих АВ. Сообщалось о трансплантационном специфическом АГ вируса CELO, однако связь этого АГ с Т-АГ не установлена.

АГ вариабельность и родство. В 1980 г. идентифицировали 16 АВ птиц, в том числе 12 шт., выделенных из печени при гепатите, три — при респираторном заболевании и один — при разрыве связок ног. Пять из них оказались вирусами CELO серотипа 1; 11, изолированных из печени кур при гепатите, классифицировали по 4 различным серологическим группам: 1 — Р36 (тип 7); 2 — HI (тип 8); 3 — варианты типа 6, 7, 8; 4 — изолят 50, не проявлял родства ни с одной из испытанных сывороток, полученных к изучаемым штаммам.

Некоторые изоляты относительно легко типируются, другие, напротив, в перекрестных тестах проявляют широкую нейтрализующую активность, охватывающую многие типы. Jurajada V. предложил назвать их вариантами определенного серотипа или интермедиарными штаммами.

АВ птиц терморезистентны. Это относится к вирусу CELO (шт. Phelps) и к вирусу бронхита перепелов. У разных штаммов терморезистентность неодинакова, причем она зависит от соотношения в среде моно — и бивалентных катионов. Устойчивость к температуре 36 °С являлась маркером дифференциации вирусов CELO, бронхита перепелов (QBV) и инфекционного бронхита цыплят. Стандартных методов тестирования штаммов АВ птиц по их термостабильности еще нет. Поэтому Burke предложил использовать температурные тесты, которые могут считаться стандартными для характеристики 7- американских штаммов. Последние были тестированы в различных разведениях и в присутствии 1М моно — и бивалентных катионов и оказались чувствительны к нагреванию до 50 °С.

Среди структурных АГ АВ пентон наименее стоек к воздействию физических и химических факторов. Он термолабилен, разрушается в течение 10 мин при температуре 60 °С; чувствителен к трипсину, который переваривает его основание. Бивалентные катионы АВ придают ему высокую термолабильность. Вирус активен после воздействия на него температуры 56 °С более 1 ч. Его репродукцию не нарушает пребывание в среде с рН 3—8.

Описаны характеристики температурочувствительных мутантов вируса CELO, полученных из эпизоотического вируса при обработке мутагенами. Такие мутанты размножались крайне слабо в условиях 40 °С (пермиссивная температура) и хорошо — при 31 °С (непермиссивная температура). Вирус CELO относительно устойчив к ультрафиолетовым лучам, но чувствитен к фотодинамической инактивации. Обработка вируса CELO генетроном (З-флуорто-3-хлорэтаном), используемым для очистки вируса, существенно не снижала его титр. Титр вируса CELO не изменяется в широких пределах рН (2—9). Гусиный штамм АВ птиц не снижал свою инфекционность даже при РН 3.

АГ структура и АГ активность. У АВ птиц АГ идентифицируют по структурным субъединицам вируса, которые обозначают: 1) гексон АГ; 2) пентон АГ; 3) фибер АГ. В АВ птиц данные о длине фибера различаются. Показано наличие 3- типов АГ вируса CELO, которые были обозначены как А, В и С. Аналогичные АГ были выделены элюцией на ДЕАЕ-целлюлозе и названы Е-АГ (рано элюирующими), L (позднее элю-ирующими) и Т (токсином). Компонент, называемый в настоящее время гексоном, идентифицирован как группоспецифический АГ, так как он ответственен за групповую реактивность, и обозначен А АГ. Однако сыворотка, полученная на очищенный гексон, не только группоспецифична, но и нейтрализует инфекционность вируса, т. е. гексон обладает также типоспецифичностью.

АВ птиц индуцируют AT, определяемые в РСК, ИФ, РДП, ИФА, РН, РЗГА. ВНА, КСА и анти-ГА появляются через 7 дней после инокуляции вируса и достигают максимального титра через 2—3 недели. КСА циркулируют от 2—3 до 6—12 месяцев, а ВН — более 1 года. AT одного и того же типа обнаруживали также и в желтке яиц инфицированных кур-несушек. У цыплят материнские AT сохраняются до 5—6 недельного возраста.

При заражении кур вирусом CELO оральным путем в начале их яйценоскости об—разовывалось больше ВНА, чем ПА. Последние сохранялись до 11 — 14 недель, однако при инокуляции вируса интратрахеально ПА сохранялись дольше. При этом у взрослых кур их образовывалось больше, чем у молодых. Преципитирующие AT образовывались у птицы как при прямом заражении ее, так и контактно. У SPF-кур ВНА появлялись через 1—2 недели после интраназального заражения. Реинфицирование цыплят через 8 недель повышало их титр. Через 8 недель птица была чувствительна, хотя и имела специфические AT, но выделяла вирус с пометом.

Местный иммунитет при АВ инфекции играет более важную роль, чем гуморальный, так как препятствует размножению вируса на слизистых оболочках.

Все известные АВ птиц имеют общий групповой АГ. Он выявляется при двойной иммунодиффузии (ПААГ) или ИФ. В РН в культуре клеток установлено 12 различных серотипов АВ птиц. Вирус EDS-76 (Egg drop syndrome -76) не проявляет родства ни с одним из известным серотипом АВ птиц.

В современных птицеводческих хозяйствах АВ — постоянные (убиквитарные) вирусы. Их часто изолируют от внешне здоровых птиц. Совершенно неправильно считать, что у больных птиц АВ циркулируют в высоких титрах и что именно они — причина болезни птицы. Действительно, в одном случае они могут быть причиной болезни, в то же время могут быть только частью нормальной вирусофлоры птицы.

ГА свойства. В Отличие от АВ человека, АВ птиц не агглютинируют эритроциты, за исключением некоторых штаммов серотипа 1 (EV-89, Phelps, GAL-3, GAL-4 и 93), которые агглютинируют эритроциты крыс. Вирус CELO типа 1 из 10 видов эритроцитов агглютинирует лишь эритроциты крыс в условиях 37 °С; но реакция не протекала при 4 «С. Штаммы, относящиеся к типам 2—8 и двум серотипам АВ индеек (ТА-1, ТА-2), также не обладали гемагглютинирующими свойствами. Недавно был описан микротест задержки гемагглютинации для обнаружения аденовирусных AT.

Элюция птичьих ГА вирусов с эритроцитов происходит при более низкой температуре, сам ГА антиген инактивируется при 56 °С в течение 15—30 мин, хотя инфекционность вируса при этой температуре остается стабильной в течение часа. При центрифугировании 54000 g ГА АГ седиментирует полностью в течение 1 ч. Прикрепление вируса CELO к эритроцитам крыс происходит и при 4 °С, несмотря на отсутствие видимой агглютинации.

Описана пассивная ГА вируса CELO. Достаточно четко охарактеризованы АВ птиц по их патогенности. Изоляты, вызывающие инклюзионный гепатит и инфекционную анемию, представлены тремя разными серотипами. Данные по АГ различию

Культивирование. АВ птиц (CELO и GAL) успешно репродуцируются в КЭ, культурах клеток и органных культурах — тканевых эксплантатах. С момента открытия вируса QBV/CELO (возбудителя бронхита перепелов) КЭ широко используют для выделения, репродукции и изучения АВ птиц. Птичьи АВ (включая шт. Tipton) также хорошо репродуцируются в культуре клеток почек КЭ. Гомогенат ХАО используется для приготовления активного АГ при постановке РДП. Если клетки почек цыпленка, печени и почки эмбриона в равной степени чувствительны к вирусу CELO, то фибробласты КЭ почти в 100 раз менее чувствительны. По чувствительности и пригодности для выделения полевых изолятов вируса КЭ неоднозначны. Лишь японские изоляты CELO во всех разведениях вызывают 100 %-ную гибель эмбрионов.

Адаптация вируса GAL к куриным эмбрионам, в отличие от штаммов CELO, происходит более медленно и требует интравенозной инокуляции вируса в высоком титре. Гибель зараженных эмбрионов в этих случаях наступает лишь через 3—4 дня. После адаптации вирус GAL также оказывался летальным для эмбрионов при любом методе инокуляции. Размножение в эмбрионах других птичьих АВ, кроме CELO и GAL, изучено недостаточно. Размножение АВ птиц в эмбрионах птиц других видов происходило плохо, хотя вирусы бронхита перепелов и СЕШ-вирус успешно размножались в эмбрионах индеек.

источник

Таймасуков А.А. ОАО «Компания Кубаньптицепром»

Аденовирусный гидроперикардит бройлеров — остропротекающее и высоко контагиозное вирусное заболевание преимущественно бройлеров 3-5-тинедельного возраста, характеризующееся накоплением в перикарде транссудата, гепатитом, асцитом и нефрозо-нефритом. Степень тяжести болезни в естественных условиях зависит от влияния некоторых иммунодепрессивных инфекций, таких как инфекционная бурсальная болезнь (болезнь Гамборо), болезнь Марека и инфекционная анемия цыплят.

В настоящее время, во многих хозяйствах аденовирусный гидроперикардит начинает проявляться у 24-28 — дневных, а иногда у более молодых бройлеров, в свою очередь, провоцируя болезнь Гамборо или ухудшая формирование поствакцинального иммунитета против данного заболевания, а также Ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и других болезней. Источником инфекции является больная и переболевшая птица. Вирус передается аэрогенно, алиментарно и трансовариально. Возбудитель распространяется с воздухом, водой, кормом, предметами ухода, контактно, «с помощью» обслуживающего персонала. Переносчиками возбудителя инфекции могут быть дикие и синантропные птицы, насекомые и иксодовые клещи, а также простейшие микроорганизмы, в том числе кокцидии. Птицы родительского стада могут быть инфицированы аденовирусом перед началом или в процессе яйцекладки, что обуславливает интенсивную трансовариальную передачу возбудителя.

Аденовирусы птиц, по данным профессора В.А.Бакулина, условно дифференцированы на 3 группы. В первую группу входят 12 серотипов аденовирусов кур и других птиц, которые имеют общий группоспецифический преципитирующий антиген, например возбудители «CELO — инфекции», бронхита перепелов, панкреатита цесарок гепатита с включениями — гидроперикардита кур. Ко второй группе относятся аденовирусы, обладающие гемаглютинирующим антигеном и имеющие общий с первой группой преципитирующий антиген, в том числе аденовирус «Синдрома снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76)». В третью группу включены аденовирусы с группоспецифическим преципитирующим антигеном, отличающимся от таковых первых двух групп — аденовирусы геморрагического энтерита индеек и болезни «мраморной селезенки» фазанов. В промышленных птицеводческих хозяйствах аденовирусы распространены повсеместно. Любые из имеющихся 13 серотипов аденовирусов в различных сочетаниях могут циркулировать в одном хозяйстве, а также в организме одной внешне здоровой птицы [3].

Инкубационный период при заражении аденовирусом составляет 24-72 часа. Наиболее часто аденовирусный гидроперикардит бройлеров связан с застойными явлениями в сердце и с гидремией, приводящих к анемии. При экспериментальном заражении цыплята угнетены, взъерошены, «не держат крылья», возможна анемия, диарея с выделением фекалий с примесью уратов, отсутствие реакции на внешние раздражители. Максимальная смертность птиц на 2-4 день после заражения. Общая смертность цыплят-бройлеров может достигать до 75-85%. При хроническом или субклиническом течении клинические признаки незначительные или отсутствуют. Смертность составляет 1-7%.

При вскрытии трупов павших бройлеров обнаруживают желтоватое окрашивание подкожной клетчатки и внутреннего жира, очаговые кровоизлияния в мышцах, скопления в сердечной сорочке от 5 до 20 мл. серозного транссудата соломенно-желтого цвета водянистой или желеподобной консистенции. У экспериментально зараженных цыплят иногда наблюдается появление небольшого количества асцитной жидкости.

Сердце деформированное и дряблое, с точечными кровоизлияниями в миокарде, особенно на верхушке сердца и в ушках предсердий. Легкие уплотнены и отечны, в некоторых случаях с наличием серозной жидкости. Печень увеличена, с очагами некроза. Почки увеличены, с точечными кровоизлияниями, мозаичные, иногда с канальцами и мочеточниками заполненными уратами. Селезенка может быть увеличена, мраморная, отмечается атрофия фабрициевой бурсы.

Диагноз на аденовирусный гидроперикардит бройлеров ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатоми-ческих данных, результатов выделения вируса (из печени) на развивающихся эмбрионах кур, в культуре клеток печени, почек, фиброблас-тов эмбрионов кур, а также результатов заражения восприимчивых цыплят 10 дневного возраста [1]. Завершающим этапом в постановке диагноза является идентификация выделенного вируса в реакции нейтрализации, диффузиозной преципитации в агаровом геле (РДП), ПЦР. Ретроспективная диагностика проводится на основании выявления антител к возбудителю в РДП, РН и ИФА.

В настоящее время РНГА считается более предпочтительной, чем тест диффузной преципитации в агаровом геле, так как дает меньше неспецифических реакций.

Аденовирусный гидроперикардит бройлеров необходимо прежде всего дифференцировать от гидроперикардитов другой этиологии. Так, при пастереллезе, стафиллококкозе и стрептококкозе иногда возникает серозный перикардит. Решающим фактором при постановке диагноза служит выделение чистой культуры бактерий, вызывающих эти заболевания, путем посева материала из внутренних органов больных птиц на искусственные питательные среды. Аденовирусный гидроперикардит бройлеров от гидроперикардита, возникшего при острой форме болезни Марека, дифференцируют по наличию при болезни Марека в начальной стадии единичных, а позднее множественных опухолей в мышцах и во внутренних органах. Необходимо исключить инфекционную бурсальную болезнь (болезнь Гамборо), так как она часто сопутствует аденовирусной инфекции. При инфекционном бурсите поражения фабрициевой сумки постоянны и сопровождаются некрозом и псевдоэозинофильной инфильтрацией лимфоидных фолликулов. Для аденовирусной инфекции изменения фабрициевой сумки не характерны. Точечные кровоизлияния размером со спичечную головку по тонкому отделу кишечника, а особенно в двенадцатиперстной кишке необходимо дифференцировать от Ньюкаслской болезни [4].

Парвовирусную анемию цыплят и геморрагический синдром, обусловленные микотоксинами и применением сульфаниламидов также необходимо дифференцировать от аденовирусного гидроперикардита бройлеров. При парвовирусной анемии цыплят внутриядерные тельца-включения в гепатоцитах отсутствуют. При исключении геморрагического синдрома и апластической анемии принимают во внимание анамнестические сведения и результаты анализа кормов и гистологических исследований печени [2].

Для предотвращения возникновения эпизоотии по аденовирусному гидроперикардиту бройлеров необходимо использовать все доступные методы профилактики, в том числе и организационно-хозяйственного и социально-экономического характера. Они включают в себя раздельное кормление и содержание разновозрастных групп птиц, привлечение к работе не контактирующего с птицей в личных подсобных хозяйствах обслуживающего персонала и многие другие вопросы, направленные на охрану птицеводческих хозяйств от заноса инфекции. Защита птицеводческих предприятий должна осуществляться посредством использования програмных мер безопасности, с обязательным соблюдением принципа «все пусто — все занято».

Распространение инфекции может произойти при диагностических исследованиях птицы, поэтому участники проведения вакцинации и диагностических исследований, особенно при работе с вирусвакцинами, должны строго соблюдать все меры санитарной профилактики.

Аденовирус весьма устойчив к условиям внешней среды и может длительное время сохраняться в помете и подстилке. В качестве более эффективных дезинфектантов рекомендуются йодсодержащие препараты и гипохлорид натрия.

В регионах, неблагополучных по аденовирусному гидроперикардиту, применение только санитарных мер было малоэффективным и в связи с этим возникла необходимость разработки специфических мер профилактики.

В настоящее время в неблагополучных хозяйствах для специфической профилактики аденовирусного гидроперикардита цыплят используются инактивированные гидроокисьалюминиевые или эмульсионные вакцины. Цыплят-бройлеров вакцинируют однократно в 10-17 дневном возрасте, внутримышечно или подкожно. Ремонтный молодняк и кур яйценоских пород вакцинируют дважды: в 10-17 дней и затем при переводе, в удвоенной дозе, не позднее чем за 30 дней до начала яйцекладки. В некоторых хозяйствах, ремонтный молодняк предназначенный для формирования родительских стад, в раннем возрасте вакцинируют дважды с 2-недельным интервалом, а затем третий раз в удвоенной дозе при переводе. Иногда вакцину применяют в суточном возрасте, одновременно с вакциной против болезни Марека. Иммунитет, регистрируемый в РДП, наступает через 14-21 день.

Эффективного специфического лечения и профилактики лекарственными препаратами при аденовирусном гидроперикардите не разработано [1].

Конкретную схему специфической профилактики для каждого птицеводческого хозяйства необходимо выбирать индивидуально, в зависимости от его эпизоотической ситуации.

1. Алиев А.С., Сираждинов Р.С., Джавадов Э.Д., Алиев Г.С. Гидроперикардит (ГИП) птиц || Сборник Трудов ученых Академии менеджмента и агробизнеса нечерноземной зоны Российской Федерации «Пути совершенствования переподготовки руководящих кадров и повышения эффективности аграрного производства». — Санкт-Петербург. — 1996. — С.146-151.
2. Алиев А.С., Никитина Н.В. Диагностика и специфическая профилактика инфекционного гидроперикардита птиц || Мат. научно-производственной конференции, посвященной 190-летию высшего ветеринарного образования в России и 100-летию вет. науки. С-Петербург. — 1998. — Ч.1 — С. 14-15.
3. Бакулин В.А. Патоморфология экспериментального проявления аденовирусного гепатита с тельцами-включениями || Передовой научно-производственный опыт в птицеводстве, рекомендуемый для внедрения. — Загорск. — 1991. — С.33-37.
4. Бакулин В.А., Аксенова Е.Г., Горецкая Т.И. Ассоциированное течение инфекционных болезней респираторного комплекса, аденовирусной инфекции и болезни Гамборо || Мат. Всероссийской научно-производственной конф. «Ветеринарная биологическая наука сельскохозяйственному производству». — Н-Новгород. — 1997. — С.301-303.

В статье изложены распространения аденовирусной инфекции, клинические признаки и патологические изменения у цыплят-бройлеров. Предложены различные методы специфической профилактики аденовирусного гидроперикардита бройлеров.

Ключевые слова : аденовирусная инфекция птиц, аденовирусный гидроперикардит, дифференциальная диагностика болезни Гамборо и Марека, вакцинация бройлеров и ремонтного молодняка.

Ответственный за переписку с редакцией: Таймасуков Адам Азмето-вич, кандидат ветеринарных наук, генеральный директор ОАО «Компания Кубаньптицепром», 350000 г. Краснодар, ул. Северная 324, литер А, тел. 8 918 442 77 84, электронный адрес: kubpticeprom@yandex.ru.

ADENOVIRAL HYDROPERICARDITIS OF BROILER CHICKENS

Article describes distribution of adenoviral infection, its clinical signs and pathological changes in broiler chickens. Various methods of specific prevention of adenoviral hydropericarditis of broilers are offered.

Key words: adenoviral infection of birds, adenoviral hydropericarditis, differential diagnostics of Gumboro and Marek diseases, vaccination of broilers and young growth.

1. Aliev A.S., Sirazhdinov R.S., Dzhavadov Eh.D., Aliev G.S. Gidroperikardit ptits [Hydropericarditis of birds]. St. Petersburg (1996): pp.146 — 151. Print (in Russ.).
2. Aliev A.S., Nikitina N.V. Diagnostika i spetsificheskaya profilaktika infektsionnogo gidroperikardita ptits [Diagnostics and specific prophylaxis of infectious hydropericarditis of birds]. St. Petersburg (1998): pp. 14 — 15. Print (in Russ.).
3. Bakulin V.A. Patomorfologiya eksperimentalnogo proyavleniya adenovirusnogo gepatita s teltsami-vklyucheniyami [Pathomorphology of experimental display of adenoviral hepatitis with corpuscules-inclusions]. (1991): pp.33 — 37. Print (in Russ.).
4. Bakulin V.A., Aksenova E.G., Goretskaja T.I. Assotsiirovannoe techenie infektsionnykh bolezney respiratornogo kompleksa, adenovirusnoy infektsii i bolezni Gamboro [Associated course of infectious diseases of respiratory complex, adenoviral infection and Gumboro disease]. N.Novgorod (1997): pp. 301 — 303. Print (in Russ.).

Responsible for correspondence with the editorial board:

источник

Аденовирусная инфекция крупного рогатого скота вызывает у телят остро-протекающие заболевания слизистых оболочек дыхательных путей и пищеварительного тракта. Смешанные инфекции приводят к хроническому воспалению легких. У взрослого крупного рогатого скота аденовирусная инфекция большей частью протекает латентно. Выделение аденовируса из плодов свидетельствует о возможности трансплацентарной передачи возбудителя. Выявлено девять серотипов аденовирусов крупного рогатого скота. На основании наличия общего комплементсвязывающего антигена все аденовирусы крупного рогатого скота подразделяют на две антигенные подгруппы. Первые три типа имеют общий комплементсвязывающий антиген, отличающийся от такового остальных серотипов, также имеющих общий антиген.

Естественное или экспериментальное заражение аденовирусами вызывает у животных образование специфических антител. В течение первых 14 дней заболевания вначале появляются типоспецифические нейтрализующие и тормозящие гемагглютинацию антитела. Группоспецифические, комплементсвязывающие и преципитирующие антитела образуются спустя 25—30 дней после начала заболевания.

Пока еще неясно, в какой мере вакцинация против одного типа аденовируса защищает от заражения другими типами и происходит ли подавление иммунного ответа на фоне гетерологических антител. По-видимому, для защиты против инфекции особое значение имеют секреторные антитела. Колостральные антитела в сыворотке крови телят выявляют на протяжении 4 мес. после рождения. Однако в практических условиях заражаются телята даже с высоким титром материнских антител.

В специфической профилактике аденовирусной инфекции телят предпочтение отдается применению инактивированных вакцин. Вакцинация стельных коров — одно из направлений профилактики аденовирусной инфекции у новорожденных телят. Естественно, что выраженность пассивного иммунитета у телят зависит от исходного уровня антител в молозиве и его количества, потребленного в первые 24 ч жизни. В то же время было установлено, что пассивные антитела препятствуют активной иммунизации телят. Учитывая важность секреторных антител для защиты телят от аденовирусной инфекции, большое значение приобретает назальная иммунизация живыми вакцинами. Формолвакцина, в отличие от естественного заражения и живой вакцины, не вызывает образования КС-антител.

Инактивированная вакцина вызывает гуморальный ответ у стельных коров и телят, привитых в возрасте 10-15 дней и старше. У вакцинированных коров антитела сохранялись в течение 6 мес после отёла, а у телят — 4 мес. после вакцинации. Колостральные антитела сохраняются у телят 2,5 мес. Колостральные антитела подавляют иммунную реакцию на введение вакцины.

Среди аденовирусов птиц различают: обычные аденовирусы, гемагглютини-рующие, связанные с синдромом снижения яйценоскости кур и вызывающие геморрагический энтерит индеек и мраморную болезнь селезенки.

Обычные аденовирусы птиц имеют один групповой антиген, отличающийся от такового человека, выявляемого в РИД и ИФА. Пользуясь реакцией нейтрализации аденовирусы кур можно разделить по крайней мере на 12 серотипов. У аденовирусов индеек и гусей обнаружено по три серотипа, а уток — один. Обычные аденовирусы размножаются в пищеварительном тракте птиц и менее интенсивно — в слизистой оболочке носа и глаз. Виремию обычно наблюдают при наличии клинических признаков болезни. Однако неясно, являются ли обычные аденовирусы первичной причиной болезни или играют роль вторичного агента. Птица, инфицированная аденовирусом, является потенциальным вирусоносителем в течение всей жизни и, возможно, периодически выделяет его с секретами и экскретами, а также через яйца. Вирус передается горизонтально и вертикально — трансовариально. Обычные аденовирусы широко распространены у клинически здоровой птицы. Выделение аденовируса от больной птицы еще не указывает на его этиологическую роль.

Синдром снижения яйценоскости (ССЯ 76). Заболевание характеризуется тем, что птица не может достичь ожидаемого уровня яйценоскости или, достигнув, удержать его. Первыми признаками являются потеря пигмента скорлупой и снесение яиц с тонкой или мягкой скорлупой либо вовсе без нее. ССЯ обычно наблюдается в период пика яичной продуктивности, с которым связана активация латентной вирусной инфекции. Вирусные антигены обнаруживали только в яичниках и яйцеводах, а типичные поражения — в яйцеводах.

Возбудителем синдрома ССЯ является аденовирус ВС-14. Это природный аденовирус уток, который заражает кур. Он значительно лучше размножается в эмбрионах и культурах клеток утиного, чем куриного происхождения. Размножается в пищеварительном тракте и выделяется с пометом, может передаваться трансовариально.

Болезнь (ССЯ) регистрируют у кур, уток и гусей. Заболевание вызывается тремя аденовирусами, которые агглютинируют эритроциты кур. Один из них вызывает классический ССЯ во многих странах, другой — у уток в Англии, третий — ССЯ в Австралии. Вирус размножается с высоким титром в КЭ и в культурах клеток кур, уток и гусей (культуры клеток почек цыплят или печени эмбрионов). Главный путь распространения вируса — зараженные яйца.

Обычно соотношение зараженных и незараженных эмбрионов низкое. У цыплят, выведенных из зараженных яиц, обычно не образуется антител, однако они могут выделять вирус в течение нескольких дней, заражая других цыплят. Во взрослом состоянии у них не наблюдается синдрома снижения яйценоскости. Когда у таких особей начинается период яйценоскости, они становятся вирусо-носителями и выделяют вирус. Клиническая картина болезни зависит от иммунной прослойки. Если в стаде она мала, то возникает довольно острая вспышка заболевания. Если в стаде у многих особей имеются антитела, то поголовье окажется устойчивым к повторному возникновению заболевания.

Обычно куры болеют в течение 4-15 недель (некоторые особи 3-16 дней), а затем выздоравливают и несут нормальные яйца. В борьбе с заболеванием применяют эффективные вакцины. Птицу вакцинируют внутримышечно в 14—18-недельном возрасте. Вакцинация сокращает сроки вирусоносительства, а также продолжительность и интенсивность экскреции вируса с фекалиями после экспериментального заражения. Иммунизация птицы в хозяйстве препятствует распространению вируса и развитию заболевания. Яйценоскость у вакцинированной птицы увеличивалась на 20% по сравнению с непривитыми. Выраженной антигенностью и иммуногенностью обладала инактивированная эмульгированная вакцина из вирулентного штамма HP-1, размноженного в утиных эмбрионах. Разработана инактивированная эмульгированная вакцина против синдрома снижения яйценоскости, ньюкаслской болезни и инфекционного бронхита кур. Вакцина при однократном внутримышечном введении вызывала у 6-месячных цыплят, свободных от патогенных возбудителей, образование высокого титра антител и протективный эффект ко всем трем вирусам.

Инактивированную вакцину применяют до периода яйцекладки. Однако она скорее снижает заболеваемость, но не ликвидирует болезнь. Иммуногенность вакцины зависит от содержания ГА-антигена. Вакцина с ГА-активностью 10-13 log2 обладала выраженным протективным действием для 3,5 месячных цыплят.

источник

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему: Патогенез, диагностика аденовирусного гидроперикардита кур и его ассоциированного течения с другими инфекционными болезнями птиц

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Патогенез, диагностика аденовирусного гидроперикардита кур и его ассоциированного течения с другими инфекционными болезнями птиц

КОРОВИН Владимир Иванович

ПАТОГЕНЕЗ, ДИАГНОСТИКА АДЕНОВИРУСНОГО ГИДРОПЕРИКАРДИТА КУРИ ЕГО АССОЦИИРОВАННОГО ТЕЧЕНИЯ С ДРУГИМИ ИНФЕКЦИОННЫМИ БОЛЕЗНЯМИ ПТИЦ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология 16.00.02 — патология, онкология и морфология животных

Диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Работа выполнена в отделе вирусологии и опухолевых болезней птиц Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства, испытательной лаборатории ФГОУ ВПО Белгородской ГСХА, на птицефабриках РФ различного технологического направления.

— доктор ветеринарных наук, профессор, академик РАСХН Коровин Рудольф Николаевич

— доктор ветеринарных наук Бакулин Валерий Александрович

— доктор ветеринарных наук, профессор Кудряшов Анатолий Алексеевич

— доктор ветеринарных наук Трефилов Борис Борисович

Ведущая организация — ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита диссертации состоится «02» июня 2005 г в «13» часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.03 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул.Черниговская, 5

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан «30» апреля 2005 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В современных условиях ведения промышленного птицеводства наибольшую опасность представляют инфекционные заболевания птиц, в том числе аденовирусная инфекция кур Аденовирусный гепатит с включениями-гидроперикардит (ГТВ) — высококонтагиозное вирусное заболевание птиц, основными признаками которого являются гепатит, нефрозо-нефрит, скопление серозной жидкости в перикарде, нарушение свертываемости крови.

Заболевание получило широкое распространение и наносит значительный ущерб птицеводству не только при остром течении в виде «гепатита-гидроперикардита» со смертностью птиц от 20 до 70%, но и при субклиническом проявлении болезни, так же сопровождающемся поражением печени, поджелудочной железы, селезенки и других внутренних органах (Ибрагимов A.A., Горюнова Т.А., 1987; Бакулин В.А., 1991; Лагуткин H.A. с сотр., 1992; Алиев А.С с сотр., 1996; Бакулин В.А. с сотр., 1998; Борисов В.В. с сотр., 2003; Крон Н.В., 2003; Khawaja D. А. et al, 1988; Sai-fuddin M. D. and Wilks С. R., 1990; Cowen В. S., 1992; Ahmad Mansur-Ud-Din, Graham W. Burgess, 2001; Shivaprasad H L. et al., 2001, Raue R., et al., 2002). При комплексной диагностике аденовирусного гепатита с включе-ниями-гидроперикардита большое значение имеют патоморфологические исследования, которые позволяют понять сущность патологичесого процесса, протекаемого в организме зараженных цыплят, выяснить сопутствующую ему иммунологическую перестройку и объяснить многие функциональные изменения во внутренних органах птиц и обусловленные ими клинические признаки заболевания.

В настоящее время остаются недостаточно изученными вопросы патогенеза и диагностики ассоциированного течения аденовирусного гепатита с включениями-гидроперикардита с другими инфекционными и незаразными болезнями птиц Отсутствуют сведения об эффективности хими-опрепаратов при гепатите-гидроперикардите.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилось изучение эпизоотологии и патогенеза аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита, характера его ассоциированного течения с некоторыми инфекционными болезнями птиц, выбор наиболее достоверных методов диагностики аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита и изучение профилактического действия против возбудителя данного заболевания некоторых антивирусных препаратов.

В соответствии с поставленной целью в задачи наших исследований входило:

.. НАЦИОНАЛЬНАЯ | БИБЛИОТЕКА 1

1. Провести эпизоотический мониторинг по аденовирусному гепатиту с включениями — гидроперикардиту кур в различных птицеводческих хозяйствах России.

2. Изучить патогенез аденовирусного гепатита с включениями -гидроперикардита у кур различных кроссов

3. Исследовать характер ассоциированного течения аденовирусного гепатита с включениями — гидроперикардита с инфекционным бронхитом (ИБК) у птиц различного возраста.

4 Испытать антивирусное действие некоторых химических препаратов с целью неспецифической профилактики аденовирусного гепатита с включениями — гидроперикардита.

Научная новизна. Проведено эпизоотологическое обследование птицефабрик различных природно-климатических зон страны на птице различных кроссов и направлений продуктивности. Разработана комплексная система диагностики ГТВ, ИБК, ассоциированного течения аденовирусного гепатита с включениями — гидроперикардита с инфекционным бронхитом кур.

Впервые получены сведения о патогенезе и влиянии аденовирусного гепатита с тельцами включениями-гидроперикардита на характер течения инфекционного бронхита кур. Впервые испытан противовирусный препарат в качестве средства неспецифической профилактики аденовирусной инфекции и предложен для применения в промышленном птицеводстве

Практическая значимость. Изучено ассоциированное течение аденовирусной инфекции (ГТВ) и короновирусной инфекции (ИБК), что имеет большое значение в ретроспективной диагностике этих инфекций. Доработанная комплексная система диагностики позволяет в кратчайшие сроки ставить диагноз на ГТВ, ИБК и на их ассоциированное течение, своевременно применять средства специфической и неспецифической профилактики этих заболеваний Для химиопрофилактики аденовирусной инфекции впервые с положительным эффектом в лабораторных и производственных условиях апробирован противовирусный препарат «Бонаф-тон» и предложен для применения в промышленном птицеводстве

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Эпизоотический мониторинг по аденовирусному ГТВ в различных птицеводческих хозяйствах России.

2. Изучение патогенеза аденовирусного ГТВ у различных кроссов кур и характера его ассоциированного течения с ИБК у птиц различного возраста.

3 Испытание антивирусного действия некоторых химических препаратов с целью неспецифической профилактики аденовирусного ГТВ.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на методиче£ких ^.ученых советах Всероссийского НИВИ птицеводства, г. Санкт-ретрб^рг^МШР’ЗООг); на XIV международной межвузовской на-

учно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» СПбГАВМ, г.Санкт-Петербург (2001); на VII международной научно-производственной конференции БелГСХА, г.Белгород (2003); на II международной межвузовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперименты в науке» СПбГАВМ, г.Санкт-Петербург (2004).

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 4 печатных работах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложение

Работа иллюстрирована 24 таблицами, 11 рисунками Список литературы включает 165 источников, в том числе 115 иностранных.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 1999-2002 гг. в отделе вирусологии и опухолевых болезней птиц Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства, в испытательной лаборатории Белгородской государственной сельскохозяйственной академии и птицефабриках различного технологического направления РФ.

В лабораторных опытах было использовано 200 цыплят 10-суточного возраста, 60 цыплят 14-суточного возраста, 60 цыплят 35-суточного возраста, 160 цыплят 60-суточного возраста, 75 цыплят 80-суточного возраста, 80 цыплят 120-суточного возраста, полученных из птицефабрик благополучных по инфекционным болезням

Изучение патоморфологии спонтанного проявления аденовирусного гепатита с тельцами-включениями проводили на материале из 7 птицехо-зяйств различных природно-климатических зон страны, в т.ч.: птицефабрика «Петрозаводская» (республика Карелия, г Петрозаводск), птицефабрика «Владимирская» Красноярского края, птицефабрика «Томаровский бройлер» Белгородской области, АОЗТ «Птицефабрика Пермская» Пермской области, птицефабрика «Забайкальская» Читинской области, птицефабрика «Алком» (республика Хакасия) и птицефабрика «Таганрогская» (г.Таганрог).

Эпизоотологическое обследование проводили по общепринятой во ВНИВИП методике, которая предусматривает: анализ системы ветери-нарно-санитарных мероприятий, патологоанатомическое вскрытие трупов павших и вынужденно убитых птиц с отбором материала для гистологических, серологических, электронномикроскопических и вирусологических исследований и постановкой биопробы с использованием выделенного вирусологического агента для подтверждения диагноза.

Серологические исследования сыворотки крови цыплят на наличие антител к аденовирусу проводили в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле по общепринятой методике с использованием штамма «Т-12» аденовируса цыплят.

Гистологически исследовали пробы печени, фабрициевой сумки, тимуса, селезенки, поджелудочной железы, костного мозга, почек от цыплят различного возраста, имевших признаки гепатита с включениями-гидроперикардита Для обнаружения антигена аденовируса гепатита с включениями-гидроперикардита в печени использовали РДП

Вируссодержащий материал, полученный из птицехозяйств, выборочно контролировали электронномикроскопически. Препараты из надо-садочной жидкости подготавливали методом негативного контрастирования с использованием фосфорно-вольфрамовой кислоты по общепринятой методике (по Ыегти1) (Бакулин В.А. с сотр , 1998).

Опыт по экспериментальному воспроизведению «гепатита-гидроперикардита» проводили на 30 цыплятах популяции «Аврора» ВНИГРЖ, 15 цыплятах «Бройлер-6» 14-суточного возраста и 15 цыплятах кросса «Иза-браун», которых заражали внутримышечно аденовирусом птиц штамм «Т-12».

Серию опытов по изучению влияния аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита на развитие ИБК проводили на цыплятах 10-, 60- и 120-суточного возраста В работе использовали патогенный штамм ИБК «Чапаевский» Инфекционный титр вируса 1075-108’5 ЭИД50 Из каждой возрастной серии цыплят было сформировано по 4 группы (по 20 цыплят одного возраста в каждой группе): 1 группу заражали внутримышечно штаммом «Т-12» аденовируса птиц; 2 группу внутримышечно штаммом «Чапаевский» вируса ИБК; 3 — внутримышечно штаммом «Т-12» аденовируса птиц, а затем через 12 часов внутримышечно штаммом «Чапаевский» вируса ИБК; 4 группа птиц служила незара-женным контролем.

Убой цыплят и отбор проб внутренних органов проводили на 3-,6- и 10-сутки после заражения аденовирусом Для патоморфологических и гистологических исследований брали пробы печени, тимуса, фабрициевой сумки, селезенки, поджелудочной железы, 12-перстной кишки, трахеи, бронхов, легких, воздухоносных мешков, почек с надпочечниками, а от цыплят 60- и 120- суточного возраста, кроме того, яичник и яйцевод.

Серологические исследования сыворотки крови цыплят на наличие антител к аденовирусу и к вирусу инфекционного бронхита кур проводили в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле по общепринятой методике с использованием штамма «Т-12» аденовируса птиц и «Чапаевский» вируса ИБК, и методом ИФА.

Взятый материал фиксировали в 10%-водном растворе нейтрального формалина или в 96° этиловом спирте По окончании фиксации пробы

разделяли на ряд поперечных сегментов, каждый из которых заливали в парафин, руководствуясь методиками, изложенными в руководствах по гистологической технике Г.А Меркулова (1969), Г И. Роскина и Л.Б. JTe-винсона (1957), сократив время экспозиции материала в средах. Остальные органы заливали целиком Серийные срезы толщиной 5-7 мкр. готовили на санном микротоме, а затем окрашивали гематоксилином и эозином. Срезы исследовали с помощью стереоскопического микроскопа CETI с увеличением х 100 и комплексной компьютерной программы анализа изображений «Видео ТесТ 5,0».

Влияние аденовирусного гепатита с тельцами включениями-гидроперикардита на восприимчивость цыплят к инфицированию Е. coli проводили на 10-суточных цыплятах, заражая их аденовирусом — возбудителем гепатита с включениями — гидроперикардита штамм «Т-12» (ЛД50 на голову — 1,92 lg/0,2 мл), а затем Е. coli, серотипом 02. Перечень исследуемых органов и методики те же, что и в первом опыте.

Опыты по испытанию эффективности противовирусного препарата «Бонафтона» проводили в опытах на цыплятах-бройлерах 10-, 35-,50- и 80- суточного возраста.

Из птиц каждого возраста было сформировано по 5 групп — 20 голов в каждой, подобранных по принципу аналогов. Цыплятам первых трех групп за 12 часов до заражения патогенным штаммом аденовируса «Т-12» давали с кормом бонафтон в дозе 25, 50 и 75 мг/кг живой массы, и в последующие 5 суток продолжали давать препарат в указанной дозе — 1 раз в 24 часа. Цыплят четвертой группы заражали аденовирусом, но препарат не давали. Цыплята пятой группы были интактной контрольной группой. Период наблюдения составил 14 суток.

Влияние препарата на показатели неспецифической резистентности оценивали по следующим параметрам:

— гематологические: подсчитывали количество эритроцитов, лейкоци-тов(меланжерным способом с использованием камеры Горяева), гемоглобина (гемоглобин-цианидным методом), в мазках, окрашенных по Рома-новскому-Гимза, определяли лейкограмму на основании подсчета 200 клеток по Болотникову И.А. (1980);

биохимические: общий белок (рефрактометрическим методом);

— иммунологические: количество лизосомально-катионных белков (ЛКБ) (по Колабской Л.С. и соавт., 1975), бактерицидную активность сыворотки крови определяли методом, модифицированным П Н. Смирновым и соавт., (1989). Для математического анализа полученных данных был использован разностный метод Стьюдента-Фишера (Чистяков А.И., 1966).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Эпизоотологического обследования птицеводческих хозяйств.

Всего обследовано 7 птицехозяйств. Нами было отмечено, что гепатит с включениями-гидроперикардит регистрировался в различных природно-климатических зонах страны, как на мясных, так и на мясо-яичных и яичных кроссах кур. В естественных условиях регистрировались различные формы течения заболевания от субклинической до острой. Независимо от возраста цыплят, максимальный отход наблюдали на 5-6 день после начала болезни, постепенно он снижался к 10-12 дню.

При остром течении болезни обнаруживали гидроперикардит — скопление в сердечной сорочке серозной или кровянистой, позднее студнеобразной, а в единичных случаях, фибринозной массы (5 мл и более), незначительное увеличение и глинистое окрашивание печени, с наличием в ней пятнистых геморрагий и очагов некроза. Почки были увеличены, беловато-серого цвета (мозаичные), с отложением уратов в просвете канальцев и мочеточников. Селезенка иногда была увеличена, с кровоизлияниями, придавшими ей мраморный вид, тимус уменьшен в размере, поджелудочная железа иногда была гиперемирована, имела точечные кровоизлияния, бурса Фабрициуса в некоторых случаях была атрофирована, легкие уплотнены и отечны. Также наблюдали нарушение свертываемости крови.

При хроническом течении отмечали гепатит в виде незначительного увеличения печени, которая была желто-коричневого цвета или мозаичная, в некоторых случаях с кровоизлияниями и небольшими светлыми очагами по краям долек; панкреатит, нефрозо-нефрит, гипоплазию фабри-циевой сумки, спленит и очень редко гидроперикардит

При гистологическом исследовании в печени наблюдали гепатит с базофильными и эозинофильными тельцами-включениями в ядрах гепа-тоцитов, в поджелудочной железе — очаговые лимфоидно-гистиоцитарные пролифераты и наличие в отдельных её клетках внутриядерных телец-включений и атрофию железистой ткани

Падеж с паткартиной гидроперикардита выявляли в 30 — 70% случаев, в зависимости от возраста цыплят и остроты течения инфекции. Так у птиц 30-40-суток гидроперикардит был в 70% случаев, а у птиц старше 100-суточного возраста в 30% и реже При исследовании сыворотки крови птиц различного возраста в РДП, были установлены антитела к возбудителю аденовирусного гепатита с включениями — гидроперикардита.

В результате проведенных исследований нами отмечено, что тяжесть клинических признаков болезни зависит от генетических особенностей птицы, уровня естественной резистентности организма, а также от биоценоза вирусов и бактерий Болезнь чаще проявляется у птиц в состоянии иммуносупресии (например, при болезни Гамборо, при токсикоинфекциях и кормовых токсикозах), при которой аденовирус активно репродуцируется в организме.

Результаты эпизоотологического обследования птицефабрик

№ п п П гице- Возраст Кол-во проб/из РДП с гомоге- Гистология всего проб/из Биопроба всего проб/из

фабрика птиц, дн них по- натом них положи- них положи-

ложит* печени тельные тельные

1 «Петрозаводская» г Петрозаводск 1 27 37 40 взрослые 15/0 15/0 ни** 15/4 15/14 1 8 1 4 1 8 20/0 20/17 20/18 20/17 20/0 н и ± + + +

2 «Владимирская» Красноярский край 15-18 64 85 99 135 н и 5/0 10/1 5/2 10/4 + + + -н + 15/12 н и н и H и н и + + + н- +

3 «Пермская» г Пермь 45 49 58 + + + + + + 9/7 8/5 7/0 н и H и

респ Хакасия 45-50 + ± 2/2 H H

«Забайкаль- 3 — ± + + + 4/0 4/3 9/5 7/2 H и 1

5 ская» Читинская обл 10 26 + + ± +

6 «Таганрогская» г Таганрог 30 37 63 78-83 5/0 5/0 5/4 5/5 ± + + + н и н и н и н и H и ± + H и

«Томаров- 30 25/3 1 4 19/15 10/4

7 ский брой- 51 23/0 н и н и н и

Белгородская 180 25/17 н и H и H и

обл 242 21/17 н и н и H И 1

*- реакция РДП на наличие антител в сыворотке крови; ** — исследования

3.2. Восприимчивость птиц различных кроссов к аденовирусной инфекции и патоморфология экспериментальной формы аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита.

Опыт по экспериментальному воспроизведению «гепатита-гидроперикардита» проводили на 30 цыплятах популяции «Аврора» ВНИГРЖ, 15 цыплятах «Бройлер-6» и 15 цыплятах кросса «Иза-браун» 14-суточного возраста, которых заражали внутримышечно аденовирусом птиц штамм «Т-12» В ходе опыта наблюдали за общим состоянием птиц, проводили убой цыплят и отбор внутренних органов (печень, селезенка, почки, центральные и периферические лимфоидные органы) для последующих гистологических исследований При оценке восприимчивости птиц к заражению сравнивали число заболевших цыплят в различных группах, уровень смертности, наличие и интенсивность проявления характерных для заболевания патологоанатомических и гистологических изменений во внутренних органах.

Птиц популяции «Аврора» условно подразделили на 2 группы «белые» (в т ч. сероватые) и черные. Клинические признаки заболевания единично начали проявляться на 2-е сутки после заражения и были сильно выражены на 3-й сутки. Птицы были угнетены, имели взъерошенное оперение. Наблюдался плохой аппетит, вплоть до полного отказа от корма, на 5-8-е сутки, у некоторых птиц наблюдали затрудненное дыхание Результаты исследования представлены в табл.2.

1 № Количество павших цып- Сохран-

Всего птиц Сроки после заражения (ДН.) %

1. Аврора-белые 15 1 1 1 — 1 73,3

2. Аврора-черные 15 — — 1 — 1 86,7

3. Бройлер-6 15 1 2 1 1 — 66,7

4- Иза-браун 15 1 2 1 2 — 60,0 1

При патологоанатомическом вскрытии трупов павших цыплят через 36-48 часов после заражения отмечали гепатит-гидроперикардит, нефро-зонефрит, отек легких и нарушение свертываемости крови. Гидроперикардит наблюдался в 1-ом из 4-х случаев в первой группе, в 1-ом из 2-х во второй, в 2-х из 5-ти случаев в третьей и в 2-х из 6-ти в четвертой группе

При гистологическом исследовании проб печени от птиц различных групп устанавливали гепатит с наличием внутриядерных «телец-включений», характерных для аденовирусной инфекции. Интенсивность

поражения органа у птиц различных групп отличалось мало Проведенное исследование показало более высокую устойчивость к заражению аденовирусом, возбудителем «гепатита-гидроперикардита» цыплят популяции «Аврора» — сохранность 86,7%.

3.3. Патоморфология спонтанной формы аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита.

Изучение спонтанной формы ГТВ, проведенное в период с 19982002 годов, показало, что заболевание отмечается в птицехозяйствах, специализирующихся на разведении птицы различных пород и размещенных в самых разнообразных природноклиматических зонах Динамика и характер патоморфологических изменений, их варианты, отмечавшиеся при спонтанной форме болезни, были подобны тем, которые выявлялись при экспериментально воспроизведенном заболевании.

При обследовании птицехозяйств нами было отмечено, что в настоящее время встречается как острое, так и субклиническое течение заболевания.

При остром течении болезни обнаруживали гидроперикардит, печень была кровенаполнена неравномерно окрашена, с некрозами различной степени интенсивности Желчный пузырь был переполнен желчью, почки — увеличены, в мочеточниках обнаруживали скопление мочекислых солей. У павших цыплят селезенка была увеличена, отмечалась желтое окрашивание подкожной клетчатки и изредка кровоизлияния в скелетной мускулатуре. При гистологических исследованиях в паренхиме печени наблюдали выраженный периваскулярный отек и геморрагическую инфильтрацию, в просветах кровеносных сосудов повышенное скопление эритроцитов, клетки эндотелия в состоянии пролиферации. Большинство гепатоцитов были увеличены в размерах, цитоплазма их разжижена, в состоянии зернистого белкового и жирового перерождения. Отдельные клетки уменьшены, с резко ацидофильной цитоплазмой и пикнотичным ядром. В некоторых участках встречались небольшие очаги некроза. В почках отмечали застойные явления, набухание клеток эндотелия капилляров, дистрофические изменения эпителия в почечных канальцах и мочеточниках.

При хроническом течении наблюдали гепатит, панкреатит, нефрозо-нефрит, гипоплазию фабрициевой сумки, спленит и очень редко гидроперикардит.

В некоторых случаях заболевание патологоанатомически не проявлялось вовсе и для его регистрации были необходимы гистологические исследования. Несмотря на субклиническое начало заболевания, которое отмечалось у птиц 25-40-суточного возраста, как результат переболевания ГТВ, при гистологических исследованиях отмечали изменения в печени, характерные для гепатита с базофильными и эозинофильными внутриядерными включениями в гепатоцитах, иногда в поджелудочной железе —

панкреатит, с наличием внутриядерных включений в железистых клетках, в селезенке — спленит, с наличием внутриядерных включений в ретикулярных клетках.

Для подтверждения диагноза и контроля вируссодержащего материала, полученного из различных птицехозяйств России, был выборочно проведен ряд электронномикроскопических исследований. При отборе проб для гистологических исследований, в некоторых случаях, от одной птицы брали две пробы печени: первую пробу фиксировали для гистологического анализа, вторую замораживали в нативном виде. В тех случаях, когда находили характерные изменения в гистосрезах, парную пробу печени размораживали и обрабатывали для электронномикроскопических исследований методом негативного контрастирования по №гти1, таким образом, подтверждали специфичность вирусной этиологии болезни — обнаружением в пробе аденовируса. При электронно-микроскопических исследованиях находили вирусные частицы, которые по морфологии соответствовали аденовирусам.

3.4. Влияние аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита на развитие инфекционного бронхита кур.

Различные факторы, в том числе вирусные заболевания, способствуют развитию аденовирусной инфекции, это послужило основанием для проведения опытов по изучению ассоциированного течения аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита и ИБК. Исследования проводили на цыплятах 10-, 60- и 120-суточного возраста.

Заражение цыплят 10-суточного возраста штаммом «Т-12» аденовируса птиц сопровождалось их угнетением, взъерошенностью оперения, снижением аппетита. У цыплят 120-суточного возраста болезнь протекала в хронической форме. При заражении 10-суточных птиц смертность была 75% — 15 голов из 20, 60-суточных — 70% — 14 из 20, 120- суточных -60% — 12 из 20. Падеж в группе 10- суточных цыплят наблюдался в первые 2-4 суток, группах 60 и 120-суточного на 3-5 сутки после заражения.

Во второй опытной группе, у птиц 10-, 60- и 120- суточного возраста, зараженных штаммом «Чапаевский» вируса ИБК, первые клинические признаки в виде чихания, учащенного дыхания с инспираторной одышкой, влажными трахеобронхиальными хрипами появились у 30% 10-суточных цыплят через 22-24 часа после заражения, аппетит у большинства цыплят был сохранен. На 6 сутки опыта клинические симптомы наблюдались у 70% цыплят и были более выражены, отмечали понижение аппетита, усиление жажды, вялость, сонливость, в момент чихания птицы издавали короткие хрипловатые звуки. При надавливании в области основания клюва у 10-суточных цыплят, из носовых отверстий выделялась прозрачная, слегка пенистая жидкость.

При обследовании была резко затруднена фаза выдоха (стадия экспираторной одышки). На 20 сутки с момента заражения опытные цыплята

не проявляли клинических симптомов, за исключением отдельных цыплят, у которых были поражены воздухоносные мешки.

Смертность при заражении 10-суточных цыплят составляла 50%, 60-суточных — 10%, 120- суточных — 0% Падеж в группе 10- суточных цыплят наблюдался с 5 по 8 сутки после заражения и был наиболее выражен на 7 сутки. При вскрытии трупов вынужденно убитых и павших птиц отмечались характерные для инфекционного бронхита изменения.

В третьей опытной группе, где птицу заражали штаммом «Т-12» аденовируса птиц, а затем через 12 часов штаммом «Чапаевский» вируса ИБК, через 24 часа после заражения аденовирусом ГТВ отмечали угнетение, взъерошенность оперения, снижение аппетита. Через 48 часов у птиц 10-, 60- и 120- суточного возраста появились клинические признаки ИБК в виде чихания, учащенного дыхания с инспираторной одышкой, влажными трахеобронхиальными хрипами, в меньшей степени они были выражены у цыплят 120-суточного возраста Процент смертности в ходе опыта у 10-суточных — 85%, 60-суточных — 80%, 120-суточных — 60%. Падеж в группе 10-суточных цыплят наблюдался в первые 2-3 суток после заражения, в группах 60- и 120-суточных цыплят пик смертности приходился на 3-6 сутки заболевания.

На 3-е сутки опыта клинические симптомы наблюдались у 100% цыплят 60-, 120-суточного возраста Отмечали понижение аппетита, усиление жажды, вялость, сонливость, в момент чихания издавали короткие хрипловатые звуки При надавливании в области основания клюва из носовых отверстий выделялась прозрачная, слегка пенистая жидкость.

При вскрытии трупов птиц в первые 2-3 суток после заражения, в основном, изменения наблюдали в печени в виде гепатита (у цыплят 10-суточного возраста), отека легких и гидроперикардита (у 60-и 120-суточных цыплят) У птиц всех возрастных групп в печени наблюдались гиперемия, очаговые кровоизлияния, наиболее выраженные в области капсулы органа, вакуолизация цитоплазмы гепатоцитов и формирование микронекрозов, наличие в гепатоцитах внутриядерных включений

При гистологическом исследовании органов дыхания у птиц 60-, 120-суточного возраста обнаруживали явления острого воспаления: диффузную инфильтрацию лимфоцитами слизистой трахеи, бронхов и стенки воздухоносных мешков. Отмечали десквамацию респираторного эпителия и выпотевание серозного и серозно-слизистого экссудата в просвет трахеи, бронхов и полость воздухоносных мешков. В гепатоцитах печени обнаруживали характерные для аденовирусного гепатита — гидроперикардита тельца-включения.

Через 2-3 суток после начала гибели птиц при сохранении изменений в печени и гидроперикардите с наличием в сердечной сорочке от 5 до 10 мл жидкости, начали выявляться поражения почек, которые были увеличены и имели четкий рисунок канальцев и мочеточников. Сердечная

мышца была дряблая, светловатая. При гистологическом исследовании были установлены поражения печени, поджелудочной железы, селезенки, характерные для аденовирусной инфекции В почках — нефрозо-нефрит, в виде сильной гиперемии и кровоизлияний, зернистой дистрофии каналь-цевого эпителия, отложение уратов в канальцах и мочеточниках, в сердце — миокардит.

Результаты экспериментального заражения аденовирусом гепатита с включениями-гидроперикардита и ИБК

Смерт- Степень выра- Степень выра- I

Возраст Заражение вирусом Кол-во ность женности пат женности пат

птиц в группе гол % анатом изменений, характерных ГТВ, в «+» анатом, изменений, характерных ИБК, в «+»

10 Адено +бронхит 20 17 85 ++++ +++-

60 Адено +бронхит 20 16 80 +++- ++++

120 Адено +бронхит 20 12 60 +++-

Таким образом, ассоциированное течение аденовирусного гепатита с включениями-гидроперикардита и ИБК сопровождалось более высокой смертностью птиц, суммированием и увеличением интенсивности пато- i

морфологических изменений во внутренних органах птиц.

3.5. Влияние аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита на восприимчивость цыплят к инфицированию Е. coli.

Аденовирусная инфекция часто протекает в ассоциации с различными бактериальными агентами, в т.ч. с колибактериозом. При воспроизведении заболевания в экспериментальных условиях нами установлено, что заражение 10-суточных цыплят аденовирусом — возбудителем гепатита с включениями — гидроперикардита значительно повышает их восприимчивость к последующему инфицированию Е. coli, серотипом 02. Клиниче-

ские симптомы аденовирусного гепатита-гидроперикардита при этом проявляются более интенсивно В группе птиц с ассоциированным течением двух инфекций отмечалась высокая смертность до 90%, в то время как в группах цыплят зараженных аденовирусом и Е coli, серотипом 02 смертность составила 40% и 35% соответственно.

Наблюдали патологоморфологические изменения во внутренних органах в виде анемии, желтушности слизистых оболочек, скопление серозной жидкости в сердечной сорочке, в отдельных случаях с одновременным отложением фибрина на ней — фибринозный перикардит. Печень иногда была увеличена, желтушная, с наличием точечных кровоизлияний и очагов некроза по краям долек, отмечали сочетание указанной патологии с фибринозным перигепатитом. У 2-х цыплят из 20-ти отмечали аэро-сакулит, у 4-х — энтерит. В селезенке в отдельных случаях обнаруживали точечные некрозы. Поджелудочная железа слегка увеличена, бледно-розового цвета. Тимус и фабрициева сумка гипоплазированы. В гепатоци-тах, железистых клетках поджелудочной железы и ретикулярных клетках селезенки находили внутриядерные тельца-включения. При ассоциированном течение аденовирусной инфекции с колибактериозом, клинические симптомы аденовирусного гепатита с включениями — гидроперикардита усиливались.

Таким образом, при ассоциации вирусной и бактериальной инфекции изменения вызванные аденовирусом гепатита с включениями — гидроперикардита оказались более выраженными и с ними проявлялись изменения, характерные колибактериозу.

3.6. Лечебно-профилактическая и терапевтическая активность бонафтона при экспериментальном аденовирусном гепатите-гидроперикардите кур.

Химиотерапия вирусных инфекций — одна из актуальных задач современной вирусологии. Учитывая возможную перспективность данного направления в проблеме лечения и профилактики вирусных болезней птиц, нами было проведено испытание противовирусного препарата «Бонафтон», обладающего широким спектром действия, в том числе и против аденовирусов.

Полученные результаты собственных исследований по изучению свойств бонафтона при аденовирусном гепатите-гидроперикардите кур дают возможность сделать некоторые обобщения по действию препарата на естественную резистентность и его лечебно-профилактический эффект при данном заболевании Испытание эффективности бонафтона проводили на цыплятах 10-,35-,50-и 80-суточного возраста. Цыплятам за 12 часов до заражения патогенным штаммом аденовируса «Т-12» давали с кормом бонафтон в дозе 25, 50 и 75 мг/кг живой массы, всем возрастным группам и в последующие 5 суток продолжали давать препарат в указанной дозе Период наблюдения составил 14 суток. Результаты применения препарата

в дозах 50 и 75 мг/кг на цыплятах 10-суточного возраста оказались одинаковыми, сохранность в этих группах равнялась 65% или 13 голов соответственно, в контрольной группе этого возраста при заражении патогенным штаммом вируса смертность к четвертым суткам составила 100%.

Второй опыт проводили на цыплятах 35-суточного возраста, поскольку во многих птицехозяйствах аденовирус, вызывает субклиническое течение заболевания, в возрасте 30±5 суток В этой группе при применении препарата в дозе 50 мг/кг сохранность птиц была 80% — 16 голов, в дозе 75 мг/кг — 75% — 15 голов. В контрольной группе этого возраста при заражении патогенным штаммом вируса смертность к четвертым суткам составила 95%. При применении препарата в дозе 50 мг/кг сохранность птиц 50-суточного возраста была 75% — 15 голов, в дозе 75 мг/кг — 80% -16 голов. В контрольной группе этого возраста при заражении патогенным штаммом вируса смертность к четвертым суткам составила 70% — 14 голов, эти результаты совпали с результатами по первой группе, где доза бонафтона равнялась 25 мг/кг, т.е. эта доза препарата является неэффективной для цыплят 50-суточного возраста. При применении препарата в дозе 50 мг/кг сохранность птиц 80-суточного возраста была 80% — 16 голов, в дозе 75 мг/кг — 85% -17 голов. В контрольной группе этого возраста при заражении патогенным штаммом вируса смертность к четвертым суткам была 60% — 12 голов, эти результаты были схожи с результатами по первой группе (смертность 55% — 11 голов), где доза бонафтона 25 мг/кг, т е эта доза препарата являлась неэффективной для цыплят 80-суточного возраста Таким образом, в группах цыплят 10-, 35-, 50- и 80-суточного возраста при экспериментальном заражении аденовирусным гепатитом -гидроперикардитом применение бонафтона из расчета 50 мг/кг живой массы показало наилучшие результаты, сохранность в них была 65%, 80%, 75% и 80% соответственно, при смертности в контрольных группах, зараженных аденовирусным гепатитом — гидроперикардитом соответственно 100%, 95%,70% и 60%.

3.7. Влияние бонафтона на естественную резистентность цыплят и устойчивость к аденовирусной инфекции.

С целью изучения влияния бонафтона на иммунологические показатели организма птицы были проведены опыты по изучению содержания [§ в, Т- лимфоцитов, лизосомально-катионных белков (ЛКБ) и бактерицидной активности сыворотки (БАС) крови. Следует отметить, что в группе получавшей бонафтон произошло наиболее значимое достоверное увеличение уровня Т-лимфоцитов по сравнению с контрольной интактной группой- у 80-суточных — на 32,5%, 50-суточных — на 9,0%, 35-суточных -12,0%, 10-суточных — 9,0%, уровень у 80-суточных увеличился на 5,0%, у 35-суточных на 26,0% и у 10-суточных на 16,0% (Р Коровин, Владимир Иванович :: 2005 :: Санкт-Петербург

1.1. Аденовирусный гепатит с включениями-гидроперикардит

1.1.1. Характеристика вируса: морфология, химический состав и устойчивость

1.1.2. Выделение, репродукция вируса и экспериментальная инфекция

1.1.6. Патоморфологические изменения

1.1.8. Профилактика аденовирусного гепатита-гидроперикардита

1.2. Ассоциированное течение гепатита с включениями -гидроперикардита с другими инфекционными болезнями птиц

1.3. Инфекционный бронхит кур (ИБК). Классификация и биологические свойства вируса

1.3.1. Выделение, репродукция вируса ИБК и экспериментальная инфекция

1.3.5. Патоморфологические изменения

1.3.6. Диагностика, профилактика ИБК

1.5. Противовирусные препараты

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 46 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Результаты эпизоотологического обследования птицеводческих хозяйств 54 I, 2.2.2. Восприимчивость птиц различных кроссов к аденовирусной инфекции и патоморфология экспериментальной формы аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита

2.2.3. Патоморфология спонтанной формы аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита

2.2.4. Влияние аденовирусного гепатита с тельцами включениями -гидроперикардита на развитие ИБК

2.2.5. Влияние аденовирусного гепатита с тельцами включениями -гидроперикардита на восприимчивость цыплят к инфицированию E.coli

2.2.6. Лечебно-профилактическая и терапевтическая активность бонафтона при экспериментальном аденовирусном гепатите с тельцами включениями — гидроперикардите кур

2.2.7. Влияние бонафтона на естественную резистентность цыплят и устойчивость к аденовирусной инфекции

Введение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Коровин, Владимир Иванович, автореферат

В современных условиях ведения промышленного птицеводства наибольшую опасность представляют инфекционные заболевания птиц, в том числе аденовирусная инфекция кур. Аденовирусный гепатит с вклю-чениями-гидроперикардит (ГТВ) — высококонтагиозное вирусное заболевание птиц, основными признаками которого являются: гепатит, нефрозо-нефрит, скопление серозной жидкости в перикарде, нарушение свертываемости крови.

Заболевание получило широкое распространение и наносит значительный ущерб птицеводству не только при остром течении в виде «гепатита-гидроперикардита» со смертностью птиц от 20 до 70%, но и при субклиническом проявлении болезни, также сопроводжающимся поражением печени, поджелудочной железы, селезенки и других внутренних органов (Ибрагимов А.А., Горюнова Т.А., 1987; Бакулин В.А., 1991; Лагуткин Н.А. с сотр., 1992; Алиев А.С. с сотр., 1996; Бакулин В.А. с сотр., 1998; Борисов В.В. с сотр., 2003; Крон Н.В., 2003; Khawaja D.A. et al, 1988; Saifuddin M. D., Wilks C.R., 1990; Cowen B.S., 1992; Ahmad Mansur-Ud-Din, Graham W. Burgess, 2001; Shivaprasad H.L. et al., 2001, Raue R.B. et al., 2002). При комплексной диагностике аденовирусного гепатита с включениями-гидроперикардита, большое значение имеют патоморфологические исследования, которые позволяют понять сущность патологичесого процесса, протекаемого в организме зараженных цыплят, выяснить сопутствующую ему иммунологическую перестройку и объяснить многие функциональные изменения во внутренних органах птиц и обусловленные ими клинические признаки заболевания.

В настоящее время остаются недостаточно изученными вопросы патогенеза и диагностики ассоциированного течения аденовирусного гепатита с включениями-гидроперикардита с другими инфекционными и незаразными болезнями птиц. Отсутствуют сведения об эффективности хими-опрепаратов при гепатите-гидроперикардите.

Цель и задачи исследований.

Целью настоящих исследований явилось изучение эпизоотологии и патогенеза аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита, характера его ассоциированного течения с некоторыми инфекционными болезнями птиц, выбор наиболее достоверных методов диагностики аденовирусного гепатита с тельцами включениями — гидроперикардита и изучение профилактического действия против возбудителя данного заболевания некоторых антивирусных препаратов.

В соответствии с поставленной целью в задачи наших исследований входило:

1. Провести эпизоотический мониторинг по аденовирусному гепатиту с включениями — гидроперикардиту кур в различных птицеводческих хозяйствах России.

2. Изучить патогенез аденовирусного гепатита с включениями — гидроперикардита у кур различных кроссов.

3. Исследовать характер ассоциированного течения аденовирусного гепатита с включениями — гидроперикардита с инфекционным бронхитом у птиц различного возраста.

4. Испытать антивирусное действие некоторых химических препаратов с целью неспецифической профилактики аденовирусного гепатита с включениями — гидроперикардита.

Проведено эпизоотологическое обследование птицефабрик различных природно-климатических зон страны на птице различных кроссов и направлений продуктивности. Разработана комплексная система диагностики ГТВ, ИБК, ассоциированного течения аденовирусного гепатита с включениями — гидроперикардита с инфекционным бронхитом кур.

Впервые получены сведения о патогенезе и влиянии аденовирусного гепатита с тельцами включениями-гидроперикардита на характер течения инфекционного бронхита кур. Впервые испытан противовирусный препарат в качестве средства неспецифической профилактики аденовирусной инфекции и предложен для применения в промышленном птицеводстве.

Изучено ассоциированное течение аденовирусной инфекции (ГТВ) и короновирусной инфекции (ИБК), что имеет большое значение в ретроспективной диагностике этих инфекций. Доработанная комплексная система диагностики позволяет в кратчайшие сроки ставить диагноз на ГТВ, ИБК и на их ассоциированное течение, своевременно применять средства специфической и неспецифической профилактики этих заболеваний. Для химиопрофилактики аденовирусной инфекции впервые с положительным эффектом в лабораторных и производственных условиях апробирован противовирусный препарат — бонафтон и предложен для применения в промышленном птицеводстве.

Основные положения диссертации доложены на методических и ученых советах Всероссийского НИВИ птицеводства (1999-2002 гг.), на XIV международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» СПбГАВМ, г.Санкт-Петербург (2001 г.); на VII международной научно-производственной конференции БелГСХА, г.Белгород (2003 г.); на II международной межвузовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперименты в науке» СПбГАВМ, г.Санкт-Петербург (2004 г.).

По основным положениям диссертации опубликованы 4 научные работы, в которых изложены основные направления исследований по диссертационной теме.

Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложение.

источник