Автор: Светлана Викторовна Шишканова, заведующая независимой ветеринарной
лаборатории «Поиск», г. Санкт-Петербург.
Лейкограмма (leucogramma; лейко- + греч. gramma – запись) или лейкоцитарная формула – это процентное соотношение различных видов лейкоцитов, определяемое при подсчете их в окрашенном мазке крови под микроскопом.
Лейкограмма дает представление о балансе между выработкой лейкоцитов в костном мозге, их распределением в сосудистой системе и эмиграцией из кровеносных сосудов в ткани.
Существуют два метода подсчета лейкограммы: ручной (в окрашенном мазке крови под микроскопом) и автоматический (при помощи гематологического анализатора). В ветеринарии ручной метод подсчета считается наиболее точным, по сравнению с автоматическим методом. Ручной метод позволяет не только дифференцировать различные виды лейкоцитов, но и определить изменение морфологии клеток, появление нейтрофильной токсичности, наличие атипичных клеток, клеточных агрегатов, кровепаразитов. Врач-лаборант при исследовании окрашенного мазка крови должен помнить о неравномерном распределении лейкоцитов в мазке: лимфоциты принимают центральное расположение, нейтрофилы – краевое, в связи с чем при подсчете лейкограммы необходимо захватывать и центральную, и краевую зоны мазка.
При интерпретации лейкограммы немецкой овчарки мы видим выраженный лейкоцитоз и относительную лимфопению, у йоркширского терьера же, наоборот, умеренную лейкопению и относительный лимфоцитоз. Однако если мы сравним абсолютные значения лимфоцитов обеих собак, они будут одинаковыми и соответствуют варианту нормы.
Процентное соотношение лейкоцитов нужно лишь для подсчета абсолютных чисел. Лейкограмма только с процентным соотношением лейкоцитов может ввести в заблуждение ветеринарного врача. Абсолютное значение рассчитывается умножением процентного соотношения клеток данного вида на общее количество лейкоцитов у животного и делением на 100. Примерно ориентироваться на процентное соотношение клеток можно только при уровне лейкоцитов у животного в пределах референтного интервала.
При интерпретации лейкограммы ветеринарный врач должен задать себе следующие вопросы:
– Есть ли здесь воспаление?
– Есть ли воздействие глюкокортикоидов (стресс)?
– Есть ли влияние адреналина (возбуждение, волнение)?
– Есть ли некротические поражения тканей?
– Если есть воспаление, то можно ли его классифицировать?
– Есть ли системная токсемия.
В большинстве случаев понятия лейкоцитоз и нейтрофилия являются синонимами. Они характерны для воспалительного процесса. Продолжительность и тяжесть воспалительного процесса, а также ответ костного мозга на инфекцию будут определять степень нейтрофилии и возможность появления в крови незрелых форм (палочкоядерных нейтрофилов, метамиелоцитов и миелоцитов) – сдвиг влево.О сдвиге влево говорят при превышении количества палочкоядерных нейтрофилов более 1,0х10⁹/л, что характерно для острых воспалительных процессов. Менее выраженный сдвиг влево (0,3–1,0х10⁹/л) характерен для хронических и гранулематозных процессов.
Различают регенеративный и дегенеративный сдвиг ядра влево. При регенеративном сдвиге в крови преобладают зрелые нейтрофилы, он оценивается как адекватный ответ костного мозга на поражающее воздействие. При дегенеративном сдвиге ядра влево число незрелых нейтрофилов больше, чем зрелых, а общее число лейкоцитов находится в пределах нормы или снижено.
Дегенеративный сдвиг указывает на острый воспалительный процесс, который превышает способность костного мозга обеспечить потребность в зрелых нейтрофилах. В начале воспалительного процесса возникает нейтрофильный лейкоцитоз и выраженный сдвиг ядра влево. По мере истощения существовавших в депо созревания и хранения костного мозга сегментоядерных нейтрофилов происходит выделение палочкоядерных нейтрофилов и метамиелоцитов. Спустя некоторое время миелоидная гиперплазия в костном мозге увеличит выработку нейтрофилов. Увеличится выход в кровь зрелых клеток и уменьшится тяжесть левого сдвига. При стабилизации тканевого воспаления на устойчивом низком уровне костный мозг должен достичь достаточной скорости выработки нейтрофилов, чтобы большая их часть могла созревать до выделения в циркулирующее русло. Таким образом, при хроническом воспалительном процессе не наблюдается лейкоцитоз, а сдвиг влево незначительный или отсутствует. Хроническое воспаление общим анализом крови выявить сложно.
Если потребность в нейтрофилах очень сильная, в костном мозге может наблюдаться гиперплазия гранулоцитарного ростка, не находя отражения в виде нейтрофилии в периферической крови. Например, при пиометре у собак может встречаться нормальное или слега повышенное количество лейкоцитов и умеренный (до сильного) сдвиг лейкоцитарной формулы влево. После операции у таких животных может возникнуть рикошетная нейтрофилия, отражающая степень нейтрофилии гранулоцитарного ростка. Как правило, требуется около недели, чтобы профиль крови у таких собак вернулся к норме.
Стойкая нейтрофилия должна исследоваться на наличие очага хронического воспаления, абсцесса, некроза и опухоли. В таких случаях рекомендуется тщательно исследовать суставы (полиартриты), ЦНС (менингиты), сердечно-сосудистую систему (эндокардит) и желудочно-кишечный тракт (язвенные поражения).
Дифференциальная диагностика нейтрофильного лейкоцитоза включает:
– Воспаление;
– Воздействие кортикостероидов (стресс, терапия глюкокортикоидами, синдром Кушинга);
– Воздействие адреналина (возбуждение, страх, физическая нагрузка);
– Лейкозы.
Основные причины нейтрофильного лейкоцитоза со сдвигом ядра влево:
– Бактериальные инфекции (сепсис);
– Протозойные, грибковые и вирусные инфекции (например, инфекционный перитонит кошек);
– Несептические (некротические) процессы (например, панкреатит, тромбоэмболия);
– Химические воздействия;
– Гемобластозы (ОМЛ, ХМЛ, миелопролиферативные заболевания костного мозга);
– Опухоли различного происхождения (в результате выработки цитокинов);
– Аномалия Пельгер-Хьюита;– иммуноопосредованные заболевания (например, системная красная волчанка и иммунная гемолитическая анемия);
– Токсины: эндотоксины (например, при хронической почечной недостаточности) и экзотоксины (например, укусы змей).
Отсутствие изменений в лейкограмме не исключает воспалительных процессов.
Слабое и хроническое воспаление (например,при цистите) не вызывает изменения уровня лейкоцитов и лейкограммы. В связи с чем, в некоторых случаях необходимо проводить исследование белков острой фазы воспаления (например, определение С– реактивного белка у собак и антитромбина III у кошек или определять протеинограмму). Рис. 5
К плохому или осторожному прогнозу относят:
– Лейкоцитоз более 60х10⁹/л у собак и более 30х10⁹/л у кошек;
– Дегенеративный сдвиг влево;
– Лейкемоидную реакцию;
– Токсические изменения в нейтрофилах.
Подобные изменения в лейкограмме часто сопровождают грамотрицательный сепсис и указывают на тяжелый характер воспаления. У таких животных рекомендуется проводить анализ крови ежедневно.Гиперсегментация ядер (сдвиг вправо) Наличие в нейтрофилах ядер с пятью и более долями – это естественный процесс старения клетки. Гиперсегментация характерна для длительного пребывания нейтрофилов в кровеносном русле. Может встречаться у пожилых животных.
Основные причины появления:
– Хронические воспалительные процессы;
– Гиперадренокортицизм или глюкокортикоидная терапия;
– Миелопролиферативные заболевания;
– Дефект абсорбции кобаламина у собак;
– Дефицит фолиевой кислоты у кошек.
Гиперсегментация ядер нейтрофилов может появляться in vitro, при позднем приготовлении мазков крови (рис. 6).
Нейтропения – явление достаточно редкое.
Причины нейтропении:
– Сниженный выход нейтрофилов из костного мозга (дисгранулопоэз);
– Усиленная миграция нейтрофилов в ткани (нейтропения потребления);
– Переход нейтрофилов из циркулирующего в маргинальный пул.
Нейтропения сопровождает:
– Гемобластозы;
– Вирус лейкоза кошек (FeLV);
– Вирус иммунодефицита кошек (FIV);
– Идиосинкразии на лекарственные препараты (цефалоспорины, триметоприм, фенилбутазон);
– Влияние эндогенного и экзогенного эстрогена;
– Химиотерапию;
– Вирусные инфекции (парвовирус);
– Кровепаразитарные инфекции – эрлихиоз (Ehrlichia canis);
– Наследственные расстройства (циклический гемопоэз у серых колли и синдром Чедиака-Хигаси у кошек);
– Миелофтиз (множественная миелома, лимфолейкоз, миелодиспластический синдром);
– Первичную иммуноопосредованную нейтропению (системная красная волчанка).
При шоке происходит перемещение нейтрофилов из циркулирующего в краевой (маргинальный) пул – псевдонейтропения.
Для бельгийских овчарок-тервюрен характерна физиологическая лейкопения/нейтропения/лимфопения.При наличии стойкой необратимой нейтропении рекомендуется исследование пунктата костного мозга.
Дисгранулопоэз характеризуется уменьшением числа клеток-предшественников в костном мозге или нарушением процесса созревания клеток.
Причины:
– Гемобластозы;
– Вирус лейкоза кошек (FeLV);
– Вирус иммунодефицита кошек (FIV).
Лейкемоидными реакциями называют изменения крови, наблюдающиеся иногда при ряде заболеваний и характеризующиеся появлением в периферической крови большого количества молодых клеток, обычно встречающихся только в костном мозге.Картина периферической крови при лейкемоидных реакциях сходна с картиной крови при лейкозах: при реакциях миелоидного типа картина крови напоминает ХМЛ, при реакциях лимфатического типа – ХЛЛ.
Лейкемоидная реакция характеризуется выраженным лейкоцитозом (50–100х10⁹/л).
Отличия лейкемоидных реакций от лейкозов:
– При лейкемоидных реакциях в большинстве случаев удается найти этиологический фактор;
– Изменения крови при лейкемоидных реакциях, как правило, нестойкие, после устранения фактора, вызвавшего патологический процесс, профиль крови быстро возвращается к норме;
– Существенные различия обнаруживаются при исследовании пунктатов костного мозга.
Различают лейкемоидные реакции трех типов:
– Миелоидного (гранулоцитарного);
– Моноцитарного;
– Лимфоцитарного.
У человека описываются также лейкемоидные реакции эозинофильного типа. Чаще всего у животных встречаются лейкемоидные реакции миелоидного типа. Для них характерно наличие большого количества незрелых нейтрофилов (выраженный сдвиг ядра влево), возможно появление единичных бластных клеток. Нейтрофилы часто дегенеративно изменены (наблюдается выраженная нейтрофильная токсичность).
Могут встречаться при:
– Пиометре;
– Перитоните;
– Пневмонии;
– Пиотораксе;
– Пиелонефрите;
– Абсцессах;
– Иммунной гемолитической анемии;
– Функциональных нарушениях нейтрофилов (например, недостаточность протеиновой адгезии в лейкоцитах у ирландских сеттеров);
– Кровепаразитарных заболеваниях (например, пироплазмозе собак).
Лейкемоидные реакции лимфоцитарного типа характеризуются наличием большого количества лимфоцитов, также возможно появление пролимфоцитов и лимфобластов. Могут сопровождать пироплазмоз собак и гемобартонеллез. Лейкемоидные реакции моноцитарного типа характеризуются преобладанием моноцитов в лейкограмме, сами моноциты могут быть морфологически изменены, встречаются единичные монобласты. У собак подобный тип реакций описан при гемобартонеллезе.
источник
ЛЕЙКОЦИТАРНАЯ ФОРМУЛА , лейкограмма, процентное соотношение различных видов лейкоцитов, определяемое при подсчёте [подсчете] их в окрашенном мазке крови под микроскопом.
| Лейкоцитарная формула взрослых животных (по Кудрявцеву) | ||||||||||||||
| Вид животных | Лейкоциты, % | |||||||||||||
| гранулоциты | агранулоциты | |||||||||||||
| базофилы | эозинофилы | нейтрофилы | лимфоциты | моноциты | ||||||||||
| юные | палочкоядерные | сегментоядерные | ||||||||||||
| Сред-ние показа-тели | предель-ные колеба-ния | Сред-ние показа-тели | предель-ные колеба-ния | сред-ние пока-затели | предель-ные колеба-ния | сред-ние пока-затели | предель-ные колеба-ния | сред-ние показа-тели | предель-ные колебания | сред-ние показа-тели | предель-ные колебания | сред-ние показа-тели | предель-ные колеба-ния | |
| Крупный рогатый скот | 1,0 | 0,0-2,0 | 5-3 | 3,0-20,0 | 0,5 | 0,0-1,0 | 3,0 | 2,0-5,0 | 28,0 | 20,0-35,0 | 57,5 | 40,0-75,0 | 3,5 | 2,0-7,0 |
| Овца | 0,5 | 0,3-0,8 | 1,5 | 4,0-12,0 | 1,0 | 0,0-2,0 | 4,0 | 3,0-6,0 | 40,0 | 35,0-45,0 | 45,0 | 40,0-50 0 | 3,0 | 2,0-5,0 |
| Лошадь | 0,5 | 0,0-1,0 | 4,0 | 2,0-6,0 | — | 0,0-0,5 | 4,5 | 3,0-6,0 | 54,0 | 45,0-62,0 | 34,0 | 25,0-44,0 | 3,0 | 2,0-4,0 |
| Свинъя | 0,5 | 0,0-1,0 | 2,0 | 1,0-4,0 | 1,0 | 0,0-2,0 | 3,0 | 2,0-4,0 | 44,0 | 40,0-48,0 | 45,0 | 40,0-50,0 | 4,0 | 2,0-6,0 |
| Собака | 0,5 | 0,0-1,0 | 6,0 | 2,5-9,5 | — | — | 4,0 | 1,0-6,0 | 55,0 | 43,0-71,0 | 31,0 | 21,0-40,0 | 3,5 | 1,0-5,0 |
Лейкоциты в зависимости от плотности распределяются в мазках неравномерно: нейтрофилы, базофилы, эозинофилы — по периферии, ближе к краям; моноциты, лимфоциты — ближе к середине. При подсчёте [подсчете] лейкоцитов используют методы Шиллинга или Филиппченко. По Шиллингу определяют кол-во лейкоцитов в четырёх [четырех] участках мазка (четырёхпольный [четырехпольный] метод). Всего в мазке подсчитывают 100 — 200 клеток. Метод Филиппченко состоит в том, что мазок мысленно делят на 3 части: начальную, среднюю и конечную (трёхпольный [трехпольный] метод). Подсчёт [Подсчет] ведут по прямой линии поперёк [поперек] мазка от одного его края к другому. В каждой части подсчитывают одинаковое кол-во клеток. Всего учитывают 100—200 лейкоцитов. Обнаруженные клетки записывают в спец. таблицу дифференциального подсчёта [подсчета] (сетка Егорова). Для более быстрого и удобного определения Л. ф. применяют спец. 11-клавишный счётчик [счетчик] . Л. ф. зависит от вида животного, возраста, пола, конституции, породы, характера кормления и др. факторов (см. табл .).
В клинич. практике Л. ф. имеет большое значение, т. к. при любых изменениях в организме процентное содержание одних видов клеток белой крови увеличивается или уменьшается за счёт [счет] увеличения или уменьшения в той или иной степени других. По данным Л. ф. можно судить о ходе болезненного процесса, появлении осложнений и даже возможно предсказать исход болезни. Л. ф. позволяет дифференцировать сходные болезни: инфлюэнцу (лимфоцитов) от контагиозной плевропневмонии (нейтропения); чуму свиней (лейкоцитопения и лимфоцитов) от рожи (лейкоцитоз и эозинофилия) и т. д. Данные Л. ф. необходимо сопоставлять с клинич. проявлением болезни.
Лит.: Лабораторные исследования в ветеринарии, под ред. В. Я. Антонова и П. Н. Блинова, М., 1974.
источник
Суть эпизоотического и санитарного состояния хозяйства. Изучение кожи и шерстного покрова коровы. Анализ припухлости в области бедра правой тазовой конечности. Определение чувствительности к антибиотикам. Проведение пункции абсцесса в очаге размягчения.
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ
«ВИТЕБСКАЯ ОРДЕНА «ЗНАК ПОЧЕТА» ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ»
ФАКУЛЬТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ
Кафедра общей, частной и оперативной хирургии
Диагноз: «Абсцесс в области бедра правой тазовой конечности у коровы» (Abscessus)
1. Вид животного крупный рогатый скот, пол корова, масть и приметы черно-белая, без особых прмет, возраст 5 лет, кличка Льсен, порода черно-пестрая, упитанность средняя
2. Кому принадлежит (напишите наименование хозяйства, МТФ, район, область)
3. Дата поступления в клинику 10.06.2016
4. Диагноз (первоначальный): «Абсцесс» (Abscessus)
5. Диагноз окончательный: «Абсцесс в области бедра правой тазовой конечности у коровы» (Abscessus)
6. Осложнения не наблюдались
7. Исход: клиническое выздоровление
Животное содержится в типовом коровнике. Способ содержания беспривязный в станках по 100 голов. Полы бетонные. Кормление производится кормораздатчиком 3 раза в день. Поение — из автопоилок. Качество кормов и питьевой воды удовлетворительное. Рацион составляют: зеленая масса 60 кг, комбикорм КК60-1 — 3 кг. Продуктивность 4500 л молока в год.
Со слов обслуживающего персонала, у данного животного в области бедра правой тазовой конечности была колотая рана. Спустя неделю, на этом месте образовалась болезненная горячая припухлость.
Эпизоотическое и санитарное состояние хозяйства неблагополучно по вирусным инфекциям молодняка (ротовирусная инфекция, респираторно-синтициальная инфекция). Инфекционные болезни среди взрослого поголовья не регистрируются. В хозяйстве имеют место случаи заболевания животных анаплазмозом и бабезиозом. Санитарное состояние хозяйства удовлетворительное.
Проводимые противоэпизоотические, противопаразитарные, санитарные и зоогигиенические мероприятия Животных в хозяйстве вакцинируют против сальмонеллеза, колибактериоза, вирусных инфекций, пастереллеза. Данное животное подвергнуто туберкулинизации в марте текущего года, одновременно исследовались объединенные пробы молока на лейкоз. Результат отрицательный.
Температура 37,90С Пульс 73уд./ мин Дыхание 30 дых. движ./мин R5 — 9/
Габитус: Положение тела в пространстве — естественное лежачее. Телосложение — крепкое, с хорошей развитой мускулатурой. Упитанность — средняя.
Исследование кожи и волосяного (шерстного) покрова: Кожа эластичная, умеренно влажная, на непигментированных участках бледно-розового цвета, без нарушения целостности и наложений, запах специфический. Шерстный покров гладкий, блестящий, хорошо удерживается в коже, умеренно влажный.
В области бедра правой тазовой конечности имеется припухлость размером 10*20 см, полусферической формы, четко ограниченная от окружающей ткани. Местная температура повышена, болезненность умеренная, консистенция плотная, в нижней части припухлости отмечается незначительная флюктуация и очаг размягчения.
Исследование поверхностных лимфоузлов: Лимфатические узлы (нижнечелюстные, предлопаточные, коленной складки) без изменений. Не увеличены в размерах, сохранена подвижность, упругая консистенция, пальпация безболезненна, местная температура в норме. Надвымянные не пальпируются.
Исследование видимых слизистых оболочек: все без нарушения целостности, без наложений, умеренно влажные, с гладкой поверхностью. Конъюнктива матово-красная, слизистая рта бледно-розовая, слизистая носовой полости темно-пигментированная, влагалища — бледно-розовая с желтушным оттенком. Носовое зеркало умеренно влажное, прохладное.
Исследование отдельных систем
Система органов кровообращения: область сердца без видимых изменений, безболезненная. Сердечный толчок слабо просматривается, умеренный по силе, ритмичный, локализован в 4-ом межреберье, верхняя перкуторная граница — на линии плечевого сустава, задняя доходит до 5-го ребра. Тоны сердца ясные, хорошо прослушиваются, артериальный пульс ритмичный, хорошего наполнения, средней величины. Венный пульс отрицательный.
Система органов дыхания: истечения из носа незначительные, слизистого характера, без запаха и примесей. Выдыхаемый воздух имеет специфический молочный запах. Верхнечелюстная и лобная пазухи симметричные, без нарушения целостности, безболезненные, перкуссия дает коробочный звук. Область гортани и трахеи без видимых изменений, безболезненная. Прослушиваются звуки гортанного и трахеального дыхания. Кашель отсутствует, кашлевой рефлекс сохранен. Щитовидная железа бобовидной формы, безболезненная, подвижная, размером с лесной орех. Грудная клетка умеренно округлой формы, симметричная, без нарушения целостности, безболезненная, дыхание грудобрюшного типа, ритмичное, симметричное, умеренное. При аускультации везикулярное, патологические шумы в легких отсутствуют. Границы легких: по линии маклока справа до 11 ребра, слева да 10-го, по линии лопатко-плечевого сустава — до 9-го ребра. Перкуторный звук по всему полю легких ясный легочной.
Система органов пищеварения: Аппетит сохранен, жажда умеренная. Жвачка и отрыжка сохранены. Губы, язык, десны без видимых изменений, зубы сохранены. Область глотки и пищевода без видимых изменений, безболезненная, глотание свободное. Живот имеет ассиметричную форму. Область рубца без видимых изменений, безболезненная. Руминация — 9 за 5 минут. Глубокая пальпация сетки в области мечевидного хряща безболезненная. Пальпация и перкуссия книжки безболезненная, прослушиваются шумы шелеста. Область сычуга безболезненная, прослушиваются периодические шумы переливания и журчания жидкости. Перистальтика тонкого и толстого кишечника умеренная. Печень безболезненная, не увеличена. Дефекация безболезненная.
Система мочевыделительных органов: мочеиспускание безболезненное, поза естественная стоячая. Болезненность при глубокой пальпации почек отсутствует.
Система половых органов: наружные половые органы без видимых изменений. санитарный припухлость антибиотик абсцесс
Молочная железа: хорошо развита, чашеобразной формы, симметричная. Целостность кожи вымени и сосков не нарушена. При пальпации уплотнений, новообразований и болезненности не выявлено.
Система органов движения: Движения свободные, координированные. Костяк сформирован хорошо, развит симметрично. Поражений костно-суставного аппарата не выявлено. Мышечный тонус в пределах нормы, сохранен.
Органы чувств: Органы зрения и слуха без видимых изменений. Зрение, вкус, обоняние и слух сохранены.
Нервная система: глубокая болевая и тактильная чувствительность сохранены, движения координированы, четкие, реакция на внешние раздражители сохранена. Повреждения позвоночного столба не обнаружены.
(подробное описание клинических признаков патологического процесса)
Припухлость в области бедра правой тазовой конечности, размером 10*20 см, полусферической формы, четко ограниченной от окружающей ткани. Местная температура незначительно повышена, болезненность умеренная, консистенция плотная, в нижней части припухлости отмечается незначительная флюктуация и очаг размягчения.
Серологические: не проводились
Аллергические: не проводились
Бактериологические (вирусологические) и другие: не проводились
источник
Получение и подготовка крови к исследованию.
Кровь рекомендуется брать лучше утром в одни и те же часы (до кормления и водопоя), после отдыха и успокоения животного.
Стабилизация крови.
Для предупреждения свертывания крови используют один из следующих антикоагулянтов (на 10 мл крови): щавелевокислый натрий (калий или аммоний) — 0,01-0,02 г: (оксалатная кровь); лимоннокислый натрий — 0,02 г (цитратная кровь); фтористый натрий — 0,01 г; гепарин — 1 капля раствора, содержащего в I мл 5000 ME гепарина (гепаринизированная кровь). Антикоагулянты вносят в пробирку, в которую затем собирают кровь; пробирку закрывают резиновой пробкой и тщательно смешивают содержимое 1-2 минуты.
Получение сыворотки крови. Собранную в пробирку или стеклянный цилиндр кровь ставят сначала в теплое место (на 15- 20 минут), а потом в холодное. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок сосуда стеклянной палочкой или тонкой проволочкой. Полученную сыворотку осторожно отсасывают. Для лучшего отделения сыворотки от сгустка пробирку со свернувшейся кровью можно процентрифугировать 10-15 минут при 2-3 тыс. оборотов.
Получение плазмы.
Стабилизированную кровь наливают в пробирку и центрифугируют 10 минут при 1,5-2,0 тыс. оборотов в минуту. В результате оседания форменных элементов крови в пробирке образуется прозрачная жидкость — плазма, которую отсасывают и переносят в другую пробирку.
Исследование физических свойств крови.
Из физических свойств крови важное диагностическое значение имеет определение ее удельного веса, вязкости и скорости свертывания, а также реакции оседания эритроцитов.
Определение удельного веса крови.
Удельный вес крови опредетяют по методу Гаммершлага (в смеси бензола с хлороформом) или по способу Филиппса (в растворах медного купороса).
В норме удельный вес крови колеблется в следующих пределах: v крупного рогатого скота — 1,040-1,059; овцы — 1,037-1,049, козы — 1,041-1,061; яка — 1,045-1,063, лошади — 1,038- 1 062; свиньи — 1,042-1,060, кошки — 1,053-1,057, собаки — 1 044-1,056, кролика — 1,048-1,060, курицы — 1,039-1,057; гуся — 1,045-1,063.
Повышение удельного веса крови отмечается при поносах, рвоте, лихорадке, экссудативных и транссудативных процессах и гипергидрозах, диабете, нефритах, отравлении угарным газом. Понижение удельного веса наблюдается при истощении и различных анемиях.
Определение вязкости крови.
Вязкость крови определяют вискозиметром Гесса или Детермана. У здоровых животных вязкость крови составляет: у крупного рогатого скота — 4,6-5,2, овцы — 4,4-6,0, козы — 5,0-6,0, верблюда — 4,3-5,3, лошади — 3,4- 7,2, свиньи — 4,0-5,0, собаки — 3,8-5,5, кошки — 4,0-5,0, кролика — 3,5-4,5, курицы — 4,5-5,5.
Повышенная вязкость крови наблюдается при некоторых лихорадочных заболеваниях (плеврите, воспалении легких, перитоните), при сердечной недостаточности в период декомпенсации. Понижение вязкости встречается при первичных и вторичных анемиях, истощении.
Определение скорости свертывания крови.
На край хорошо обезжиренного предметного стекла, поставленного под углом 50°, наносят каплю крови. Стекая по стеклу, капля оставляет след. Через каждые 30 секунд по следу крови проводят острием иглы. Появление нитей фибрина на острие иглы указывает на начало свертывания крови. В норме скорость свертывания крови равна у крупного рогатого скота 5-6, лошади — 8-10, собак — 10 минутам.
Ускорение свертывания крови отмечается при миоглобинурии, крупозном воспалении легких, постгеморрагических анемиях. Замедление свертывания крови встречается при анемиях, нефритах, холемиях, сибирской язве, гемофилии, удушье.
Определение реакции оседания эритроцитов.
Реакцию оседания эритроцитов (РОЭ) нужно определять не позже двух часов после взятия крови. Реакцию оседания эритроцитов определяют или методом Неводова, или методом Панченкова.
Метод Неводова.
РОЭ определяют при помощи эритроседиометра, представляющего собой пробирку длиной 17 см и шириной 9 мм, с делениями от 0 до 100. Объем градуированной части пробирки равен 10 мл. В эритроседиометр вносят 0,02 г щавелевокислого натрия и наполняют кровью до отметки 100, закрывают резиновой пробкой и тщательно смешивают кровь с антикоагулянтом. Пробирку ставят в штатив и отмечают на часах начало исследования. Уровень столба эритроцитов определяют через 15, 30, 45 и 60 минут, а затем через 24 часа.
Метод Неводова обычно используется для определения РОЭ у лошадей. В норме у лошади РОЭ по этому методу через 15 минут составляет 40 (34-46), через 30 минут — 55 (49-61), через 45 минут — 58 (55-61), через 60 минут — 59 (56-62), через 24 часа — 65 (59-71), а у крупного рогатого скота — 2-4 деления за 24 часа.
Метод Панченкова.
РОЭ определяют в аппарате, состоящем из штатива и нескольких градуированных капилляров. Каждый капилляр градуирован от 0 до 100 делений, на уровне «0» (верхняя часть капилляра) нанесена метка «К» (кровь), а на уровне цифры «50» — метка «Р» (реактив). Объем градуированной части капилляра равен 100 мм3. Для постановки реакции капилляр смачивают 5%-ным раствором лимоннокислого натрия, а затем насасывают этот же раствор до метки «Р» и выдувают на часовое стекло. После этого тем же капилляром 2 раза набирают кровь до метки «К», каждый раз выдувая кровь на часовое стекло. Раствор и кровь на часовом стекле тщательно смешивают стеклянной палочкой, образовавшуюся смесь набирают в капилляр до метки «0». Капилляр устанавливают в штатив, учет высоты столба осевших эритроцитов ведут через 1 час и 24 часа.
В норме скорость оседания эритроцитов за один час по методу Панченкова колеблется в следующих пределах (в мм): у крупного рогатого скота — 0,5-1,5; овцы 0,5-1,0, козы — 0,3-1,0, верблюда — 1,0-4,0, лошади — 40,0-70,0, свиньи — 2,0-9,0, собаки — 2,0-6,0, лисицы серебристо-черной — 1,0-14,0, голубого песца — 1,0-5,0, норки — 1,0-3,0, соболя — 2,0-4,0, куницы- 2,0-4,0, кролика — 1,0-2,0, курицы — 2,0-3,0.
У молодых животных РОЭ более ускорена, чем у взрослых. Ускорение РОЭ наблюдается при многих лихорадочных инфекционных заболеваниях (инфекционная анемия, кровопятнистая болезнь, мыт, ангина и др.), лучевой болезни и т. д. Замедление РОЭ отмечается при механических илеусах и энцефаломиелите, желтухах, гастроэнтеритах, паралитической миоглобинурии лошадей и др.
Исследование химических свойств крови.
При исследовании химических свойств крови определяют: количество гемоглобина, билирубина, показатель резервной щелочности, количество в сыворотке крови общего белка, каротина, кальция и неорганического фосфора.
Определение количества гемоглобина (по Сали).
Количество гемоглобина определяют в гемометре ГС-2, состоящехм из колодки с тремя гнездами, градуированной пробирки, капиллярной и глазной пипеток. В двух крайних гнездах находятся или стандартные пробирочки, содержащие раствор солянокислого гематина, или стеклянные палочки соответствующего цвета. В среднее гнездо вставляют градуированную пробирку, имеющую две шкалы. Одна шкала (от 2 до 23) показывает количество гемоглобина в граммпроцентах (г%), а другая (от 10 до 140) — в процентах (в единицах гемометра); 10006 соответствует 16,67 г% гемоглобина.
В градуированную пробирку до метки «10» вносят глазной пипеткой 0,1 н. раствор соляной кислоты. Капиллярной пипеткой насасывают 20 мм 3 крови и осторожно выдувают ее в раствор кислоты. Затем этот раствор втягивают и выдувают обратно в пробирку несколько раз, чтобы смыть оставшуюся в пипетке кровь. Перемешивают и оставляют на 5 минут. В результате смешивания крови с соляной кислотой гемоглобин переходит в солянокислый гематин, раствор при этом приобретает коричневый цвет. Затем по каплям добавляют дистиллированную воду, постоянно помешивая до тех пор, пока цвет жидкости в пробирке не сравняется с цветом боковых стандартных пробирок. По делению шкалы, которое соответствует уровню раствора в пробирке, устанавливают количество гемоглобина.
Гиперхромемия — увеличение количества гемоглобина в крови — отмечается при поносах, рвоте, потливости, при образовании экссудатов и транссудатов.
Определение билирубина в сыворотке крови (по Ван-ден-Бергу).
В центрифужную пробирку берут 1 мл сыворотки крови к 2 мл спирта, смешивают и центрифугируют 20 минут. Затем к 1 лед прозрачного центрифугата прибавляют 0,5 мл спирта и 0,25 мл свежеприготовленной смеси диазореактивов Эрлиха (см. ниже). Окрасившуюся жидкость переносят в стаканчик колориметра и колориметрируют, сравнивая ее со стандартом, находящимся во втором стаканчике. Расчет производят по формуле:
где: С1 — количество билирубина (в мг%), С2 — концентрация стандартного раствора, Н1 — высота столба исследуемой жидкости (в мм), Н2 — высота столба стандарта (в мм), 5 — степень разведения сыворотки.
Смесь диазореактивов Эрлиха готовят из двух растворов:
1) сульфаниловая кислота — 0,2 г, соляная кислота (удельный, вес 1,19) З мл, дистиллированная вода — 200 мл;
2) азотнокислый натрий — 0,5 г, дистиллированная вода — 100 мл.
Оба раствора хранят в темной посуде. Для анализа приготовляют смесь двух растворов, для чего берут 10,0 мл первого раствора и 0,3 мл второго.
В качестве стандарта применяют раствор сернокислого кобальта (2,161 г предварительно высушенного реактива доводят дистиллированной водой до 100 мл), который хранят в темноте.
Для определения разновидностей билирубина и, следовательно, для дифференциации желтух применяют прямую и непрямую реакции.
Прямая реакция.
На 1 мл сыворотки крови наслаивают 0,5 мл смеси диазореактивов. Появление на границе жидкостей бордово-красного кольца указывает на наличие билирубина, проведенного через печень.
Положительная реакция всегда свидетельствует о патологии. Если кольцо появляется быстро, то это указывает на механическую желтуху, замедленная реакция отмечается при катаральной желтухе, циррозе печени, болезнях сердца.
Непрямая реакция.
К 1 мл сыворотки крови прибавляют 2 мл спирта, смешивают и центрифугируют. Затем 1 мл прозрачного центрифугата наслаивают в другой пробирке на смесь диазореактивов (1,5 мл). На границе жидкостей появляется цветное кольцо от розового до красно-фиолетового цвета. Положительная реакция зависит от наличия в сыворотке крови билирубина, не проведенного через печень. В норме эта разновидность билирубина обнаруживается у лошади. Повышенное содержание такого билирубина наблюдается при гемолитической желтухе.
В норме в сыворотке крови содержится билирубина у лошадей от 0,37 до 1,35 мг%, крупного рогатого скота — 0,01-0,30 мг%;
У других животных содержание билирубина в сыворотке очень незначительное (следы).
Определение резервной щелочности (по Неводову).
К 10 мл 0 01 н. раствора соляной кислоты прибавляют 0,2 мл крови, смешивают и титруют из микробюретки 0,1 н. раствором едкого натра до появления мути и выпадения хлопьев. Расчет производят по формуле:
где: х — резервная щелочность (в мг%),
а — количество миллилитров 0,1 н. раствора едкого натра, израсходованного на титрование.
Периодически для контроля к 10 мл 0,01 н. раствора соляной кислоты добавляют 1-2 капли 1%-ного спиртового раствора фенолфталеина и титруют 0,1 н. раствором едкого натра, до появления розовой окраски (нейтрализация). На титрование должен быть израсходован 1 мл раствора щелочи.
У животных в норме показатели щелочного резерва крови по Неводову составляют (в мг%): у крупного рогатого скота — 460-540, овцы — 460-520, козы — 380-520, верблюда 700-780, яка — 520-620, лошади — 470-620, лисицы серебристо-черной 340-500.
Ацидоз — снижение щелочного резерва — возникает в результате нарушения обмена веществ при белковом перекармливании, скармливании силоса, содержащего масляную кислоту, при атониях преджелудков, родильном парезе, ацетонемии, диабете, ящуре и других заболеваниях.
Алкалоз, или базеоз — повышение щелочного резерва — встречается редко и наблюдается главным образом при пироплазмозе и кровопятнистой болезни лошадей, селикозе, фибринозном воспалении легких, шоке.
Определение общего белка в сыворотке крови.
Общий белок определяют рефрактометрически, а белковые фракции — методом электрофореза на бумаге. Количество общего белка и соотношение белковых фракций в сыворотке крови здоровых животных приведены в табл. 37.
Определение каротина в сыворотке крови (по Ф. А. Рачевскому).
В пробирку вносят 0,2 мл свежей сыворотки крови, приливают
4 мл спирта (96°) и тщательно смешивают. Добавляют 2 мл петролеиного эфира или чистого бензина с температурой кипения ниже /о . Содержимое пробирки хорошо перемешивают и оставляют на несколько минут. Затем приливают по каплям 2 мл дистиллированной воды, в результате чего между спиртом и эфиром образуется поверхность раздела. Каротин находится в петролейном эфире бензине) и окрашивает верхний слой жидкости в желто-зеленоватыи цвет. Петролеиныи эфир с каротином насасывают в микропику и наливают его по каплям в фарфоровую чашечку, подогрело до 40 . После нанесения каждой капли ожидают полного высыхания её.
Для проверки результатов рекомендуется параллельно ставить такую же пробу со стандартным раствором каротина.
Содержание каротина в сыворотке крови вычисляют но формуле:
где: х — количество каротина (в мг%),
К — количество миллилитров эфирного (или бензинового) экстракта каротина, израсходованного на образование j желтого кольца.
В норме у крупного рогатого скота содержится в сыворотке крови от 0,5 до 3,0 мг% каротина, у кур — 0,3-0,5 мг%.
Определение кальция в сыворотке крови (по де-Ваарда).
В центрифужную пробирку (лучше с остроконечным дном) берут 1 мл сыворотки крови, прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора щавелевокислого аммония, тщательно смешивают, оставляют на 30 минут, после чего жидкость центрифугируют 15 минут при 1,5-2 тыс. оборотов в минуту. Затем отсасывают жидкость над осадком пастеровской пипеткой с грушей (или сливают). К осадку добавляют 2 мл 2%-ного раствора аммиака, смешивают встряхиванием и центрифугируют 10 минут; промывание осадка повторяют еще два раза. В заключение отсасывают жидкость над осадком, к осадку добавляют 0,3 мл 50%-ного раствора серной кислоты, смешивают. Ставят пробирку в водяную баню при температуре 50-70° и выдерживают до растворения осадка, изредка помешивая жидкость стеклянной палочкой.
После растворения осадка жидкость титруют 0,01 н. раствором перманганата калия до появления бледно-розового окрашивавия, сохраняющегося не менее 1-2 минут.
Одновременно ставят «слепой» опыт. В пробирку берут вместо 1 мл сыворотки крови 1 мл дистиллированной воды, а все остальное производят таким же образом, как и в основном опыте.
Подсчет количества кальция производят по формуле:
х = 0,2-(а — б)*К*100,
Где: х — искомое количество кальция в сыворотке крови (в мг%)
а — количество миллилитров 0,01 н. раствора перманганата калия, израсходованного на титрование в основном опыте,
б — количество миллилитров 0,01 н. раствора перманганата калия, израсходованного на титрование в «слепом» опыте.
К — фактор к титру 0,01 н. раствора перманганата калия. В норме у животных количество кальция в сыворотке составляет (в мг %): у крупного рогатого скота — 9,5-12,5, овцы — 11-12,5, козы — 11,0-13,0, верблюда — 9,1-13,3, лошади — 12,0-16,0, свиньи — 11,5-12,5, собаки — 9,5-12,0, курицы — 170-22,0.
Гипокальцемия — уменьшение количества кальция в сыворотке крови — встречается при рахите, остеомаляции, нефрозе, родильном парезе, бронхопневмонии, экссудативном плеврите, анемии, лейкемии, диабете, остро протекающих тяжелых заболеваниях, хроническом сепсисе, тетании, недостаточности паращитовидных желез, лейшманиозе, контагиозной плевропневмонии, кровопятнистой болезни и др.
Гиперкальцемия — увеличение содержания кальция в сыворотке крови — наблюдается при остеомаляции, деформирующих артритах, гипервитаминозе, гиперпаратиреоидизме, сердечной недостаточности и т. д.
Определение неорганического фосфора в сыворотке крови (по Аммону и ГинсСергу).
В пробирку вносят 1 мл сыворотки крови, добавляют 3 мл дистиллированной воды и 1 мл 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, хорошо смешивают и, дав постоять 10 минут, фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют.
Затем берут две широкие пробирки и в одну из них (опыт) вносят 2,5 мл фильтрата сыворотки, 0,5 мл раствора молибдена, 1 мл 1 %-ного раствора аскорбиновой кислоты и до 6 мл дистиллированной воды. В другую пробирку (стандарт) вливают 1 мл рабочего стандартного раствора фосфора, 1 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 20°о-ного раствора трихлоруксусной кислоты, 0,5 мл раствора молибдена, 1 мл 1 %-ного раствора аскорбиновой кислоты и до 6 мл дистиллированной воды. Реактивы в обе пробирки следует вносить по возможности одновременно. Содержимое пробирок хометре размешивают и через 10 минут колориметрируют в колори.
Количество неорганического фосфора определяют по формуле:
Где; X искомое количество неорганического фосфора (в мг%),
H1 — высота столбика жидкости с фильтратом сыворотки крови (в мм),
H2 — высота столба жидкости со стандартным раствором фосфора (в мм).
Раствор молибдена готовят смешиванием двух растворов:
1) молибденовокислого аммония — 25 г, дистиллированной воды — 300 мл;
2) дистиллированной воды — 125 мл, концентрированной серной кислоты — 75 мл.
Рабочий стандартный раствор фосфора готовят из основного стандартного раствора фосфора. Для приготовления последнего (его готовят впрок) берут 4,388 г однозамещенного фосфорнокислого калия, предварительно высушенного в эксикаторе, и добавляют дистиллированной воды до 1 л. Хранят раствор в темной посуде с добавлением к нему 0,5 мл хлороформа.
Для приготовления рабочего стандартного раствора фосфора, что делают в день исследования, берут 1 мл основного раствора и добавляют к нему дистиллированной воды до 50 мл; в 1 мл рабочего раствора содержится 0,02 мг фосфора.
Для приготовления 1-ного раствора аскорбиновой кислоты необходимо взять 1 г аскорбиновой кислоты и добавить 0,1 н. раствора соляной кислоты до 100 мл. Раствор хранят в темной посуде, годен не более одного месяца.
В сыворотке крови животных в норме содержится неорганического фосфора (в мг%): у крупного рогатого скота 4,5-7,5, овцы — 7-8, козы — 6-8, верблюда — 5,1-6,7, лошади — 7-7,3,: свиньи — 5-6, собаки — 3-5,8, кошки — 6-8, кролика — 6-7.
Гипофосфатемия— уменьшение количества неорганического фосфора в сыворотке крови — наблюдается При рахите, остеомаляции, гиперпаратиреоидизме, сахарном диабете, недостатке витамина D.
Гиперфосфатемия — увеличение содержания неорганического фосфора — отмечается при гипервитаминозе D, заживлении переломов костей, нефрозах, гломерулонефритах, гипопаратирериДизме.
Подсчет форменных элементов крови у животных.
В клинической практике обычно определяют количество эритроцитов и лейкоцитов, а иногда и тромбоцитов.
Определение количества эритроцитов.
Подсчет количества эритроцитов производят в счетной камере с сеткой Горяева (камера Горяева). Кровь набирают в смеситель (меланжер) до метки «0,5», а затем до метки «101» насасывают жидкость-разбавитель, при этом кровь разбавляют в 200 раз. В качестве разбавителя применяют 0,9%-ный или 3%-ный раствор поваренной соли, жидкость Гайема (сулема — 0,5 г, хлористый натрий — 1 г, сернокислый натрий — 5 г, дистиллированная вода — 200 мл) или раствор йода (йод кристаллический — 0,3 г, йодистый калий — 0,4 г, лимоннокислый натрий — 2 г, дистиллированная вода — 100 мл).
Кровь с разбавителем тщательно перемешивают 2-3 минуты, удаляют 2-3 капли из капилляра меланжера, а следующую каплю наносят под заранее притертое покровное стекло на сетку камеры- Заряженную камеру закрепляют на предметном столике микроскопа и выжидают 2-3 минуты, чтобы эритроциты осели на дно. Для обнаружения сетки камеры пользуются объективом 8, а при подсчете эритроцитов применяют объектив 40. Подсчет начинают с левого большого квадрата (разделенного на 16 маленьких квадратиков), а затем подсчитывают эритроциты еще в 4 больших квадратах, расположенных по диагонали сеткикамеры.
Количество эритроцитов в 1 мм3 крови определяют по формуле:
где: х — искомое количество эритроцитов в 1 мм 3 крови,
а — сумма эритроцитов, подсчитанных в 5 больших квадратах,
б — степень разведения крови,
в — количество маленьких квадратиков в 5 больших квадратах,
4000 объем разбавленной крови над одним маленьким
квадратиком сетки камеры (в мм 3 ). При разведении крови (1 : 200) и подсчете эритроцитов в 5 больших квадратах формула значительно упрощается и будет выглядеть так:
х = а * 10 000.
Эритропения, или олигоцитемия, — уменьшение количества эритроцитов — характерна для первичных и вторичных анемий. Сопоставление числа эритроцитов с количеством гемоглобина позволяет делать важные дифференциально-диагностические заключения.
Эритроцитоз, или нолицитемия — увеличение числа эритроцитов — встречается при сгущении крови вследствие потери организмом воды при обильном потоотделении, поносах, во время образования экссудатов и транссудатов, в начальной стадии инфекционных и лихорадочных процессов, при непроходимости тонкого отдела кишечника.
Здоровых животных приведено в табл. 38.
Лейкоцитоз, или гиперлейкоцитоз — повышение количества лейкоцитов — встречается очень часто. Лейкоцитоз может быть:
1) физиологическим — при беременности, у новорожденных, после сильной физической нагрузки и т. д.; 2) медикаментозным — после введения белковых препаратов, алкалоидов, жаропонижающих средств и т. д., 3) патологическим — при инфекционных болезнях, воспалительных процессах, интоксикациях и др.
Лейкопения — понижение числа лейкоцитов — наблюдается при тяжелых инфекционных и токсических состояниях и свидетельствует об угнетении кроветворных органов или об их истощении.
Подсчет количества тромбоцитов (по Реес-Эккеру). В смеситель для лейкоцитов набирают до метки «0,5» консервирующую тромбоциты жидкость (лимоннокислый натрий — 3,8 г, 40%-ный формальдегид — 0,2 мл, бриллианткрезиловая синь — 0,1 г, дистиллированная вода — до 100 мл). Затем в смеситель до метки «1» набирают капиллярную кровь из уха и до метки «И» раствор Тюрка (для гемолиза эритроцитов) и хорошо размешивают (2- 10 минут). После этого заряжают счетную камеру, которую на 15-20 минут ставят в чашку Петри с комочком мокрой ваты на дне для ускорения оседания тромбоцитов.
Тромбоциты подсчитывают в 20 больших квадратах сетки (т. е. в 320 маленьких квадратиках). Определяют количество тромбоцитов в 1 мм 3 крови по формуле:
где: х — искомое количество тромбоцитов в 1 мм3 крови, а — количество подсчитанных клеток, б — степень разведения крови (в 20 раз), в — количество сосчитанных маленьких квадратиков (320),
1/4000 — объем разведенной крови в камере над одним маленьким квадратиком сетки (в мм 3 ). сокращенном виде формула выглядит так:
Тромбоцитоз — увеличение числа тромбоцитов — встречается при инфлюэнце лошадей, плеврите, миоглобинурии, саркоматозных поражениях и др.
Тромбоцитопения — уменьшение количества тромбоцитов — наблюдается при инфекционной анемии лошадей, кровопятнистой болезни, стахиботриотоксикозе.
Подсчет форменных элементов крови у птиц.
Техника подсчета кровяных клеток у птиц несколько затруднена. Это объясняется тем, что у них как эритроциты, так и тромбоции — формы и имеют ядра, поэтому в обычных условиях не дифференцируются. Эти кровяные клетки не разрушаются уксусной кислотой, что препятствует определению числа лейкоцитов. В связи с этим при подсчете форменных элементов крови у птиц вначале в счетной камере подсчитывают общее количество клеток (эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов), а затем в окрашенном мазке каждые 1000 эритроцитов устанавливают число лейкоцитов и тромбоцитов. В заключение перерасчетом определяют абсолютное количество отдельных видов клеток в 1 мм 3 крови.
Определить количество клеток в крови у птиц можно также прямым способом в камере Горяева, для чего применяют раствор с красителями. По К. С. Фоминой и В. И. Шмельковой, берут 0,1%-ный раствор азура на изотоническом растворе поваренной соли (раствор можно использовать в течение месяца). Кровь разводят в большом меланжере в соотношении 1 : 100 теплым раствором азура (38-40°). Немедленно после заполнения меланжера проиводят тщательное размешивание Крови встряхиванием кровомесителя. Через 10-15 минут заряжают камеру. Эритроциты подсчитывают в 5 больших квадратах, лейкоциты и тромбоция определяют по всей сетке камеры (225 больших квадратов)Я Вычисление количества кровяных клеток производят по обычным формулам.
Определение лейкоцитарной формулы.
Лейкоцитарную формулу определяют в окрашенных мазках крови.
Приготовление мазков крови. Мазки готовят на чистых обезжиренных предметных стеклах.
Хороший мазок доля;ен быть тонким, равномерным (несколько уже предметного стекла), длинным (не менее 2/3 стекла) и иметь свободные концы.
Фиксация мазков. Мазки высушивают па воздухе фиксируют в метиловом спирте 3-5 минут или используют другие фиксаторы: этиловый спирт — 20 минут, смесь эфира со спиртом поровну — 20 минут, ацетон — 5 минут.I
Окраска мазков. Мазки окрашивают красками, растворенными в нейтральной дистиллированной воде. Для определения реакции воды применяют следующий метод. 50 мл воды,в химический стаканчик, добавляют одну каплю 0,2%-ного раствора. При кислой реакции вода окрашивается в красно-фиолетовый, при нейтральной — в бледно-розовый, а прощелочной — в желтовато-соломенный цвет. Усредняют кислую воду 1%-ным раствором двууглекислой соды, а щелочную 1%-ным раствором уксусной кислоты.
Указанные растворы добавляют по каплям к окрашенной индикатором воде до появления темно-розового цвета. Затем вычисляют количество усредняющего створа на больший объем дистиллированной воды. Раскраску мазков производят по Романовскому-Гимза. Для этого помещают над чашкой на стеклянные палочки мазком вверх, наливают на них раствор краски Романовского — Гимза (на 1 мл нейтральной дистиллированной воды берут 1-2 капли краски) и красят 20-35 минут в зависимости от температуры окружающего воздуха. Можно также мазки положить в чашку Петри на спички (мазком вниз) и подлить под них краску. Затем мазок промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Правильно окрашенный мазок должен иметь розовато-фиолетовый оттенок.
Мазки можно окрашивать и без предварительной фиксации их. Для этого на высушенный мазок наносят 20 (30) капель спиртового раствора краски Романовского -Гимза (на 20 мл спирта берут 5 мл краски). Через 5 минут И краске добавляют 20 (30) капель дистиллированной воды и продолжают окрашивать еще 20-25 минут. Краску смывают водопроводной водой. Мазки сушат на воздухе.
Техника выведения лейкоцитарной формулы.
Лейкоцитарная формула выражает процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов. В норме она слагается из соотношения базофилов, эозинофилов, нейтрофилов (юных, палочко ядерных и сегменто ядерных), лимфоцитов, моноцитов (табл. 39).
Для определения лейкоцитарной формулы в окрашенном мазке крови обычно подсчитывают 200 лейкоцитов. Количество клеток каждой формы лейкоцитов делят на 2, получая процентное выражение.
При подсчете лейкоцитов используют метод Шиллинга. Для этого на препарате выбирают 4 участка — два в начальной и два в конечной его части. В каждом участке отыскивают под иммерсионной системой микроскопа край мазка, подсчитывают здесь лейкоциты и передвигают препарат вглубь последовательно еще на 3 поля зрения. Затем смещают мазок на одно поле в сторону и возвращаются снова к краю препарата. Такие смещения мазка производят до тех пор, пока не будет подсчитано 50 лейкоцитов на одном участке. После этого находят таким же образом по 50 лейкоцитов на каждом другом участке мазка. Всего должно быть подсчитано 200 лейкоцитов.
Регистрацию отдельных форм лейкоцитов осуществляют или на специальном одиннадцати клавишном счетчике или в таблице Егорова.
Определение лейкоцитарного профиля.
Для более точного и полного суждения об изменениях в лейкоцитарном составе крови необходимо определить лейкоцитарный профиль, который выражает абсолютное содержание отдельных форм лейкоцитов в 1 мм3 крови. С этой целью подсчитывают общее количество лейкоцитов
в 1 мм 3 крови и выводят лейкоцитарную формулу. Затем количество лейкоцитов умножают последовательно на процент каждого вида клеток лейкоцитарной формулы и делят на 100.
В лейкоцитарной формуле при различных заболеваниях могут происходить следующие основные изменения:
1) увеличение или уменьшение процента тех или иных клеток — нейтрофилия или нейтропения (резкая нейтропения называется агранулоцитозом), лимфоцитоз или лимфопения, эозинофилия или эозинопения, моноцитоз или моноцитопения, базофилия;
2) появление молодых незрелых форм (юные, миелоциты и даже промиелоциты);
3) появление дегенеративных изменений в лейкоцитах — токсической зернистости и вакуолей в протоплазме, пикноза, лизиса, вакуолизации или полисегментации ядра, появление гигантских форм нейтрофилов.
Наиболее частым и практически самым важным является нейтрофильный лейкоцитоз. При этом лейкоцитозе наблюдается увеличение количества (повышение процента) незрелых нейтрофильных клеток в периферической крови, что именуется «сдвигом (ядра) влево», так как при записи лейкоцитарной формулы молодые клетки принято ставить слева от зрелых нейтрофилов.
По степени регенерации нейтрофильный лейкоцитоз разделяют на следующие три группы:
1) нейтрофилия с простым регенеративным сдвигом — количество палочкоядерных нейтрофилов возрастает не более чем на 13% при нормальном или несколько уменьшенном количестве сегментоядерных;
2) нейтрофилия с резким регенеративным (гиперрегенеративным) сдвигом — появляются юные, миелоциты и даже промиелоциты;
3) нейтрофилия с дегенеративным сдвигом — уменьшается количество сегментоядерных нейтрофилов, появляются атипичные клетки с дегенеративным ядром и протоплазмой, «сдвиг влево» углубляется за счет палочкоядерных, но без дальнейшего увеличения процента более молодых форм.
Определение качественных изменений клеток крови.
Исследование мазков крови, кроме определения лейкоцитарной формулы и лейкоцитарного профиля, позволяет также установить наличие тех или иных морфологических изменений эритроцитов и лейкоцитов, включая появление ядерных форм эритроцитов. В специально окрашенных мазках можно определить количество гранулоцитов (ретикулоцитов), т. е. эритроцитов с зернистой субстанцией. По количеству таких форм эритроцитов можно судить о степени регенерации крови.
источник
Материалы по патофизиологии / ИЗМЕНЕНИЯ В ЛЕЙКОГРАММЕ ПРИ ОСТРОМ ГНОЙНОМ И ХРОНИЧЕСКОМ ИНФЕКЦИОННОМ ПРОЦЕССЕ
ИЗМЕНЕНИЯ В ЛЕЙКОГРАММЕ ПРИ ОСТРОМ ГНОЙНОМ И ХРОНИЧЕСКОМ ИНФЕКЦИОННОМ ПРОЦЕССЕ
При остром гнойном процессе наблюдается выраженный лейкоцитоз. Лейкоцитоз – патогномоничный признак многих заболеваний.
Лейкоцитоз характерен при различных гнойных процессах — сепсисе, перитоните, менингите, пиометре, флегмоне (30-40 Г/л).
Причиной лейкоцитоза является стимуляция лейкопоэтической функции кроветворных органов в результате действия специфических возбудителей и факторов воспаления. Подобная реакция носит временный функциональный характер и обычно исчезает вместе с ликвидацией инфекционного агента и воспалительного очага. Инфекционные лейкоцитозы в ряде случаев характеризуются высокой степенью выраженности и омоложенным составом лейкоцитов (так называемые лейкемоидные реакции).
Ниболее информативны изменения нейтрофильных гранулоцитов.
Увеличение количества нейтрофильных гранулоцитов (нейтрофилез) и лейкоцитоз являются классической реакцией «белой» гемограммы на инфекционные и неинфекционные воспалительные процессы и некрозы тканей, которые вызывают повышенное потребление лейкоцитов.
Вначале (6-11 час) нейтрофилез обусловлен выходом зрелых нейтрофилов, находящихся в костном мозге (в костном мозге в 20-30 раз больше нейтрофилов, чем в крови). Через 2-3 дня нейтрофилез поддерживается продуктивностью костного мозга. В зависимости от формы клеточных ядер различают нейтрофилез со сдвигом формулы влево и вправо.
Нейтрофилез наблюдается при первичных и вторичных бактериальных инфекциях, а также при локальных инфекциях – абсцессы и пиометра.
Увеличение количества нейтрофилов наиболее характерно для инфекционных и гнойно-воспалительных процессов, причем выраженность нейтрофилеза и характер ядерного сдвига нередко указывают на стадию и тяжесть процесса. Незначительный нейтрофилез с небольшим ядерным сдвигом влево отмечается обычно при легкой форме заболевания, а значительный нейтрофилез при резком ядерном сдвиге влево – при тяжелой форме. Выраженный нейтрофилез с гиперлейкоцитозом нередко сопровождает тяжелую септическую инфекцию или гнойно-воспалительный процесс при хорошей сопротивляемости организма. Резкий нейтрофилез с небольшим лейкоцитозом свидетельствует о тяжелой септической инфекции при ослабленной сопротивляемости организма (т.к. лейкоциты быстро уходят в ткани, где осуществляется их основная функция).
Важным критерием, определяющим тяжесть инфекции и прогноз заболевания, служит качество нейтрофильного сдвига. При регенеративном сдвиге влево количество палочкоядерных нейтрофилов меньше сегментоядерных (зрелых), а общее количество нейтрофилов высокое. При дегенеративном сдвиге влево количество палочкоядерных нейтрофилов больше сегментоядерных при нормальном количестве нейтрофилов и сниженном количестве лейкоцитов. Если сдвиг влево нормализуется и количество нейтрофилов увеличивается – прогноз благоприятный. Так, тяжелые инфекции и гнойно-септические заболевания часто протекают с выраженным сдвигом влево вплоть до метамиелоцитов и миелоцитов, иногда даже до промиелоцитов (все эти формы присутствуют в крови обычно в небольшом проценте). Наряду со сдвигом нейтрофилов влево могут отмечаться резкие дегенеративные изменения в их ядрах и цитоплазме (нейтрофилы с токсической зернистостью и вакуолизацией цитоплазмы и ядра), что является неблагоприятным прогностическим моментом. Ядерный сдвиг нейтрофилов вправо (индекс сдвига 0,04-0,03) при инфекционных и воспалительных заболеваниях обычно указывает на благоприятное течение заболевания. Легкие воспалительные процессы сопровождаются нейтрофилезом без сдвига влево, лимфоцитозом и моноцитозом.
При ряде хронических инфекций (хронический сепсис, затяжной септический эндокардит) может отмечаться длительный абсолютный моноцитоз.
Моноцитоз может встречаться как при хронических, так и при острых воспалительных процессах.
Моноцитоз без сдвига лейкоформулы влево и нормальном количестве нейтрофилов наблюдается при хроническом воспалении.
Лошадь в феврале разорвала небрежно хранившийся мешок с поваренной солью, съела до 1кг соли. Какие изменения состава крови возникнут у этого животного и как их предупредить.
Потребление поваренной соли млекопитающими и птицами в больших количествах приводит к острым и хроническим отравлениям.
Молодые животные более чувствительны к повышенной концентрации соли, истощенные животные погибают раньше и от меньших доз. Отсутствие воды у животных усиливает токсичность соли.
Смертельная доза хлористого натрия составляет в среднем 3 — 4 грамма на килограмм веса.
Долгое потребление повышенных доз соли ведет к хроническому отравлению животных.
В крови повышается концентрация ионов Na + , Cl — , происходит обезвоживание различных клеток органов и тканей, в первую очередь эритроцитов.
При отравлении солью происходит нарушение работы центральной и периферической нервных систем, сначала происходит кратковременное усиление обменных процессов, за которым следует длительное их торможение.
Высокие концентрации соли раздражают слизистые оболочки желудка и тонкого кишечника. В результате, как правило, развивается гастроэнтерит, который сопровождается кровоизлияниями. В тяжелых случаях смерть наступает от асфиксии.
Депрессивное состояние и параличи появляются рано. Животные отказываются от корма, но жадно пьют воду. Развивается асфиксия, видимые слизистые оболочки становятся синюшными. Возникают дрожь мышц, судороги. Температура у животных не изменяется.
Первая помощь заключается в насыщении организма водой: нужно дать ее животным как можно больше. Если они сами ее уже не пьют, делают глубокие и обильные клизмы, дают слизистые отвары с большим количеством воды. Для поддержания тонуса организма полезно введение под кожу раствора кофеина.
При гематологическом обследовании больной собаки (1г) на фоне плохого аппетита, вялости, истощения, повышенной утомляемости
была выведена след. лейкоцитарная формула:
число лейкоцитов – 11,4 * 10 9 /л
число эритроцитов – 4,7 * 10 12 /л
Вычислить лейкоцитарный профиль, определить характер гематологических сдвигов, сделать предположение о причине нарушений системы крови.
источник